新概念疫苗考試重點

新概念疫苗

一、名詞解釋

1.新概念疫苗:與傳統(tǒng)疫苗成分，機制，作用不同，且能激發(fā)機體特異性免疫應(yīng)答的新型疫苗。

(1.成分不同：傳統(tǒng)疫苗多為死疫苗/減毒活疫苗或重組亞單位疫苗，新概念疫苗則為編碼無毒力抗原蛋白的病毒核

酸或能激發(fā)特異性機體免疫應(yīng)答的細胞疫苗2.機制不同：傳統(tǒng)疫苗主要靠病毒的抗原蛋白刺激機體產(chǎn)生中和性保護

抗體，新型疫苗不僅刺激機體產(chǎn)生中和性保護抗體，而且能激發(fā)特異性細胞免疫應(yīng)答3.作用不同：傳統(tǒng)疫苗只能起一

定預(yù)防作用，新型疫苗不僅能預(yù)防疾病，且更能起到特異性治療作用)

2.核酸疫苗:把編碼外源蛋白基因的質(zhì)粒DNA直接導(dǎo)入到動物體內(nèi)，使外源基因在活體內(nèi)表達，

通過產(chǎn)生抗原激活機體的免疫系統(tǒng)以引發(fā)免疫反應(yīng)。

3.T細胞疫苗：將引起自身免疫性疾病的自身反應(yīng)性T細胞或?qū)е峦N移植排斥反應(yīng)的同種反應(yīng)

性T細胞活化并滅活后作為疫苗,可誘導(dǎo)機體產(chǎn)生針對致病性T細胞或同種反應(yīng)性T細胞的免

疫應(yīng)答,從而消除或減輕這些細胞的致病作用.稱為T細胞疫苗

4.T細胞表位:抗原經(jīng)過抗原遞呈細胞(APC)加工后，由MHC分子遞呈給T細胞受體(TCR)的短肽。

5.樹突狀細胞(DC)疫苗：荷載抗原的DC具有疫苗的功能，故稱~

6.抗原提呈細胞(A^C)：能攝取、加工處理抗原，并將抗原遞呈給T淋巴細胞的一類免疫細胞，在

機體免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用，也稱輔佐細胞

7.專職APC：能組成性表達MHC-H類分子和T細胞活化的共刺激分子，抗原遞呈能力強，包括巨

噬細胞、樹突狀細胞和B細胞等

8.內(nèi)源性抗原：APC內(nèi)合成的，如被病毒感染細胞合成的病毒蛋白

9.環(huán)嬴桂瓶康：來源于細胞外的抗原,如被吞噬的細胞或細菌等

10.交叉遞呈：有些APC的MHC-I類分子具有提呈外源性抗原給CD8+細胞的能力。

11.Thl：特征性分泌IL-2、IFN-丫、LT等細胞因子，主要介導(dǎo)遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)和巨噬細

胞活化等細胞免疫反應(yīng)。

12.Th2：特征分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10,ILT3等細胞因子，主要促成B細胞增殖并分化

成漿細胞，分泌特異性抗體，介導(dǎo)體液免疫和過敏反應(yīng)。

13.Tel:分泌Thl樣細胞因子的亞群稱為Tel,如IL-2、IFN-丫、LT等細胞因子。

14.Tc2：分泌Th2樣細胞因子的亞群稱為的2,如IL-4、IL-5、IL-6、ILTO、ILT3等細胞因子。

15.疫苴(Yacciiw)：凡具有抗原性接種于機體可產(chǎn)生特異自動免疫力，達到預(yù)防、治療相應(yīng)疾病等

目的的物質(zhì)，或人工主動免疫的接種物總稱為疫苗。

16.免疫突觸：免疫細胞間形成的突起的胞膜結(jié)構(gòu)。在T細胞和抗原提呈細胞相互作用中，該結(jié)構(gòu)

