人工授精工藝流程

河南東方正大種豬場

人工授精工藝流程人工授精可以提高優(yōu)良公豬的利用率，并大面積地提高豬只質(zhì)量。對于優(yōu)良的公豬，通過人工授精技術(shù)，將它們的優(yōu)質(zhì)基因迅速推廣，促進種豬的品種品系改良和商品豬生產(chǎn)性能的提高。同時在克服公、母體格大小的差別，減少疾病的傳播，節(jié)省人力、物力、財力，提高經(jīng)濟效益等方面亦有很好的效果。人工授精雖有以上好處，但如果本身生產(chǎn)水平不高，技術(shù)不過關(guān)，很可能會造成母豬子宮炎、受胎率低和產(chǎn)仔數(shù)少的情況，反爾降低了經(jīng)濟效益。本場自1995年運用人工授精技術(shù)以來，已基本掌握了該項技術(shù)，并取得了很好的經(jīng)濟效益?，F(xiàn)將該技術(shù)公布，不足處請同行指正。一、 米精前的準備準備好消毒過的集精瓶、過濾紗布、輸精瓶、公豬配件等所需物品。二、 采精的方法當公豬性欲達到旺盛時，它將爬上母豬臺，并伸出陰莖龜頭來回抽動。右手抓住公豬陰莖的螺旋頭處，并順勢拉出陰莖，順勢稍微回縮，直至和公豬陰莖同時運動，左手拿采精杯；若用左手采精時，則要蹲在公豬的右側(cè)，左手抓住陰莖，右手拿采精杯。無論用左手或右手，當握住公豬的陰莖時，都要注意要用拇指和食指抓住陰莖的螺旋體部分，其余三個手指予以配合，象擠牛奶一樣隨著陰莖的勃動而有節(jié)律地捏動，給予公豬刺激。米精時，握陰莖的那只手一般要戴雙層手套，最好是聚乙烯制品，用這種手套對精子殺傷力較小，當將公豬包皮內(nèi)的尿液擠出后，應將外層手套去掉，以免污染精液或感染公豬的陰莖。手握陰莖的力度，太大或太小都不行，應以不讓其滑落并能抓住為準。用力太小，陰莖容易脫掉，米不到精；用力太大，一是容易損傷陰莖，二是公豬很難射出精液。公豬一旦開始射精，手應立即停止捏動，而只是握住陰莖，射精完后，應馬上捏動，以刺激其再次射精。當公豬射精時，一般射出的前面較稀的精清部分應棄去不要，當射出乳白色的液體時，即為濃精液，就要用采精杯收集起來，射精的過程中，公豬都會再次或多次射出較稀的精清，和最后射出的較為稀薄的部分、膠體都應棄去不要。精液品質(zhì)的好壞，量的多少只是其中的一個衡量指標，在相同的取舍方法下，關(guān)鍵要看精子的密度和活力的高低。初學者大都將公豬射出的較稀的精清和濃的精液全部收集起來計量，以此來衡量公豬的好壞，這是不恰當?shù)?。因為，同品種的不同公豬及不同品種的公豬在射精量和精子濃度方面都有個體的差異，尤以不同品種公豬之間較為突出，如大約克的射精量大，但濃度??；杜洛克公豬的射精量小，但濃度高。因此，在相同的采精方法下，應以精子密度、活力為主進行評價，而精液量只是其中一個標準。應注意的是，米精杯上套的四層過濾用紗布，使用前不能用水洗，若用水洗則要烘干，因水冼后，相當于采得的精液進行了部分稀釋，既使水分含量較少，也將會影響精液的濃度。一、精液品質(zhì)的檢查由采精室遞過來的精液，要馬上進行鑒定，以便決定可否留用，從而保證母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)的提高。檢查精液的主要指標有如下幾個：精液量、顏色、氣味、精子密度、精子活力、酸堿度、粘稠度、畸形精子率等。每一份經(jīng)過檢查的公豬精液，都要有一份詳細的檢查記錄，以備對比及總結(jié)。檢查前，將精液轉(zhuǎn)移到在37r水浴鍋內(nèi)預熱的燒杯中，或直接將精液袋放入37°C水浴鍋內(nèi)保溫，以免因溫度降低而影響精子活力。整個檢查活動要迅速、準確，一般在5?10分鐘內(nèi)完成。