乙肝小三陽(yáng)血清HBV

乙肝小三陽(yáng)血清HBVDNA定量檢測(cè)及其與前S1關(guān)系的研究

［摘要］目的：檢測(cè)乙型肝炎小三陽(yáng)患者HBVDNA含量，并與前S1抗原(PreS1)進(jìn)行比較分析。方法：收集351例乙型肝炎小三陽(yáng)患者血清和30例正常體檢者血清，用ELISA方法檢測(cè)前S1抗原，用熒光定量PCR方法定量檢測(cè)HBVDNA。結(jié)果：HBsAg、抗HBe、抗HBc陽(yáng)性(小三陽(yáng))患者HBVDNA檢出率為%(×106copies／ml)，前S1抗原檢出率為%。結(jié)論:HBeAg轉(zhuǎn)陰者也存在病毒復(fù)制，HBVDNA與前S1抗原相關(guān)性較好，對(duì)于乙型肝炎患者在常規(guī)血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的基礎(chǔ)上對(duì)HBVDNA數(shù)量進(jìn)行動(dòng)態(tài)檢測(cè)有助于臨床診斷、療效觀察及預(yù)后判斷。

［關(guān)鍵詞］乙型肝炎；HBVDNA；前S1抗原

StudytheRelationshipofHBVDNAQuantitativelyDetectionandPreS1forthePatientsofHepatitisBwithPositiveofHBsAg、AntiHbeandAntiHBc

Abstract：ObjectiveTodeterminehepatitisBvirusDNA(HBVDNA)andpreS1antigeninpatientswithhepatitisBandexpoloretheirdifferentclinical351positiveserumofHBsAg,antiHBe,antiHBcofhepatitisBand30healthymanwrerS1antigenandHBVmarketsweredetectedwithELISAandHBVDNAwithfluorescentquantitativePCR(FQPCR)ThepositiveratesofHBVDNAandPreS1antigenwere%(×106copies／ml)、%respectiveinpatientswithhepatitisBofwhichHBsAg、antiHBe、antiHBcwereTherewerereplicationofvirusinpatientswithHBeAgnegative,TheserumlevelsofHBVDNAofpatientswithhepatitisBcloselycorrelatePreDNAwithfluorescentquantitativePCRforthepatientswithhepatitisBishelpfultoclinicaldiagnosis、clinicalevalutionandprognosis.

Keywords：HepatitisB；HBVDNA；PreS1antigen

乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)方法有多種，尋求快速、敏感和特異性檢測(cè)手段具有十分重要的意義。前S1(PreS1)抗原已成為HBV感染、復(fù)制和乙肝患者診斷、治療和預(yù)后的一個(gè)重要標(biāo)志，但存在“窗口期”及“免疫逃避株”等問(wèn)題。乙型肝炎病毒HBVDNA含量是判斷病毒復(fù)制活躍和具有傳染性的直接可靠依據(jù)，HBVDNA定量測(cè)定可以反映乙型肝炎病毒(HBV)的量的變化，直接檢測(cè)患者血清中病毒的拷貝數(shù)量，反映患者病毒血癥的水平。本研究觀察了乙肝小三陽(yáng)患者血清標(biāo)志物、前S1和HBVDNA三者之間的相關(guān)性，探討了HBVDNA檢測(cè)的臨床意義,現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1標(biāo)本收集我院351例乙型肝炎小三陽(yáng)患者血清,其中男273例，平均年齡歲，女78例，平均年齡歲，健康對(duì)照30例,男25例，平均年齡歲，女5例，平均年齡歲。留取清晨空腹靜脈血，分離血清，-20℃保存待檢。

2儀器RSP150/8全自動(dòng)加樣器(瑞士TECAN公司生產(chǎn))，BEPⅢ全自動(dòng)酶免疫分析儀(德國(guó)DadeBehring公司生產(chǎn))，美國(guó)ABI公司AB770型PCR熒光定量?jī)x。

