CD44v6、nm23在胃癌中的表達及意義

CD44v6、nm23在胃癌中的表達及意義

作者：陳文習蔡麗馬華玲徐惠森

【關鍵詞】CD44v6；nm23；胃癌；浸潤；轉(zhuǎn)移

摘要：目的：探討CD44v6和nm23在原發(fā)性胃癌中的表達及與胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移的關系。方法：應用免疫組織化學SP法對69例胃癌及20例伴異型增生的慢性萎縮性胃炎組織進行研究。結果：CD44v6在不同分化程度及有無淋巴結轉(zhuǎn)移癌組織中的表達差異有顯著性；nm23在不同分化程度及有無淋巴結轉(zhuǎn)移、漿膜有無浸潤的癌組織中的表達差異具有顯著性；CD44v6與nm23在胃癌中的表達呈負相關關系γa=-。結論：檢測CD44v6及nm23在胃癌中的表達對判斷胃癌的惡性程度、浸潤深度及淋巴結轉(zhuǎn)移有一定臨床價值。

關鍵詞：CD44v6；nm23；胃癌；浸潤；轉(zhuǎn)移

胃癌是我國消化道腫瘤中最常見的一種，其治療仍是以腫瘤根治性胃次全或全切除術為主，輔以放療、化療，病人預后如何與腫瘤侵犯的深度、有無淋巴結轉(zhuǎn)移及手術徹底與否關系密切。但術前即對腫瘤分期及有無淋巴結轉(zhuǎn)移的特異性診斷方法尚未找到。近幾年來的研究發(fā)現(xiàn)，在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移過程中，腫瘤細胞表達的多種粘附分子與該腫瘤的淋巴結轉(zhuǎn)移有一定的相關性，其中對CD44v6［1］、nm23［2］、P53、PCNA等研究日益受到人們的重視。

CD44是分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，在淋巴細胞、成纖維細胞和上皮細胞表面均可檢測到它的表達。CD44v6是CD44蛋白變異體，含人類變異體外顯子6，研究表明，CD44v6基因與許多惡性腫瘤的淋巴結轉(zhuǎn)移有一定關系。

nm23是1988年Steeg等分離出一種與惡性腫瘤轉(zhuǎn)移有關的基因，該基因位于人類染色體17q22，編碼區(qū)為533Bp，產(chǎn)物為152個氨基酸組成的17kD核內(nèi)及胞漿蛋白，與二磷酸核氨酶的氨基酸序列具有高度的同源性，參與微管聚合酸的活化和G蛋白的信號傳遞，其活化與腫瘤產(chǎn)生過程及轉(zhuǎn)移有關。一般認為，nm23表達在人類多種腫瘤與淋巴結轉(zhuǎn)移有相關性，而與組織學分級和預后關系的報道不一。許多研究表明［3］,CD44v6的高表達及nm23的低表達與某些惡性腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移有關，但在胃癌中表達的研究較少，結果不一，且多為單因素研究，聯(lián)合表達的研究較少。本研究旨在探討CD44v6、nm23在胃癌中聯(lián)合表達的特點及與浸潤和轉(zhuǎn)移的關系。

1材料與方法

11標本來源

收集武漢大學中南醫(yī)院自2000年~2004年胃癌根治之手術標本，經(jīng)病理醫(yī)師診斷為胃癌的石蠟包埋組織塊69例，其中男性為45例，女性為24例，年齡25~71歲，中位年齡歲。根據(jù)WHO組織學分型標準，高分化胃癌19例，中分化23，低分化胃癌27例；胃癌侵及漿膜者37例，未浸潤漿膜者32例；伴有淋巴結轉(zhuǎn)移者41例，無淋巴結轉(zhuǎn)移者28例。另選伴異性增生慢性萎縮性胃炎病例20例作為對照，男16例，女4例，年齡26~62歲，平均歲。

12主要試劑與實驗方法

兔抗人nm23多克隆抗體、鼠抗人CD44v6單克隆抗體以及即用型免疫組化超敏SP試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司。每例標本連續(xù)切片4張備用，分別作HE染體和nm23、CD44v6免疫組化標記。采用免疫組化染色SP法，嚴格按試劑盒操作說明書進行，直接煮沸法抗原修復37℃溫箱孵育，用PBS代替一抗做陰性對照，用已知胃癌陽性切片做陽性對照。

13結果判斷

免疫組化染色陽性反應為黃棕色顆粒且明顯高于背景染色。nm23定位于細胞漿，在核及膜上也有少量表達，CD44v6主要以細胞膜染色為主，少數(shù)可見胞漿著色。兩人雙盲法觀察切片，結合文獻［4］具體標準計數(shù)5個高倍視野或1000個以上細胞，按染色強度計分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色。按陽性細胞所占百分比計分：0分為陰，1分為陽性細胞≤10%，2分為陽性細胞11%～50%，3分為陽性細胞51%～75%，4分為陽性細胞＞75%。染色強度與陽性細胞所占百分比乘積1～3分記為，4～6分為，8分為。