1、 精液量：后備公豬的射精量一般為150?200毫升，成年公豬的為200?300毫升，有的高達700?800毫升。精液量的多少因品種、品系、年齡、采精間隔、氣候和飼養(yǎng)管理水平等不同而不同。2、 顏色：正常精液的顏色為乳白色或灰白色，精子的密度愈大，顏色愈白；越小，則越淡。如果精液顏色有異常，則說明精液不純或公豬有生殖道病變，如呈綠色或黃綠色時則可能混有化膿性的物質(zhì)；呈紅色時則有新鮮血液；呈褐色或暗褐色時則有陳舊血液及組織細胞；呈淡黃色時則可能混有尿液等。凡發(fā)現(xiàn)顏色有異常的精液，均應棄去不用，同時，對公豬進行對癥處理、治療。3、 氣味：正常的公豬精液含有公豬精液特有的微腥味，這種腥味不同于魚類的腥味，沒有腐敗惡臭的氣味。有特殊臭味的精液一般混有尿液或其它異物，一旦發(fā)現(xiàn)，不應留用，并檢查采精時是否有失誤，以便下次糾正做法。4、 酸堿度：可用PH試紙進行測定。公豬精液的酸堿度一般呈弱堿性或中性，其酸堿度與精子密度呈負相關(guān)的關(guān)系，PH值越接近中性或弱酸性，則精子密度越大，但過酸過堿都會影響精子的活力。5、 粘稠度：精液粘稠度的高低，與精子密度密切相關(guān)，精子密度越高的精液，則粘稠度也高，精子密度小的精液，粘稠度也小。6、 精子密度：指每毫升精液中含有的精子量，它是用來確定精液稀釋倍數(shù)的重要依據(jù)。正常公豬的精子密度為2.0?3.0億/毫升，有的高達5.0億個精子/毫升。精子密度的檢查方法有以下幾種：、白細胞稀釋吸管計數(shù)法：這種方法是用于動計數(shù)器和血細胞計數(shù)板來統(tǒng)計精子密度的。目前，在國內(nèi)應用較多，成本低，計算較準確，但所用時間多，使用效率低。主要做法是先用紅血球稀釋吸管取精液到球下的0.5（稀釋200倍）或1.0刻度處（稀釋100倍），然后再吸取注射用生理鹽水到膨大部上方的101刻度處，用兩指（拇指和食指或中指）緊緊壓住吸管的兩端進行搖動混合均勻，吸取的過程中，不允許有空氣混入吸管，以免影響準確度。搖均后，將吸管未端的液體擦干，并去掉前幾滴混合液，然后順著蓋有蓋玻片的血細球計數(shù)板的邊緣，讓混合液滲入到計數(shù)板內(nèi)，再通過顯微鏡觀察，用計數(shù)器點數(shù)，這種檢查一般為總精子數(shù)。然后利用公式計算每毫升精子的密度。精子密度的計算公式為：全方格內(nèi)的精子數(shù)X10（厚度的倍數(shù)）X稀釋倍數(shù)（100或200）X1000=精子數(shù)/毫升、簡單檢查密度法：這種方法不用計數(shù)，用眼觀察顯微鏡下精子的分布，精子所覆蓋的面積大過空間面積的為“密”，小于空間面積的為“稀”，介于二者之間的為中等。一般只用密和中等的精液，稀的應棄去。這種方法簡單，但對于不同檢查人員而言，主觀性強，誤差較大，只能對公豬進行粗略的評價，故大型養(yǎng)豬場一般不采用這種方法，只適應個體戶或人工授精數(shù)量少的豬場。、用精子密度儀計算精子密度：美國和歐洲等養(yǎng)豬業(yè)發(fā)達的國家多采用這種方法，它極為方便，檢查時間短，準確率高，使用壽命長，但價格較貴，一般國外進口都在一萬元人民幣以上，但若用國產(chǎn)分光光度計改裝，也較為適用。它有兩種類型：一是德國的精子密度儀，它是將原精液滴一滴在一個一次性的特制塑料板上，然后通過儀器直接測量精子的密度，這種方法一般要先進密度儀的校正；另一種是利用光電比色法，以精子對光通透性差為依據(jù)，用分光光度計讀出一個數(shù)字，然后再根據(jù)事先準備好的標準曲線確定精子的密度。這兩種類型都有一個缺點，就是會將精液中的異物按精子來計算。