由黏麗芬子、細胞骨架蛋白和多個T細胞受體-抗原肽-MHC分子所組成。

17.自身免疫：是指機體免疫系統(tǒng)對自身成分發(fā)生免疫應(yīng)答的現(xiàn)象

18.直接荻薪供者的DC,通過淋巴或血液移行到受體淋巴結(jié)和脾臟。

19.IWW：受體DC也進入供者器官，獲得移植抗原呈遞給自身T細胞。

20.RNAffl：在不明確抗原種類以及腫瘤細胞數(shù)量有限的情況下，從微量的腫瘤組織中提取腫瘤

總RNA,通過PCR方法體外大量擴增，體外刺激DC,在小鼠體內(nèi)誘發(fā)了特異性的免疫反應(yīng)，提

示腫瘤細胞的mRNA可以替代腫瘤抗原刺激DC,用于腫瘤的免疫治療。

21.佐劑：又稱非特異性免疫增生劑。本身不具抗原性，但同抗原一起或預(yù)先注射到機體內(nèi)能增強

兔逐原性或改變免疫反應(yīng)類型。

22.弗氏完全佐劑(completefreund'sadjuvant,CFA)：在不完全佐劑中加入分枝桿菌(如

標(biāo)法廠跡稱為完全弗氏佐劑。

23.弗氏不完全佐劑(incompletefreund'sadjuvant,IFA)：抗原水溶液與油劑等量混合，

西加孚［花前制成疝苞水抗原乳劑，稱之為不完全弗氏佐劑。

24.TCR-CD3復(fù)合物:為T細胞抗原受體與一組CD3分子以非共價鍵結(jié)合而成的復(fù)合物。TCR/CD3

復(fù)合和中M兩個多態(tài)型亞單位(TCRaB或TCRy6)主要功能是識別結(jié)合MHC分子的抗原；

CD3分子的主要功能是參與TCR/CD3復(fù)合體的裝配和穩(wěn)定以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。

25.顯性表位：在誘導(dǎo)宿主免疫應(yīng)答時起關(guān)鍵作用或免疫原性強的表位稱為顯性表位。

26.核酶：具有催化活性的RNA,其化學(xué)本質(zhì)是核糖核酸，卻具有酶的催化功能

27.減毒活疫苗：人工使病源微生物定向變異，使其極大程度地喪失致病性，但仍有免疫原性和繁

衍能力。

28.多糖疫苗：由長鏈糖分子構(gòu)成，如細菌多糖夾膜。參與免疫系統(tǒng)成熟前的免疫反應(yīng)，無免疫記

憶等特征。

二、簡答題

1.疫苗商基本成分和特點：

疫苗的基本成分包括抗原、佐劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、滅活劑及其他成分

疫苗的成份和特點：

抗原：疫苗最主要的有效活性組分，是決定疫苗的特異免疫原性物質(zhì)。（疫苗效果）

佐劑：本身不具抗原性，但同抗原一起或預(yù)先注射到機體內(nèi)能增強免疫原性或改變免疫反應(yīng)類型。

殺菌劑/防腐劑：用于防止外來微生物的污染。

保護劑或穩(wěn)定劑：為保證作為抗原的病毒或其他微生物存活并保持免疫原性。

滅活試劑：滅活病毒或細菌抗原。

緩沖液、鹽類等非活性成分：其含量可影響疫苗的效力、純度和安全性。

疫苗的基本特點：

■免疫原性

免疫原性由疫苗的抗原所決定，指疫苗接種進入機體后引起抗體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的強度和持續(xù)