14統(tǒng)計學處理

率的統(tǒng)計學差異顯著性用卡方檢驗計算法，兩者之間的相關性用列聯(lián)表資料相關分析χ2檢驗，所有數(shù)據(jù)均在軟件上進行。

2結果

21CD44v6在異型增生腺體及胃癌組織的表達

CD44v6陽性物質(zhì)主要見于癌細胞的細胞膜，少數(shù)見于胞漿內(nèi)，在異性增生腺體及癌組織內(nèi)的陽性率分別為20%及%，與在胃癌的表達差異有顯著性。在高、中、低分化不同分化程度的胃癌組織的表達情況見表1。CD44v6表達的差異在高、低分化程度的胃癌組織中差異有顯著性，而在低、中分化程度的胃癌組織中差異無顯著性。

表1CD44v6異型增生腺體及胃癌組織中的表達

注：*：P＜，vs胃癌；#：P＜(χ2=）,vs低分化胃癌。

22nm23在異型增生腺體及胃癌組織的表達

nm23蛋白陽性表達主要分布在胞漿中，胞膜上也有少量表達。在異型增生腺體及癌組織內(nèi)的陽性率分別為100%及%，癌組織與異型增生腺體表達的差異有顯著性。在高、中、低分化不同分化程度的胃癌組織中的表達見表2，nm23表達差異亦具有顯著性。

表2nm23在異型增生腺體及胃癌組織中的表達

注：*：P＜，vs胃癌；#：P＜,vs低分化胃癌。

23CD44v6及nm23與胃癌浸潤深度及淋巴結轉(zhuǎn)移的關系

69例胃癌中，有淋巴結轉(zhuǎn)移與無淋巴結轉(zhuǎn)移兩組間CD44v6陽性表達差異有顯著性。nm23在兩組間陽性表達差異亦有顯著性。見表3。

表3CD44v6及nm23與胃癌浸潤深度及淋巴結轉(zhuǎn)移的關系

注：*：Pcd44v6＜(χ2=),Pnm23＜(χ2=);#：Pcd44v6＜(χ2=),Pnm23＜(χ2=)。

69例胃癌中，侵入漿膜與未侵及漿膜兩組間CD44v6陽性表達差異無顯著性，而nm23在兩組間的陽性表達差異有顯著性。見表3。

24CD44v6與nm23在胃癌中表達的關系

25例CD44v6陰性中，nm23的陽性表達19例，而CD44v6表達陽性的44例中nm23的陽性表達21例，兩者表達差異具有顯著性，提示兩者之間存在相關關系，其負相關密切程度為γa=-。

表4CD44v6及nm23在胃癌中表達的關系

3討論

31CD44v6在胃癌組織中的表達特點及其意義

CD44基因位于染色體11號短臂上，至少由20個外顯子構成，根據(jù)編碼CD44分子外顯子組成的不同將CD44分為CD44S和CD44V。據(jù)研究表明，目前，已知至少存在10種CD44V的變異亞型。CD44v6是CD44蛋白變異體，含人類變異體外顯子6，CD44是分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，在淋巴細胞、成纖維細胞和上皮細胞表面均要檢測到它的表達。其主要功能之一是介導淋巴細胞與毛細血管后微靜脈內(nèi)皮細胞結合，使附近細胞易于穿于血管壁回到淋巴組織，即介導淋巴細胞特異性歸巢。CD44能參與細胞與細胞之間以及細胞與細胞外基質(zhì)之間的相互作用，另外還參與細胞的遷移，傳遞移動性細胞化學因子和生長因子，進而參與生長因子介導的信號轉(zhuǎn)導等過程。CD44在不同腫瘤中的表達不盡相同，有些升高，有些偏低，尤其是CD44v6，其陽性率各不一致。目前研究表明CD44v6在腫瘤組織中的表達與腫瘤的浸潤轉(zhuǎn)移相關，并初步證實CD44v6是轉(zhuǎn)移中的相關因子，其他變異亞型以及CD44S也有相關報道。我們的研究結果顯示，CD44v6在異性增生的腺體與癌組織內(nèi)的陽性表達差異有顯著性。癌組織分化程度越低表達越高，差異有顯著性。CD44v6在伴有淋巴結轉(zhuǎn)移中的陽性率為%，遠高于在不伴有淋巴結轉(zhuǎn)移組中的陽性表達，CD44v6的高表達與胃癌淋巴結的易轉(zhuǎn)移性相關，兩者之間呈正相關關系。這種結果與多家研究結果基本一致。由于腫瘤細胞膜上過多的表達CD44v6蛋白，可能介導該腫瘤細胞易與血管內(nèi)皮細胞結合，使瘤細胞穿入或穿出血管和淋巴管的能力增強，從而發(fā)生淋巴道或血道轉(zhuǎn)移。另外，從研究中可看出，在28例無淋巴結轉(zhuǎn)移組織中，有15例CD44v6陰性表達，而41例伴有淋巴道轉(zhuǎn)移的病例中，CD44v6陽性表達了32例。因此，CD44v6蛋白可能在胃癌組織生長的后期逐步形成的，一旦形成，則使腫瘤細胞易發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移。