用精子密度儀檢查精子密度，將是國內(nèi)外豬人工授精人員較好的選擇。7、 精子活力：精子活力的高低關(guān)系到配母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)的高低，因此，每次采精后及使用精液前，都要進行活力的檢查，以便確定精液能否使用及如何正確使用。精子活率的檢查必須用37r左右的保溫板，以維持精子的溫度需要。一般先將載玻片和蓋玻片放在保溫板上預熱至37r左右后，再滴上精液，在顯微鏡下進行觀察。若有條件，可在顯微鏡上配置一套攝像顯示儀，將精子放大到電腦屏幕上進行觀察。在我國精子活力一般采用10級制，即在顯微鏡下觀察一個視野內(nèi)的精子運動，若全部直線運動，則為1.0級；有90%的精子呈直線運動則活力為0.9；有80%的呈直線運動，則活力為0.8，依次類推。鮮精液的精子活率以高于0.7為正常，使用稀釋后的精液，當活力低于0.6時，則應棄去不用。8、畸形精子率：畸形精子指斷尾、斷頭、有原生質(zhì)、頭大的、雙頭的、雙尾的、折尾等精子，一般不能直線運動，雖受精能力較差，但影響精子的密度。若通過攝像顯示儀觀察，則很容易區(qū)分。若用普通顯微鏡觀察，則需染色；若用位相差顯微鏡，則可直接觀察。公豬的畸形精子率一般不能超過20%，否則應棄去。二、精液的處理經(jīng)過檢查的精液，差的棄去，留品質(zhì)好的進行稀釋處理。優(yōu)良公豬利用率的高低，關(guān)鍵在于處理保存的好壞。處理后的精液和原精液相比，一是擴大了與配母豬頭數(shù)，能迅速將優(yōu)秀公豬基因推廣開來；二是增加了精液的營養(yǎng)成分，有利于精液的保存；三是便于運輸。處理精液必須在恒溫的環(huán)境中進行，檢查品質(zhì)后的精液和稀釋液都要在37r恒溫下預熱，二者溫度上下不能超過ir，否則會對精子造成應激。處理時，應嚴禁太陽光直射精液，因陽光對精子有一定的殺傷力。所用的稀釋水應是經(jīng)檢查有害物質(zhì)不超標的純凈水或蒸餾水，最好采用雙蒸水，但因水源不同，精液中精子對不同品質(zhì)的水有一定的選擇性。稀釋液一般要在采精前準備好，并進行預熱。二、 精液稀釋頭份的確定稀釋前，應對自己所需稀釋的精液頭份進行確定。稀釋頭份可按如下方法進行計算：人工授精的正常劑量一般為30?50億個精子/1個劑量，體積為80?100ML，美國一般采用30億/80ML.頭份，我國一般采用40億左右/100ML.頭份，不過，這主要是根據(jù)實際情況而定。正常的公豬精液，假如密度為2億/ML，采精量為150ML，并計劃稀釋后密度為40億/100ML.頭份。則此公豬精液可稀釋150x2/40=7.5頭份，即需加(750150)ML=600ML稀釋液。不過，同一種稀釋液，精子密度越大，因所消耗能量多，保存時間也就越短。三、 精液的稀釋稀釋前，稀釋液的溫度應和精液接近，相差不能超過1°C。根據(jù)計算好的稀釋頭份，用量杯量取稀釋液的體積，或簡單一點，按1ML精液或稀釋液約等于1克，用精密電子天平直接稱量，國外專業(yè)公豬站多采用此法。稀釋時，將稀釋液順著盛放精液的量杯壁慢慢注入精液，并不斷用玻璃棒攪拌，以促進混合均勻；不能將稀釋液直接倒入精液，因精子需要一個適應過程。還有的做法是，先將稀釋液慢慢注入精液一部分，攪拌均勻后，再將稀釋后的精液倒入稀釋液中，這樣有利于提高精子的適應能力和稀釋精液的均勻混合。精液稀釋的成敗，與所用儀器的清潔衛(wèi)生有很大關(guān)系。所有使用過的燒杯、玻璃棒及溫度計，都要及時用蒸餾水洗滌，并進行高溫消毒，是稀釋后的精液能保證適期保存、利用的重要條件。