毒效雙組分控制有毒中藥附子臨床單煎工藝研究

毒效雙組分控制有毒中藥附子臨床單煎工藝研究【摘要】目的研究加水量、煎煮時間、煎煮次數(shù)、濃縮條件等水煎工藝控制因素對附子毒效組分含量相關(guān)性的影響。方法以生附子和常用炮制品為對照，采用離子對分光光度度法與異羥肟酸鐵法分別測定總生物堿、酯型生物堿組分含量，并以毒效因子［W=/TA］為綜合評價指標(biāo)，研究工藝因素對毒效因子的影響。結(jié)果不同炮制品和生附子藥材毒效因子差別較大；水煎過程中，煎煮條件對生品影響較大，黑順片的毒效因子基本保持穩(wěn)定為97%左右，白順片為81%，煎煮時間和次數(shù)是主要影響因素。結(jié)論炮制品水煎過程毒效因子的相對穩(wěn)定可能是附子湯劑發(fā)揮藥效、安全使用的先決條件，毒效組分不同比例可能是附子不同炮制品發(fā)揮不同藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】附子；總生物堿；酯型生物堿

Abstract：ObjectiveToresearchtheeffectontheAconitetoxicodynamicscomponent‘scontentrelatedtodecoctionprocesscontrollingfactorssuchaswatervolume,boilingtime,boilingnumbers,concentrateddecoctionCRALPandcommonprocessedproductsasacontrol,ionpairspectrophotometryandaciddyecolorimetryandhydroxamicacidironspectrophotometrywereusedtodeterminethecontentoftotalalkaloidsandesteralkaloids，andtoxicodynamicsfactor［W=(TAEA)/TA］forthecomprehensiveevaluationindextostudytheprocessfactorsontheimpactoftoxicodynamicsprocessedproductsandCRALPshowedobviousdifferencesintoxicodynamicswaterdecoctionprocess,decoctingconditionsshowedgreatimpactonCRALP,thetoxicodynamicsfactorofBPLRAbasicallyremainedstableforabout97%,andWPLRA(Whitepreparedlateralrootofaconite)81%.Decoctedtimeandtimeswerethemainfactors.ConclusionDecoctiontoxicodynamicsfactorrelativestabilitymayexertaprerequisitefortheeffectandsafeuse；differentproportionsoftoxicodynamicscomponentsmaybematerialbasisofdifferentprocessedproducts.

Keywords：RALP(Radixaconitilateralispreparata)；TA(Totalalkaloids)；EA(Esteralkaloids)

附子(RadixAconitiLateralisPreparata)來源于毛茛科烏頭屬植物烏頭AconitumcarmichaeliDebx．的側(cè)生子根及加工品，是四川道地藥材之一。自醫(yī)圣張仲景首創(chuàng)生附子用于湯劑至今，是臨床常用傳統(tǒng)有毒中藥，回陽救逆療效卓著。臨床實(shí)際過程中，水量、火候、時間等條件很難掌握完全一致，雖然現(xiàn)在許多醫(yī)院和藥房的代煎提高了湯劑工藝的穩(wěn)定性，但其工藝參數(shù)缺乏科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。目前文獻(xiàn)報道烏頭總堿對附子提取物提取工藝進(jìn)行質(zhì)量控制研究［1～3］。烏頭類總生物堿是其主要有效組分，是烏頭類中藥常見質(zhì)量控制指標(biāo)；烏頭類雙酯性生物堿是毒性組分，是烏頭類中藥主要毒性控制指標(biāo)［4］。本研究嘗試?yán)枚拘ЫM分含量控制臨床湯劑工藝的影響因素，以毒效因子［/TA×100%］為評價指標(biāo)，對生附子及其常用炮制品的湯劑水煎工藝條件進(jìn)行考察，為闡明附子臨床湯劑中附子毒效成分的相關(guān)性和應(yīng)用的合理性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1儀器與材料

分光光度計：PerkinElmerLambda35型；電子分析天平：Sartorius系列十萬分之一；pHS2型酸度計(上海雷磁儀器廠)。對照品：烏頭堿(110720200208，中國藥品生物制品檢定所)；乙醇、溴甲酚綠、氯仿、乙醚、氨水皆為分析純。其他試劑自備。