32nm23在胃癌組織中的表達特點及其意義

nm23基因定位于染色體17q22，編碼區(qū)為533bp，產(chǎn)物為152個氨基酸組成的17RD核內(nèi)及胞漿蛋白，與二磷酸核苷激酶的氨基酸序列具有高度同源性［5］。人類nm23基因有二個亞型，即nm23H1和nm23H2，目前認為nm23蛋白可能為正常組織發(fā)育所必需，它可能是控制細胞增殖的轉(zhuǎn)錄因子。因此，它的改變可能與腫瘤的生物學特性有一定的關系。近年來的研究顯示，nm23基因并不象抑癌基因P53那樣穩(wěn)定，它在某些癌癥中表現(xiàn)比較混淆，有相互矛盾的報道，原因是多方面的。nm23抑制轉(zhuǎn)移比較有力的證據(jù)是在乳腺癌中得到證實，1982年發(fā)現(xiàn)具有高度轉(zhuǎn)移性鼠K1735TK黑色素瘤細胞株轉(zhuǎn)移nm23H1cDNA能減少原發(fā)瘤的形成和顯著減少轉(zhuǎn)移的可能性，遂稱抑制轉(zhuǎn)移基因，估計改變nm23H1的調(diào)節(jié)可能是轉(zhuǎn)移的起點，后來發(fā)現(xiàn)nm23H1位點喪失在不同腫瘤中的發(fā)生率各不相同。研究表明，nm23蛋白與人類多種腫瘤浸潤有關，作用機制為nm23基因編碼一類似二磷酸核苷激酶的蛋白，參與微管的集合和分解，影響細胞的結構和細胞之間的相關系，其異常表達可能有助于新生瘤細胞的擴散。在本次研究過程中發(fā)現(xiàn)nm23蛋白在異型增生組織中顯示高表達，在伴有淋巴結轉(zhuǎn)移的病例中，nm23的表達率很低，可能在正常組織癌變過程中，nm23基因的突變，使腫瘤細胞內(nèi)的nm23蛋白形成障礙，從而使腫瘤細胞間的粘附力減弱或與非腫瘤細胞的粘附力增強。nm23基因在腫瘤的研究主要是基于腫瘤轉(zhuǎn)移的相關關系上，許多研究表明，nm23在腫瘤組織中的低表達與乳腺癌、結直腸癌等癌腫的淋巴結易轉(zhuǎn)移性有關。本研究的結果顯示，nm23在淋巴結轉(zhuǎn)移中的陽性表達率為%，而在淋巴結陰性組中的nm23陽性表達率為%。陽性表達主要定位于胞漿，由此看來，nm23蛋白在兩組中的陽性表達存在明顯的差異，nm23蛋白的表達與胃癌淋巴結的易轉(zhuǎn)移性呈負相關關系。

33CD44v6、nm23蛋白在胃癌組織中表達的相互關系

CD44v6、nm23屬于黏附分子范疇，CD44V6在腫瘤組織生物學行為上的作用，與黏附因子之一整合素的作用呈協(xié)同作用［6］。整合素是一種膜鑲嵌糖蛋白，由α和β兩個亞單位非共價形成異二聚體復合物。由于亞單位的變異使整合素形成一個龐大的家族，有的參與不同細胞之間的黏附連接，有的則協(xié)助細胞與細胞外基質(zhì)的結合，其中24β1和Mac1同時具備上述兩種功能。細胞表面的整合素可處于不活化狀態(tài)，有一些活化因子可增強整合素與相應配體的親和力，CD44v6則屬于這種強化因素之一。因此，在一定程度上影響腫瘤細胞轉(zhuǎn)移潛能的高低。nm23與上皮粘連素和金屬蛋白酶組織抑制物的基因被視為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因［7］。上皮粘連素抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的作用主要是使腫瘤細胞彼此膠著在一起，使細胞之間黏附增加，瘤細胞不易脫落而發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移。有關nm23抗腫瘤轉(zhuǎn)移的機制以及CD44v6、nm23在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中存在怎樣的協(xié)同或拮抗作用，有待于進一步研究。本研究結果顯示，25例CD44v6陰性中，nm23的陽性表達19例，而CD44v6表達陽性的45例中nm23的陽性表達21例。經(jīng)統(tǒng)計學處理顯示，nm23和CD44v6之間的表達關系則呈負相關關系。

上述結果提示檢測CD44v6及nm23在胃癌中的表達對判斷胃癌的惡性程度、浸潤深度及淋巴結轉(zhuǎn)移有一定價值。綜合分析CD44、nm23在胃癌中的表達有助于對患者預后的判斷。

參考文獻

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