四、 稀釋后精液的分裝精液的分裝，有瓶裝和袋裝兩種，裝精液用的瓶子和袋子均為對精子無毒害作用的塑料制品。瓶裝的精液分裝時簡單方便，易于操作，但輸精時需人為擠、壓或瓶底開口，因瓶子有一定的固體形態(tài)；袋裝的精液分裝一般需要專門的精液分裝機，用機械分裝、封口，但輸精時因其較軟，一般不需人為擠壓。瓶子一般上面均有刻度，最高一刻度為100ML，袋子一般為80ML。分裝后的精液，要逐個粘貼標簽，一般一個品種一個顏色，便于區(qū)分。注意要在上面標明公豬耳號、采精處理時間、稀釋后密度、經(jīng)手人等，并將以上各項登記到記錄本上，以備查驗。五、 稀釋后精液的保存分裝后的精液，不能立即放入17°C左右的恒溫冰箱內(nèi)，應先留在冰箱外1小時左右，讓其溫度下降，以免因溫度下降過快而刺激精子，造成死精子等增多。放入冰箱時，不同品種的公豬精液應分開放置，否則匆忙中容易拿錯精液。不論是瓶裝的或是袋裝的，均應平放，并可疊放。從放入冰箱開始，每隔12小時，要搖勻一次精液，因精子放置時間一長，會大部分沉淀。對于一般豬場來說，可在早上上班，下午下班時各搖勻一次。為了便于監(jiān)督，每次搖動的人都應有搖動時間和人員的記錄。保存過程中，一定要時時注意冰箱內(nèi)溫度計的變化，以免因意想不到的原因而造成電壓不穩(wěn)而導致溫度升高或降低。六、 精液的運輸對于遠距離購精液的豬場，運輸?shù)倪^程是一個關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。保溫或防暑條件做得好的，運到幾千公里之外，精子活力等還較強，使用效果還是很好，母豬受胎率和產(chǎn)仔數(shù)也仍很高；做得不好的，就是同一場內(nèi)不同時間、地點使用，死精率也是很高，使用效果很差。高溫的夏天，一定要在雙層泡沫保溫箱中放入冰皇（17C恒溫），再放精液進行運輸，以防止天氣過熱，死精太多，嚴寒的季節(jié)，要用保溫用的恒溫乳膠或棉花等在保溫箱內(nèi)保溫。使用凍精，運輸時要用液氮罐，因這種技術(shù)難度較大，除了國外使用較廣外，在豬方面，國內(nèi)應用還不廣泛，故不作詳細的介紹二、適時輸精進行母豬授情時，新鮮精液和保存精液有一個時間的差別。新鮮精液因精子活力強，死精五、輸精方法輸精時，先將輸精管海棉頭用精液或人工授精用潤滑膠潤滑，以利于輸精管插入時的潤滑，并趕一頭試情公豬在母豬欄外，刺激母豬性欲的提高，促進精液的吸收。用手將母豬陰唇分開，將輸精管沿著稍斜上方的角度慢慢手插入陰道內(nèi)。當插入25?30厘米左右時，會感到有上點阻力，此時，輸精管頂著已到了子宮頸口，用手再將輸精管左右旋轉(zhuǎn)，稍一用力，頂部則進入子宮頸第2?3皺折處，發(fā)情好的豬便會將輸精管鎖定，回拉時則會感到有一定的阻力，此時便可進行輸精。用輸精瓶輸精時，當插入輸精管后，用剪刀將精液瓶蓋的頂端剪去，插到輸精管尾部就可輸精；精液袋輸精時，只要將輸精管尾部插入精液袋入口即可。為了便于精液的吸收，可在輸精瓶底部開一個口，利用空氣壓力促進吸收。輸精時輸精人員同時要對母豬陰戶或大腿內(nèi)側(cè)進行按摩，實踐證明，大腿內(nèi)側(cè)的按摩更能增加母豬的性欲.。在美國，輸精人員倒騎在母豬背上，并進行按摩，效果也很顯著。正常的輸精時間應和自然交配一樣，一般為3?10分鐘，時間太短，不利于精液的吸收，太長則不利于工作的進行。為了防止精液倒流，輸完精后，不要急于拔出輸精管，將精液瓶或袋取下，將輸精管尾部打折，插入去蓋的精液或袋孔內(nèi)，這樣即可防止空氣的進入，又能防止精液倒流。3、授精：（1）、配種前將應配母豬全身沖洗干凈特別是后軀不得留有臟物。（2） 、精液及配種用具的準備：事先應消毒好豬的人造雄性器官、塑料瓶消毒好，準備好70%的酒精消毒液。