3方法

血清標(biāo)志物(HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc)檢測(cè)應(yīng)用ELISA方法，試劑由上海實(shí)業(yè)科華生物技術(shù)有限公司提供，試劑批號(hào)分別為：20060718、20061013、20060913、20060925、20060924。用瑞士TECAN公司生產(chǎn)的加樣器(RSP150/全自動(dòng)酶免分析儀)進(jìn)行加樣(包括質(zhì)控血清、陰陽(yáng)性對(duì)照及待檢血清)，然后用BEPⅢ全自動(dòng)酶免疫分析儀進(jìn)行檢測(cè)，判定方法嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

前S1抗原檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法，用抗前S1和抗HBs作為固相化抗體和酶標(biāo)抗體，單抗捕獲待檢標(biāo)本中的乙肝病毒表面抗原，用辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗PreS1單抗作為檢測(cè)抗體。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)步驟進(jìn)行操作，根據(jù)酶底物反應(yīng)后的呈色吸光值，測(cè)定血清中乙肝病毒PreS1，試劑由上海阿爾法生物技術(shù)有限公司提供，試劑批號(hào)：20060601。

HBVDNA定量測(cè)定采用PCR方法結(jié)合熒光探針體外擴(kuò)增和檢測(cè)技術(shù)，試劑由深圳匹基生物工程股份有限公司，該試劑盒的檢測(cè)下限為×108copies／ml，試劑批號(hào)：20060301。

4統(tǒng)計(jì)分析計(jì)數(shù)資料采用配對(duì)計(jì)數(shù)資料卡方檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)用SPSS處理。

2結(jié)果

HBsAg、抗HBe、抗HBc陽(yáng)性組(小三陽(yáng)組)HBVDNA檢出率為%,其HBVDNA平均含量為×106copies／ml；前S1抗原檢出率為％。可見(jiàn)部分HBeAg轉(zhuǎn)陰患者仍存在病毒高復(fù)制。30例健康對(duì)照者血清HBV標(biāo)志物、HBVDNA及前S1均為陰性，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1351例乙肝小三陽(yáng)患者血清HBVDNA及前S1抗原檢測(cè)結(jié)果(略)

乙型肝炎小三陽(yáng)患者PreS1與HBVDNA的關(guān)系351例乙型肝炎小三陽(yáng)患者血清中，HBVDNA陽(yáng)性為220例，PreS1陽(yáng)性為256例，其陽(yáng)性檢出率分別為%(220／351)、%(256／351)。HBVDNA陽(yáng)性組中PreS1檢出率為%(170/220)，HBVDNA陰性組中PreS1檢出率為%(86/131)，PreS1與HBVDNA檢出率不一致，HBVDNA與PreS1檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=，)，見(jiàn)表2。

表2乙型肝炎小三陽(yáng)患者血清PreS1與HBVDNA的關(guān)系(略)