生附子由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室嚴(yán)鑄云副教授鑒定為烏頭AconitumcarmichaeliDebx．的側(cè)生子根及加工品。黑順片，白附片為同批加工品，購于四川江油GAP生產(chǎn)基地，質(zhì)量均符合藥典規(guī)定。

2方法與結(jié)果

藥材毒效因子的測定離子對溴甲酚綠法測定總生物堿是經(jīng)典的生物堿測定方法，本研究參考文獻(xiàn)［5］中的方法，酯型生物堿測定方法參考2005版《中國藥典》［4］制川烏項(xiàng)下測定法測定。水提液樣品的前處理略做修改，并進(jìn)行了方考察，結(jié)果符合穩(wěn)定性、精密度、加樣回收率均達(dá)到定量要求。依前法測定藥材TA和EA，并計算毒效因子，結(jié)果見1。

結(jié)果表明，附子炮制后毒效成分比例變化有差異，黑順片中毒性成分占總生物堿比例增大，白附片中毒性成分占總生物堿比例減少。提示不同炮制方法改變了毒效組分比例。

水煎過程控制研究

供試液的制備分別取生附子、黑順片，白附片粗粉(1號篩)適量，精密稱定，置圓底燒瓶中，加10倍量水，浸泡30min，回流，快速燒開后，保持微沸2h；趁熱粗濾，用適量水洗滌殘渣3次，合并洗液和濾液，3000r/min離心(5min)，過濾，70℃下減壓濃縮至1∶1體積；用氨水調(diào)pH=9～10，TA測定用乙醚一氯仿(3:1)的混合液、EA測定用乙醚萃取3次，置蒸發(fā)皿中水浴低溫?fù)]干溶劑，備用。

加水量的影響取3批藥材適量各7份，分別加6，8，10，12倍量水，依“”項(xiàng)方法制備，備用。依前法測定TA和EA，并計算毒效因子，結(jié)果見圖2。

結(jié)果表明，水煎過程顯著降低了各樣品的毒性，提高了其毒效因子水平；其中黑順片影響最大，白附片影響最小。不同加水量對炮制品毒效因子影響較小。提示水煎過程中毒效組分溶出水平有差異，加水量對其影響較小。

煎煮時間的影響取3批藥材適量各7份，分別加水煎煮2，4，6，8，12h，依“”項(xiàng)方法制備，備用。依前法測定TA和EA，并計算毒效因子，結(jié)果見圖3。

結(jié)果表明，煎煮時間對生、炮制品的毒效因子影響截然不同；其中對生附子影響較小，對炮制品而言，6h后黑順片和白附片毒效因子水平正好相反。提示控制煎煮時間可以改變不同炮制品的毒效因子水平。

煎煮次數(shù)的影響取3批藥材適量各7份，分別加水煎煮3次A，B，C依“”項(xiàng)方法制備，備用。依前法測定TA和EA，并計算毒效因子，結(jié)果見圖4。

結(jié)果表明，煎煮次數(shù)顯著改變生、炮制品的毒效因子；其中生品影響最大。提示單煎有利于毒效組分的穩(wěn)定。

濃縮條件的影響取3批藥材適量各4份，濃縮分別采用60℃，70℃，80℃減壓濃縮，100℃蒸發(fā)至1∶1，備用。依前法測定TA和EA，并計算毒效因子，結(jié)果見5。

結(jié)果表明，濃縮條件對生附子毒效因子影響很大，對炮制品影響較小。提示炮制品毒效組分比較穩(wěn)定，能耐熱。

3討論

湯劑一直是中藥的主要形式,中藥湯劑的療效已被歷史所證實(shí)。目前湯劑的研究在中藥配伍和方劑研究領(lǐng)域多有報道［6］，但在臨床煎煮過程中，受客觀條件和患者主觀條件的影響，加水量、火候、時間等影響因素很難掌握完全一致，隨意性很大。尤其是象附子類的有毒中藥，煎煮用法與其毒、效有直接關(guān)系，常導(dǎo)致中毒事故的發(fā)生。2005版《中國藥典》規(guī)定的加工品就有鹽附子、黑順片、白附片、炮附片等，而歷史使用的炮制品種有七十多種，還有生品入藥的。一般認(rèn)為附子的總生物堿和酯型生物堿、雙酯性生物堿由新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿3種主要的毒性生物堿組成，不同來源的含烏頭類生物堿藥材，3種成分含量差別甚大。附子生物堿組分被公認(rèn)為有效組分，其毒性組分是烏頭類雙酯型生物堿。但很難從單一指標(biāo)的量上證明某類成分或某一成分在發(fā)揮臨床穩(wěn)定的療效。