時間。影響免疫原性強弱的因素包括機體的因素和疫苗的因素。

■安全性

安全性包括疫苗本身的安全和接種的安全。大多數(shù)疫苗主要用于兒童和健康人群，因此其安

全性要求極高。絕大多數(shù)國家以不允許因接種疫苗而發(fā)生的死亡率超過百萬分之一作為安全標(biāo)準(zhǔn)之

O

穩(wěn)定性

疫苗必須保持穩(wěn)定，以保證經(jīng)過一定時間的疫苗貯存和冷藏運輸過程■后疫苗仍能保持有效

的生物活性。穩(wěn)定性是衡量疫苗質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。

■廣泛應(yīng)用性

當(dāng)某種傳染病流行時，對流行區(qū)域的健康人群和易感者進行接種，在保護接種者個人的同時，

隨著接種人數(shù)的增加，當(dāng)產(chǎn)生免疫的人數(shù)達到人群的80%以上時，整個人群形成一個免疫屏障，

形成群體免疫，避免疾病的流行與傳播。

2.簡述DNA疫苗的免疫學(xué)說（DNA疫苗表達產(chǎn)物的免疫機制）：

1）質(zhì)粒DNA直接轉(zhuǎn)染體細胞

表達抗原蛋白，然后通過MHCT進行抗原遞呈，誘發(fā)CD8+細胞毒性T細胞（CTL）應(yīng)答的產(chǎn)生。

2）專職APC遞呈肌細胞表達的外源抗原

肌細胞作為體內(nèi)抗原庫，不斷地釋放抗原至細胞間隙，然后被APCs吞噬、加工、遞呈，進入免疫

途徑。

3）質(zhì)粒DNA直接轉(zhuǎn)染APC

?誘導(dǎo)CTL應(yīng)答的最有效的途徑。

?質(zhì)粒DNA在APC內(nèi)表達的蛋白質(zhì)抗原作為“內(nèi)源性抗原”，經(jīng)蛋白酶降解形成8T0aa組成的肽，

在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)與MHC-I分子形成聚體后到達APC膜表面，被T細胞的受體識別。

?交叉激活核交叉遞呈

3.簡述用作DNA免疫的表達載體的特點：

（1）在哺乳動物細胞內(nèi)能高水平表達目的基因；

（2）本身不復(fù)制；

（3）不會整合到宿主染色體中

4.簡述核酸疫苗的優(yōu)點

（1）免疫效果好

（2）易操作性和穩(wěn)定性

（3）能同時誘導(dǎo)體液免疫和細胞免疫，交叉防御

（4）通過選擇免疫途徑或增加細胞因子，可誘發(fā)適合于特定病原體的Thl或Th2應(yīng)答

（5）易于構(gòu)建和使用聯(lián)合疫苗或嵌合疫苗

（6）能產(chǎn)生用常規(guī)方法不能產(chǎn)生的有效免疫原。

（7）能用各種投遞疫苗的方法

（8）具有熱穩(wěn)定性，無需特別的冷藏系統(tǒng)，便于儲存和運輸

（9）規(guī)?；a(chǎn)，成本低廉

（10）母體抗體的存在不影響新生兒免疫

（11）使用相對安全

5.簡述CD28與CTLA-4的功能?

90%CD4+和509O8+T如而表達CD28分子，而CTLA-4只表達在活化的T細胞表面

CD28和CTLA-4的天然配體都是B7分子

CD28接受APC細胞B7分子提供的刺激，向T細胞提供活化的輔助信號

CTLA-4僅表達于活化T細胞,其表達水平明顯低于CD28,它與配體結(jié)合，向活化的T細胞傳導(dǎo)抑制

信號

6.他述工細胞表位識別抗原的特點

特異性：T細胞能識別大量的爰返EAPC表面的特異的肽-MHC復(fù)合體

敏感性：同樣的MHC分子可結(jié)合大量不同的肽，但APC上T細胞表位數(shù)很低

限制性：一個淋巴細胞只識別與一種類型MHC分子結(jié)合的特異性抗原肽

非己性：T細胞須忽略無害的或自身抗原

順序性：T細胞僅識別多肽的順序表位

7.簡述T細胞疫苗的制備方法

1.接種用T細胞的獲取

1）自身免疫性疾病

從發(fā)病機體的淋巴組織、炎癥浸潤部位或外周血中分離，特異性自身抗原誘導(dǎo)，體外擴增。

2）移植研究

用供體抗原使受體致敏，再收集相應(yīng)部位的淋巴細胞和脾細胞，制備淋巴細胞懸液，用低濃度的

ConA在體外培養(yǎng)。

2.T細胞接種前的處理

1）T細胞的活化：通過特異抗原活化，或經(jīng)T細胞有絲分裂原活化

2）T細胞滅活：X射線、60co照射或絲裂霉素C處理，低濃度戊二醛處理。

3）亞適量接種：自身免疫性T細胞的劑量低于過繼轉(zhuǎn)移自身免疫性疾病所需的劑量，無需滅活。

3.接種方式

自身免疫病動物實驗：靜脈注射臨床上：皮下多點免疫

同種移植實驗：腹腔注射，術(shù)前術(shù)后多次

8.特異性細胞免疫應(yīng)答的體外功能檢測方法有那些?