3討論

HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)是目前診斷乙肝最常用的指標(biāo)，它主要反映人體對(duì)乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)，不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況。由于HBV血清標(biāo)志物復(fù)雜多樣，臨床上難以根據(jù)這些結(jié)果對(duì)HBV感染復(fù)制情況進(jìn)行準(zhǔn)確判斷。HBV的外衣殼蛋白包括S蛋白、前S1蛋白和前S2蛋白，研究顯示，前S1蛋白含有肝細(xì)胞膜受體，與病毒侵入肝細(xì)胞以及HBV復(fù)制關(guān)系密切［1］。PreS1作為病毒復(fù)制的標(biāo)志物之一被廣泛應(yīng)用于臨床。ELISA抗原檢測(cè)方法一般需要1015～1017個(gè)病原體才可檢測(cè)出陽(yáng)性，而病毒感染后“窗口期”則會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果。熒光定量PCR技術(shù)的出現(xiàn)，解決了病原體感染后的發(fā)病時(shí)間、病情輕重與病原體數(shù)量的關(guān)系［2］。探討HBV血清標(biāo)志物、前S1、HBVDNA檢測(cè)及其相互間的關(guān)系對(duì)于乙型肝炎臨床診斷、療效觀察和預(yù)后判斷具有重要意義。本研究采用ELISA及FQPCR方法檢測(cè)351例乙型肝炎小三陽(yáng)患者血清標(biāo)本的前S1、HBVDNA，結(jié)果顯示小三陽(yáng)患者血清中HBVDNA檢出率達(dá)%。HBVDNA平均含量為×105copies／ml；PreS1檢出率為%。通常認(rèn)為HBeAg陽(yáng)性是HBV復(fù)制活躍的指標(biāo)之一，本研究結(jié)果表明HBeAg陰性并不表明HBV復(fù)制的完全終止或病毒血癥的消失，該結(jié)果和Pichoud等［3］的報(bào)道基本一致，病毒拷貝數(shù)與HBeAg陽(yáng)性相比明顯下降，表明在HBV感染者體內(nèi)HBeAg向抗HBe血清轉(zhuǎn)換的動(dòng)態(tài)過(guò)程中，病毒的復(fù)制逐漸減少。前S1與HBVDNA檢出率并不一致，可能是前S1和HBVDNA檢測(cè)所表達(dá)的意義并不完全一致，慢性乙型肝炎病程早期(HBsAg陽(yáng)性)，HBVDNA陽(yáng)性而PreS1陰性；病程后期，部分病例PreS1陽(yáng)性而HBVDNA為陰性。因此，不能僅依照PreS1來(lái)判斷病毒是否復(fù)制，PreS1不能完全代替HBVDNA的檢測(cè)，只能作為其補(bǔ)充的指標(biāo)。傳統(tǒng)觀念認(rèn)為慢性乙肝患者出現(xiàn)HBeAg轉(zhuǎn)陰或轉(zhuǎn)為HBeAb陽(yáng)性后傳染性小，病情好轉(zhuǎn)，常作為抗病毒治療有效的指標(biāo)。本研究表明，HBeAg陰性乙肝小三陽(yáng)患者血清采用敏感的DNA信號(hào)擴(kuò)增法約40%可檢出病毒活動(dòng)性復(fù)制，其中約70%為HBV前C/C區(qū)變異的突變株［4，5］，而對(duì)于HBeAg陰性慢性乙肝患者，是否存在HBVDNA復(fù)制是判斷病情與預(yù)后、衡量抗病毒療效的關(guān)鍵指標(biāo)。有研究認(rèn)為前S1抗原與HBV復(fù)制有更密切關(guān)系，PreS1作為病毒復(fù)制的重要指標(biāo)，較HBeAg敏感。在本研究中，PreS1與HBVDNA高度相關(guān)，表明PreS1與HBV的復(fù)制具有一致性，但HBVDNA陽(yáng)性組中PreS1檢出率為%，和HBVDNA的檢出率差異有顯著性，因此認(rèn)為臨床上判斷病毒的復(fù)制及其活躍程度不能單靠HBeAg或PreS1是否陽(yáng)性，準(zhǔn)確的方法是熒光定量PCR方法對(duì)HBVDNA進(jìn)行定量檢測(cè)。血清中HBVDNA的量是反映病毒復(fù)制的最直接標(biāo)志，是評(píng)價(jià)傳染性的最可靠的方法，熒光定量PCR技術(shù)能從DNA水平鑒別其潛伏性和活動(dòng)性，可以作為HBV感染的分子診斷標(biāo)準(zhǔn)因此對(duì)于乙型肝炎病毒感染者，在常規(guī)血清學(xué)標(biāo)志物檢測(cè)的基礎(chǔ)上，采用FQPCR方法對(duì)HBVDNA數(shù)量進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀測(cè)，對(duì)乙型肝炎的診斷、抗病毒治療的藥物療效評(píng)價(jià)、指導(dǎo)乙型肝炎合理治療方案的制訂以及預(yù)后判斷有非常重要的意義。

參考文獻(xiàn)：

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