分子篩再生注意事項(xiàng)及分子克隆-主要步驟

分子篩再生注意事項(xiàng)分子篩使用前都必須經(jīng)過(guò)高溫脫水活化，才能有效地發(fā)揮作用?；罨瘻囟炔荒芨哂?00℃，一般控制在550±10℃加熱二小時(shí)，活化后待溫度降到200℃左右應(yīng)立即取出存放在干燥器內(nèi)備用，用過(guò)的或吸附飽和后的分子篩，經(jīng)過(guò)重新活化，可反復(fù)使用。但是我在雜志上看到一篇文章，講述他們的實(shí)例，分子篩大量進(jìn)水后，利用上述方法再生，但是導(dǎo)致兩個(gè)分子篩都有大量水，兩個(gè)都再生，最后都失去了吸附作用。原因是：分子篩大量進(jìn)水后，水分和分子篩作用，水由游離態(tài)的水變成了分子篩的結(jié)晶水，即使再生溫度為200假如你的分子篩大量進(jìn)水，進(jìn)水時(shí)間超過(guò)10分鐘，并且從再生氣放空能看到明顯水漬，那就可以判定分子篩必須回爐了，沒(méi)必要再生了。指望再生的溫度解吸分子篩那是根本不可能的事情了。如果分子篩發(fā)生進(jìn)水，能夠急時(shí)有效地進(jìn)行處理，可能需要高溫活化幾個(gè)周期，便可以恢復(fù)其吸附性能；如果是分子篩發(fā)生大量進(jìn)水，在高溫活化狀態(tài)時(shí)，水中大量微生物，在高溫狀態(tài)下形成碳酸鈣及碳酸鎂等，會(huì)使分子篩吸附劑形成永久吸附，甚至還會(huì)使部分吸附劑在長(zhǎng)周期高溫活化狀態(tài)下會(huì)形成粉化及發(fā)黃，失去其吸附性能；也正是如那篇文章上所說(shuō)的，在這種狀態(tài)下，只能更換新的分子篩；3A分子篩再生：為了取得好的操作性能和盡可能長(zhǎng)的壽命，3A分了篩使用一定時(shí)間后必須再生，再生通常是與吸附逆向進(jìn)行的，這樣可以使被容納于吸附床入口處的大部分吸附物質(zhì)不必通過(guò)整個(gè)床層，部分分子篩也可不與濕熱氣體接觸，從而提高分子篩壽命。先將吸附罐內(nèi)原料退出，罐體抽真空，再用加熱的干燥N2或過(guò)熱蒸汽做再生氣(在生氣盡可能的干燥，否則會(huì)影響吸附效率)，逆向進(jìn)入分子篩干燥罐（A/B）進(jìn)行再生，控制進(jìn)口溫度220～350℃，出口溫度≧150℃，恒溫吹掃6~8小時(shí)，使分子篩脫除吸附水，然后使用常溫干燥氮?dú)鈱?duì)干燥罐（A/B）進(jìn)行降溫處理冷吹至出口氣體溫度降到30再生氣體數(shù)據(jù)表再生氣體露點(diǎn)，℃再生溫度，℃分子篩殘余水量，%42004.543003.644001.645000-302002.7-303000.8-304000.2上表可以看出同一氣體露點(diǎn)下，溫度越高，活化效果越好（分子篩殘余水量越低）。同一溫度條件下，再生氣體露點(diǎn)越低，活化效果越好。分子篩在出廠時(shí)候紙板桶內(nèi)襯塑料袋包裝里的殘余含水量一般在1%左右，最大不超過(guò)1.5%。如果裝填時(shí)候現(xiàn)場(chǎng)空氣的相對(duì)濕度≯50%，裝填一天內(nèi)結(jié)束，那么根據(jù)經(jīng)驗(yàn)塔內(nèi)分子篩殘余含水量≯3%，新塔不必再生處理。筆記3（分子克隆2——主要步驟）分子克隆可以分為以下幾個(gè)步驟：

（1）帶有目的基因的DNA片段的獲得

（2）重組DNA分子的構(gòu)建

（3）重組DNA分子的轉(zhuǎn)化和重組克隆的篩選

（4）特定重組克隆的鑒別分離制備待克隆的DNA片段————將靶DNA片段與載體在體外進(jìn)行連接————重組DNA分子轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞————篩選、鑒定陽(yáng)性重組子————重組子的擴(kuò)增。1.帶有目的基因的DNA片段的獲得：可以用限制內(nèi)切酶降解基因組DNA，再配合使用其他實(shí)驗(yàn)手段得到待定的DNA片段，可以用超速離心的方法分離出具有特定核苷酸組成的DNA片段，可以用mRNA做模板，用反轉(zhuǎn)錄酶合成互補(bǔ)DNA，即cDNA，也可以用化學(xué)合成的方法直接合成一段DNA。

2.重組DNA分子的構(gòu)建：重組DNA分子中包括兩部分，一部分是外源DNA，即目的DNA片段，另一部分是載體DNA。用作載體的，有質(zhì)粒、噬菌體或病毒DNA。它們的基本特征是能夠獨(dú)立復(fù)制。如果用同一種限制性內(nèi)切酶切割這兩種DNA，則它們的末端完全相同，由于有互補(bǔ)的單鏈末端序列存在，在連接酶的作用下，就可以形成重組DNA分子。在沒(méi)有互補(bǔ)單鏈末端的情況下，也可以用酶學(xué)方法造成一個(gè)互補(bǔ)單鏈末端之后再進(jìn)行連接。

3.重組DNA分子的轉(zhuǎn)化和重組克隆的篩選：重組DNA分子必須進(jìn)入宿主細(xì)胞中，才能得到擴(kuò)增和表達(dá)．這個(gè)過(guò)程叫做轉(zhuǎn)化。大腸桿菌是目前使用最廣泛的宿主細(xì)胞。除此以外．其他細(xì)菌、酵母、哺乳動(dòng)物細(xì)胞等也可作為宿主細(xì)胞，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)的需要加以選擇。在被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞中，不同的單個(gè)細(xì)胞(在平板上表現(xiàn)為單個(gè)菌落，亦稱克隆)中可能含有不同的重組質(zhì)?；蚍侵亟M質(zhì)粒，因此必須進(jìn)行篩選，以便確定哪些是重組克隆。篩選可以使用抗菌素抗性或其他方法，依載體的性質(zhì)而定。

4.特定重組克隆的鑒別：由于重組克隆往往是較多的，而在某一克隆實(shí)驗(yàn)中，我們感興趣的目的克隆只有一個(gè)或幾個(gè)，所以需要進(jìn)一步鑒別。使用的方法主要有核酸雜交法和免疫化學(xué)法。

此外，找出了目的克隆之后，還需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的，進(jìn)一