研究已證明附子炮制解毒的原理是以烏頭堿為代表烏頭類雙酯型生物堿主要通過水解成單酯型烏頭生物堿和烏頭原堿的方式達(dá)到解毒的目的［7］。結(jié)果表明，附子在炮制成黑順片后毒效因子降低了20%，白附片提高了7%?？梢姴煌椒ㄅ谥坪蠖拘б蜃语@著不同。文獻(xiàn)表明，炮制后酯性生物堿含量顯著下降［8］。這可以為毒效因子提高提供依據(jù)，但不能解釋黑順片的下降問題。

在煎煮過程中，總生物堿的溶出率在50%～80%間，酯型生物堿在1%50%間。實(shí)際上生物堿的水溶解度不僅受生物堿的組成及溶解性決定，在植物體內(nèi)存在形式、炮制輔料、炮制過程對存在形式與組成的影響、水煎工藝因素等對其毒效成分含量變化均有較大影響。水解的進(jìn)行既需要一定的溶出量，更需要水解的條件才能進(jìn)行，水解的條件不同水解的方式不同，是酸性水解或堿水解，同時水的酸堿性、水溫、時間、濃度、其他成分等均對其量有較大影響。文獻(xiàn)也表明，酯型生物堿不僅存在水解，還存在酯交換反應(yīng)［9］。而研究表明煎煮過程中，3種生熟附子的毒效因子維持在81%～97%的水平，炮制品間更接近些。預(yù)示炮制不是為拉開毒效因子的差距，而是為湯劑中毒效因子的穩(wěn)定。

自指紋圖譜技術(shù)應(yīng)用于中藥起來，中藥成分間的比例關(guān)系是指紋圖譜中最重要的化學(xué)計量關(guān)系之一［10］，也是合理評價多組分中藥的一條有效途徑。因此，本課題選用選用毒效組分相關(guān)指標(biāo)研究中藥臨床應(yīng)用的合理性更具有非常重要的實(shí)際意義。同時炮制品水煎過程中水和溶出成分對毒效組分的穩(wěn)定發(fā)揮了更大的作用。這預(yù)示炮制和煎煮的過程不僅有利于減毒，更有利于藥效成分的穩(wěn)定。附子炮制品毒效因子的穩(wěn)定可能是附子湯劑使用發(fā)揮穩(wěn)定藥效、安全使用的基石，毒效組分合理比例可能是附子發(fā)揮不同藥效的基礎(chǔ)。

實(shí)驗(yàn)中，我們在選用四川道地中藥，選用了3批藥材，炮制品為同批生附子加工而成，質(zhì)量經(jīng)檢驗(yàn)符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。為規(guī)范水煎過程，實(shí)驗(yàn)中采用了電熱水浴回流提取工藝，對火力和水沸程度采用溫度和時間相結(jié)合的控制方式，盡量減少實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差，提高湯劑研究的規(guī)范性，提高湯劑的量化水平。臨床湯劑應(yīng)用是中醫(yī)臨床用藥的主要形式，我們研究團(tuán)隊在國家自然科學(xué)基金重大項(xiàng)目的大力支持下，開展了大量相關(guān)的基礎(chǔ)性研究，堅持中藥“性效用”相結(jié)合的原則［11］，研究中藥的物質(zhì)基礎(chǔ)必須緊緊抓出中醫(yī)臨床運(yùn)用這個主線，尤其是許多中藥成分如生物堿、苷類、揮發(fā)油等成分在產(chǎn)地采收、加工、炮制、臨床應(yīng)用、制劑過程中可能發(fā)生結(jié)構(gòu)上的變化，從而帶來功效的根本性的變化。要求醫(yī)生和藥師在臨床應(yīng)用毒性中藥時應(yīng)重視煎煮條件對藥效的影響，科研工作應(yīng)堅持“從臨床中來，到臨床中去”的宗旨，加強(qiáng)中藥臨床用法對藥效的基礎(chǔ)研究，推動中醫(yī)臨床的科學(xué)化進(jìn)程。

【參考文獻(xiàn)】

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［6］劉筱藹，吳偉康，梁天文.煎煮方法和藥物