1）淋巴細胞增殖試驗

取T細胞或PBMC與不同稀釋度的抗原或APC遞呈的抗原混合培養(yǎng)3—5天，測細胞的增殖。據(jù)此判

斷出淋巴細胞對有關(guān)刺激的反應(yīng)性與功能狀態(tài)

所用方法：3H—TdR摻入法、MTT法等

2）細胞因子分泌

活化的T細胞會分泌一些細胞因子（IL-2、IFN-y,TNF-a等）

所用方法：流式細胞術(shù)（FACS），酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法），ELISPOT法，定量RT-PCR

3）直接細胞毒性分析

T細胞介導(dǎo)的細胞毒性（LMC）是細胞毒性細胞（CTL）的特性，凡致敏的T細胞再次遇到相應(yīng)靶細

胞抗原，均可表現(xiàn)出對靶細胞的破壞和溶解作用，它是評價機體細胞免疫水平的一種常用指標(biāo)，特

別是測定腫瘤患者CTL殺傷腫瘤的能力，常作為判斷預(yù)后和觀察療效的指標(biāo)之一

9.人DC發(fā)育分化途徑

骨髓CD34+細胞分化為DC途徑

外周血單核細胞分化為DC途徑

淋巴樣DC前體細胞分化途徑

10.DC攝取抗原的途徑

①巨吞飲作用

吞飲作用：細胞骨架依賴性、膜皺褶和形成大的囊泡產(chǎn)生液相內(nèi)吞，可吞入大量液體

②受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用

DC不表達特異性受體

表達Fc受體，可有效捕捉抗原抗體復(fù)合物

表達甘露糖受體，可攝取糖化抗原

高效性、選擇性及飽和性

③吞噬作用：是指攝入直徑大于1Um的顆粒物質(zhì)的過程

攝取大顆?；蛭⑸飼r的內(nèi)吞方式

巨噬細胞吞噬很強

DC在發(fā)育某階段具有吞噬能力

11.DC促進HIVT發(fā)病機制

1.輻獲病毒：DC-d加與gpl20結(jié)合（捕獲）、CD4/CCR5與gpl20結(jié)合（感染）

2.庫存病毒：DC增殖緩慢，一般抗癌藥物無法清除

3.傳遞：將病毒傳染給T細胞

12.移植中控制DC的策略

移植前去除DC

抑制DC移行或成熟

阻斷DC與T細胞的共刺激信號

DC耐受作用，誘導(dǎo)移植嵌合體

13.DC與腫瘤靶抗原結(jié)合的方法

抗原蛋白：MHC-H類加工途徑

DNA、RNA轉(zhuǎn)染：MHC-I類加工途徑

完全腫瘤細胞性抗原

14.DC的鑒定和識別

目前面亢非常近想的用于鑒定DC的特異性分子標(biāo)記

■形態(tài)學(xué)：細胞涂片、光鏡和掃描電鏡

■組合性細胞表面標(biāo)記：流式細胞儀

■刺激T細胞增殖的能力：混合淋巴細胞反應(yīng)（MLR）

15.DC在DNA疫苗激發(fā)免疫應(yīng)答機制(DC與卵葭疫黃的關(guān)系)

■直接轉(zhuǎn)染非骨髓源性體細胞，如肌細胞

?這些細胞表達MHCI類分子，卻不表達協(xié)同刺激因子，所以不可能直接提呈抗原

?可能通過充當(dāng)外周抗原庫(Agreservoirs),定期再刺激免疫系統(tǒng)或通過交叉激發(fā)，向APC提

供抗原

■直接轉(zhuǎn)染專職APC,主要是骨髓源性DC

?新近研究表明，DNA疫苗可直接轉(zhuǎn)染DC

?經(jīng)皮DNA免疫后，在引流淋巴結(jié)DC中有抗原特異性mRNA和綠色熒光蛋白信號抗原

■交叉激發(fā)

?通過對凋亡的轉(zhuǎn)染細胞體的胞飲和吞噬作用，獲得外源性抗原

16.疫苗的分類:

減毒活疫苗滅活疫苗

多糖疫苗組分疫苗：亞單位疫苗

基因工程疫苗合成肽疫苗

抗獨特型抗體疫苗核酸疫苗

17.簡述篩選DNA疫苗目的基因的原則：

?選擇病原的主要保護性抗原基因，最好對多數(shù)毒株都有保護作用。

?可以是單個基因或具有協(xié)同保護功能的一組基因，也可以是編碼抗原決定簇的一段或數(shù)段核

甘酸序列。

?該抗原基因遺傳的分子機制已經(jīng)研究清楚。

?基因已經(jīng)被克隆，且表達調(diào)控機制較為清楚。

?目的基因在受體細胞內(nèi)最好能完整地、穩(wěn)定地整合到宿主細胞的染色體中，并能適時、適量

表達功能性蛋白。

18.載體分類:

■功能：

(1)克隆載體：用于在受體細胞中進行基因擴增的載體

(2)表達載體：用于在受體細胞中進行基因表達的載體

■來源：

(1)質(zhì)粒載體：物理或化學(xué)方法導(dǎo)入靶細胞。

(2)病毒載體：將重組載體以不同方式進行包裝，獲得重組的病毒顆粒，再感染靶細胞。

19.重組質(zhì)粒DNA的篩選與鑒定:

?根據(jù)重組載體的標(biāo)志篩選

1.藍白斑篩選：尸半乳糖甘酶(LacZ)

2.插入失活

?限制性內(nèi)切酶圖譜分析

?核甘酸序列測定

?核酸雜交(Southern)

?PCR法

?免疫學(xué)(ELISA,Western)

利用抗體與目的基因表達產(chǎn)物(蛋白)特異性結(jié)合的作用

20.免疫佐劑的作用機制:

■穩(wěn)定抗原

■在接種部位形成抗原儲存庫，緩釋抗原

■促進APC對抗原的識別與攝?。和ㄟ^形成多分子聚合物或促進抗原與APC表面受體結(jié)合。

■促進抗原的MHC-I及MHCTI類遞呈：通過促進膜融合與解體

■通過調(diào)節(jié)細胞因子網(wǎng)絡(luò)，優(yōu)先激活Thl或TH2型免疫反應(yīng)

21.MF59的作用機制

■招募APC到注射部位

■促進APC攝取抗原

■促進APC遷移

■促進APC成熟

■促進細胞因子表達

22.鋁佐劑的作用機制

1.抗原儲存庫；

2.直接或間接活化APC

①促進Nalp3炎性小體組裝

②胞膜脂質(zhì)重排

③殺死注射部位的免疫細胞

23.Tc細胞亞群的功能:

■細胞毒活性

Tel和Tc2主要通過兩種途徑殺傷靶細胞：①穿孔素途徑：當(dāng)Ca2+被鰲合，或穿孔素缺陷小鼠，

Tc都會喪失殺傷活性。②Fas/FasL途徑：活化的Tcl/Tc2表達FasL,殺傷表達Fas的靶細胞。

■輔助B細胞

Tc特別是Tc2對B細胞合成IgM有輔助作用，止匕外，經(jīng)抗CD3抗體活化的Tc2通過其表面CD40L

與B細胞表面CD40的相互作用，以及分泌大量Th2樣細胞因子輔助B細胞增殖及產(chǎn)生抗體。

■介導(dǎo)DTH

與Th中僅Thl介導(dǎo)DTH不同，Tel或Tc2都能誘發(fā)DTH反應(yīng)，且反應(yīng)的程度相近。

■分泌細胞因子

記憶性CD8+T細胞仍保持了原先Tel或Tc2亞群分泌細胞因子的格局。而且，這兩群記憶細胞

在體外都表現(xiàn)出強烈的細胞毒性，故可稱為記憶性Tel和Tc2o記憶性Tel和Tc2都分泌高水平的

IL-2,而且記憶性Tel分泌的IFN-丫的水平明顯高于Tel效應(yīng)細胞分泌的水平。

此外，Tc還是多種趨化性細胞因子的主要來源。

24.Thl和Th2介導(dǎo)的功能：

■Th頹標(biāo)前氮彘維中發(fā)揮重要作用。其作用的發(fā)揮主要通過其分泌細胞因子來調(diào)節(jié)整個免

疫系統(tǒng)。

■Thl細胞因子的生物學(xué)功能

IL-2:促進T細胞的增殖；誘導(dǎo)CTL、NK、LAK等殺傷細胞的分化和效應(yīng)功能；促進B細胞的增

殖和分化。

IFN-y：誘導(dǎo)APC細胞MHC-II抗原的表達；阻抑Th2的生長；協(xié)同IL-2誘導(dǎo)LAK活性。

LT和TNF:殺傷或抑制腫瘤細胞；提高中性粒細胞的吞噬能力；促進巨噬細胞的分化：促進IL-2、

CSF、IFN-丫的產(chǎn)生。

■Th2細胞因子的生物學(xué)功能

IL-4:促進B細胞活化與增殖，促進T細胞、肥大細胞的增殖；提高MHCTI類抗原的表達，促進

巨噬細胞遞呈抗原的能力。

IL-5:促進B細胞的分化和抗體的合成；協(xié)同IL-2誘導(dǎo)T細胞分化為CTL.