把稀釋好的精液分裝在100ml已消毒過的塑料瓶內(nèi)，放入避光保溫箱。（3） 、授精：先用消毒液清洗母豬會陰及尾部，再用70%的酒精消毒母豬的性器官，再用生理鹽水沖洗干凈，人造雄性器官也用70%的酒精擦洗后再用生理鹽水將其里外沖洗干凈，緩慢以偏上45°角插入母豬性器官直至觸及其子宮后逆時針方向轉(zhuǎn)動掛緊子宮（輕輕抽不出即可）。把精液瓶（擠掉兩滴后）插進人造雄性器官口，緩慢注入精液直至注完，約需時間5-10分鐘，要求不得低于5分鐘，輸完后順時針方向轉(zhuǎn)動抽出人造雄性器官。事后所有用具應用自然水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗一遍，進行蒸煮消毒以備下次再用。受精動作一定要輕、慢，以免損傷母豬生殖道，沖洗消毒必須要嚴格，保證無細菌、病毒輸入生殖道，保證授精成功。一、 知悉當日所配種母豬的層次，確定所采精種公豬，然后按照莫里納1配方要求，配制稀釋液和0.7%鹽水。二、 用已消毒過的集精瓶，按需求采取精液。在采取精液當中力求無雜物污染、完美。把采取的鮮精輕放在保溫桶內(nèi)，無撞擊、無日光照射，及時送至授精房。三、 將鮮精液倒入已經(jīng)消毒過的精液稀釋瓶內(nèi)（用脫脂紗布過濾）將精液稀釋瓶傾斜30度緩慢注入。四、 在工作臺上鏡檢：用接種環(huán)醮取少許鮮精，點在蓋玻片上（小、圓、鼓）將蓋玻片翻轉(zhuǎn)蓋在單凹載玻片上，放在顯微鏡下觀察，先用100倍找到視野范圍，再用400倍觀察精子活力，評估其色澤、氣味、外觀，（色如鮮牛奶樣、氣味無惡臭、外觀無絮狀物、沉淀）作好記錄；五、 稀釋精液：先進行一倍稀釋（稀釋液溫度等同鮮精溫度）稀釋時將稀釋液緩慢注入，輕柔轉(zhuǎn)動混和均勻。放置30分鐘，按其質(zhì)量根據(jù)配種需求，再進一步稀釋分裝，（每頭份100ml）需要保存的精液用熱水浴貯存（水浴溫度等同精液溫度，保存的精液應是一倍稀釋）在恒溫箱內(nèi)（15-18度）不超過三天。貯存時間內(nèi)每天上，下午輕柔翻轉(zhuǎn)二次。六、 輸精：先沖洗發(fā)情正常的待配母豬全身，尤其是母豬陰戶周圍。用0.1%新潔爾滅溶液再將母豬陰戶擦洗干凈，然后配種人員將公豬配件用配制成70%的脫脂棉球消毒，再用0.7%鹽水沖洗干凈，然后緩慢溫柔插入母豬陰道深部（斜上方45度，子宮頸口部位）。逆時針稍旋緊不至脫出即可輸精，每頭輸精時間計時5分鐘，結(jié)合壓背動作，完畢順時針抽出即可。七、 沖洗所用器具，用蒸餾水漂洗后，蒸煮消毒備用。4、 檢查、稀釋精液：（1） 、記錄精液量。觀察精液色澤、氣味。（2） 、觀察精液活力。檢查前應先將精液瓶上下輕輕翻轉(zhuǎn)使精液混勻，然后制作涂片，用顯微鏡100倍觀察精子活力，計算活精子和死精子的百分比。隨后再400倍下觀察精子尾部擺動情況并記錄其活動情況。每次檢查精子活力，玻片恒溫器的溫度要定在40°C，并放在顯微鏡平臺上。放在載玻片恒溫器上的精液采樣的溫度約37C。要進行人工授精的精子活力質(zhì)量要求必須不低于70+++，異常精子不超過20%。（3） 、計算精液濃度。（4） 、計算異常精子數(shù)。（5） 、稀釋精液。精液采樣檢查檢查精子活力及計算精液濃度和精子數(shù)，是為了稀釋精液。稀釋時讓精液稀釋液沿瓶壁緩慢流入精液瓶內(nèi)，同時緩緩轉(zhuǎn)動精液瓶，使二者混合均勻，直到達到所需液量，蓋上蓋子，適宜保存的稀釋液的比例為1:1，或1ml稀釋液中含有2億條精子。稀釋時稀釋液與精液溫差不能超過5C（稀釋液溫度不能高于精液溫度），要求同溫稀釋。5、 檢查母豬發(fā)情：要求準確