飼料色氨酸含量測(cè)定

飼料色氨酸含量測(cè)定第一頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四色氨酸（Try）

色氨酸β-吲哚基丙氨酸，為白色或微黃色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無(wú)臭，味微苦。水中微溶，在乙醇中極微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氫氧化鈉試液或稀鹽酸中溶解。魚(yú)類的必需氨基酸。色氨酸是植物體內(nèi)生長(zhǎng)素生物合成重要的前體物質(zhì)。第二頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94原理飼料中蛋白質(zhì)經(jīng)堿水解后，降解成多肽和游離的氨基酸，在酸性介質(zhì)中，氧化劑存在下，色氨酸吲哚環(huán)與對(duì)二甲氨基苯甲醛反應(yīng)生成藍(lán)色化合物，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與色氨酸含量成正比。第三頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94試劑除注明者外均為分析純。水為蒸餾水。硫酸溶液：量取589mL硫酸徐徐加入約350mL水中，冷卻后用水稀釋至1L。1％對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液：1.0g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶于21.2mol/L硫酸中并定容100mL。0.2％亞硝酸鈉溶液（m/V）。10％氫氧化鉀溶液（m/V）。L-色氨酸，色譜純。L-色氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取25.0mgL-色氨酸于小燒杯中，加少量0.1mol/L氫氧化鉀溶液使之溶解，定量地轉(zhuǎn)移到250mL棕色容量瓶中，用水定容，濃度為100μg/mL。注：本標(biāo)準(zhǔn)溶液4℃冰箱中保存，一個(gè)月內(nèi)使用，濃度不變。第四頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94儀器、設(shè)備分析天平：感量0.1mg。分光光度計(jì)。離心機(jī)：轉(zhuǎn)速4000r/min。實(shí)驗(yàn)室用粉碎機(jī)。培養(yǎng)箱。容量瓶：25mL、50mL、250mL。10mL具塞試管?？潭任埽?.5mL、2mL、5mL、25mL。第五頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94試樣的制備1.選取有代表性的試樣，按四分法縮分至200g，粉碎，全部通過(guò)0.25mm孔徑篩（60目）。2.按GB6433脫脂并測(cè)定脂肪含量。脫脂樣品風(fēng)干后，混勻，裝入密封容器內(nèi)備用。第六頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94分析步驟1.工作曲線的繪制（1）吸取色氨酸濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50mL分別置于25mL棕色容量瓶中用水定容，搖勻。溶液濃度分別為20、30、40、50、60、70μg/mL。（2）吸取各濃度溶液1mL，分置具塞試管中，空白管加1mL水向每支試管內(nèi)加入氫氧化鉀溶液1mL，混勻，將試管放入冷水盆中，加5mL對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液，從冷水盆中取出試管，搖勻，在室溫（20～30℃，下同）放置30min。（3）向上述每支試管內(nèi)加0.2mL亞硝酸鈉溶液，搖勻，室溫放置25min。（4）以空白管調(diào)零，在590nm波長(zhǎng)下，以1cm光徑測(cè)定各溶液吸光度值。（5）以色氨酸濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制工作曲線，或列出回歸方程式。第七頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-942.樣品測(cè)定（1）稱樣：按附表A建議的稱樣量稱取脫脂試樣兩份，精確至0.1mg。（2）水解：將試樣置于50mL容量瓶中，在輕輕振搖中緩慢加入25mL氫氧化鉀溶液，使試樣濕潤(rùn)且不粘壁，置40±1℃培養(yǎng)箱中水解16～18h。（3）離心：取出水解液冷卻至室溫后，用水定容，搖勻，取部分水解液以4000r/min轉(zhuǎn)速離心15min。（4）顯色：取2mL上清液置具塞試管中，并將試管放入冷水盆中，加入5mL對(duì)二甲氨基苯甲醛溶液，搖勻。每個(gè)試樣另取2mL上清液于具塞試管中，加5mL硫酸溶液作為樣品空白，搖勻，室溫放置30min。然后向每支試管內(nèi)加入0.2mL亞硝酸鈉溶液，搖勻，室溫放置25min。（5）比色：以樣品空白調(diào)零，在590nm波長(zhǎng)處1cm光徑測(cè)定樣品溶液的吸光度值。

第八頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94第九頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94計(jì)算公式第十頁(yè)，共十一頁(yè)，編輯于2023年，星期四測(cè)定方法：分光光度法GB/T15400-94結(jié)果的表示兩個(gè)平行樣品的測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示，保留二位小數(shù)。試樣脂肪含量小于4%時(shí)，式(1)和(2)所得結(jié)果在允許偏差