IL-6:刺激B、T細胞的生長；促進細胞分化；加速肝細胞急性期蛋白質(zhì)合成。

ILTO:抑制Thl細胞的增殖；促進肥大細胞和胸腺細胞的增殖。

■ThkTh2共同分泌的細胞因子

IL-3：促進多能干細胞、定向祖細胞、髓樣、紅樣、巨核等細胞的增殖和分化；促進T細胞的增

殖。

GM-CSF:促進多能干細胞、髓樣干細胞、單核細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞增殖和分化。

三、論述題

1.論述DNA疫苗免疫保護效果的評價？

一、細胞免疫

評價方法：T細胞功能和細胞因子的檢測

（一）淋巴細胞增殖功能的檢測（淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗）：3H-TdR摻入法，MTT法，Brdu檢測法，CFSE

標(biāo)記淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗

?原理：T細胞表面具有識別抗原的受體和有絲分裂原

受體，經(jīng)特異性抗原刺激后發(fā)生一系列的變化而轉(zhuǎn)變成

為淋巴母細胞，所以又稱為淋巴母細胞轉(zhuǎn)化。

?淋巴細胞增殖和分化是機體免疫應(yīng)答過程中的重要階段。

?檢測淋巴細胞增殖水平，了解核酸疫苗接種后，淋巴細胞

的反應(yīng)能力和免疫功能。

（二）T細胞介導(dǎo)的細胞毒作用（即殺傷試驗）

?殺傷性作用：抗原特異性，致敏的T細胞再次遇到相應(yīng)靶細胞抗原，對靶細胞的破壞和溶解作

用。

?殺傷機制：①穿孔素和顆粒酶②靶細胞的程序性死亡

原則：

適當(dāng)?shù)陌屑毎?-標(biāo)記一-按一定比例與淋巴細胞混合一-共溫一段時間-一觀察殺傷情況

1.放射測定法

（1）51Cr釋放試驗

（2）3H7dR釋放試驗

2.非放射測定法

乳酸脫氫酶（LDH）釋放試驗

（三）細胞因子（cytokines）的檢測

?定義：免疫細胞和非免疫細胞合成和分泌的具有調(diào)節(jié)多種細胞生理功能的小分子多肽類因子。

?常見：IL、IFN、CSF（巨噬細胞集落刺激因子）、TNF、TGF

（1）免疫學(xué)方法

基本原理：細胞因子（或受體）與相應(yīng)的特異性抗體（單克隆抗體或多克隆抗體）結(jié)合，通過同位

素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以放大和顯示，從而定性或定量顯示細胞因子（或受體）的水平。

常用檢測方法：ELISA、ELISP0T、熒光標(biāo)記法（FIA）、放免法（RIA）

（2）生物學(xué)方法

2.細胞增殖法

3.靶細胞殺傷法

4.細胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法

5.減少細胞損傷法

（3）分子生物學(xué)法

?原理：利用細胞因子的基因探針檢測待定細胞因子基因表達的技術(shù)。

?檢測法

1.分子雜交：斑點雜交、Northernblot等。

2.RT-PCR

二、體液免疫

（-）B細胞增殖試驗

（1）不同刺激物誘發(fā)增殖試驗

抗IgM抗體、細菌脂多糖（LPS）

3H-TDR,臺盼藍法或DNA特異性染色

（2）葡萄球菌誘導(dǎo)試驗

葡萄球菌表面SPA含量與激發(fā)B細胞轉(zhuǎn)化能力成正比。

（二）抗體檢測

（1）抗體形成細胞計數(shù)

反相溶血空斑檢測

（2）抗體滴度的監(jiān)測

1.酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）

2.免疫熒光法：直接和間接法

3.流式細胞儀（FACS）

4.放射免疫法（RIA）:液相法和固相法

5.免疫印跡法（WesternBlot）

2.論述在自身免疫性疾病中，TCV的作用機制?

1）抗獨特型反應(yīng):TCV通過活化特異性識別病理相關(guān)性自身反應(yīng)性T細胞TCR的T細胞而發(fā)揮作用o

病理性T細胞上的TCR作為抗原表位，TCV產(chǎn)生的效應(yīng)T細胞識別該表位,產(chǎn)生細胞免疫應(yīng)答，抗

獨特型T細胞識別靶細胞TCR上的獨特型表位，對靶細胞的殺傷作用受MHC限制。

2）抗活化型反應(yīng)：針對TCR的抗獨特型調(diào)節(jié)并不是TCV的唯一作用方式；也涉及到抗動力性免疫，

即抗活化型免疫。有絲分裂原活化的T細胞制成的疫苗可以刺激機體產(chǎn)生針對所有活化的T細胞免

疫。調(diào)控機制較抗獨特型弱，作用時間短，殺傷靶細胞不受MHC限制，無特異性。

機體存在對所有活化狀態(tài)T細胞起反應(yīng)的抗活化型T細胞

3）Thl/Th2細胞平衡的改變：TCV通過活化自身免疫應(yīng)答的細胞因子表型轉(zhuǎn)換，改變Thl/Th2細胞

平衡。Thl促進器官特異性自身免疫病的發(fā)生有關(guān),Th2則能防止此類疾病的發(fā)生,Thl引發(fā)同種移

植排斥反應(yīng),Th2可延長同種移植物的成活。

部分選擇題

工具酶功能

?限制性核酸內(nèi)切酶識別特異序列，切割DNA

?DNA連接酶催化DNA中相鄰的5,磷酸基和3,羥基形成二酯鍵

?DNA聚合酶Ia.合成cDNA的第二條鏈b.缺口平移c.測序d.補平

?反轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA

?多聚核甘酸激酶催化多聚核甘酸5'羥基末端磷酸化

,末端轉(zhuǎn)移酶同聚物加尾

?堿性磷酸酶切除末端磷酸基

免疫刺激序列ISS特點：

?具有回文結(jié)構(gòu)（palindromicstructure）的六聚體

?一般為5'-喋吟喋吟CG口密咤喀咤-3'

?CpG一般為非甲基化

增強免疫的常用策略：

■優(yōu)化載體

■使用肌肉再生誘導(dǎo)劑

■與細胞因子聯(lián)合

■使用免疫激活DNA序列CpGODN

■注射共刺激信號分子

■與抗原蛋白聯(lián)合應(yīng)用

■形成嵌合型或多重抗原型DNA疫苗

■多表位聯(lián)合疫苗

■MVA可加強DNA疫苗抵抗瘧疾

■電脈沖增強核酸疫苗的免疫原性

■與趨化因子聯(lián)合

■微生物蛋白的佐劑效應(yīng)

目前，疫苗的安全性問題主要有：

■導(dǎo)致腫瘤形成

■長期表達抗原

■抗DNA抗體的形成

■其他因素

目的基因的篩選原則？

1.選擇病原的主要保護性抗原基因，最好是可對多數(shù)毒株都有保護作用的抗原基因。

2.可以是單個基因或具有協(xié)同保護功能的一組基因，也可以是編碼抗原決定簇的一段核昔酸序列。

3.該抗原基因遺傳的分子機制已經(jīng)研究清楚。

4.基因已經(jīng)被克隆，且表達調(diào)控機制較為清楚。

5.目的基因在受體細胞內(nèi)最好能完整地、穩(wěn)定地整合到宿主細胞的染色體中，并能適時、適量表達

功能性蛋白。

DC與功能相關(guān)的特性：

DC相對特異性表面標(biāo)志：DC-SIGN

表達豐富的黏附分子及共刺激因子，如ICAM、LFA-3、整合素等

DC具有顯著區(qū)別于其他細胞的表面標(biāo)志：高表達CD83、CD80、CD86、HLARR、HLA-DQ等典型表

面標(biāo)記

?:?膜表面高表達MHCII類分子并具有一些相對特異性表面標(biāo)志：

■小鼠DC：33D1和NLDC145、CDllc

■大鼠DC：0X62

■人DC：CDla、CD83和BDCA2等

陽性選擇：排除所有非己MHC限制性T細胞

陰性選擇：排除或抑制自身反應(yīng)性T細胞克隆

必須至少有一個T細胞表位，才能使抗原具有免疫原性

特性T細胞表位B細胞表位

表位受體TCRBCR

MHC分子必需無需

表位性質(zhì)主要是線性多肽天然的多肽、多糖、脂多糖、

有機化合物

表位大小8T2個氨基酸（CD8+T細胞）5T5個氨基酸、5~7個單糖

12T7個氨基酸（CD4+T細胞）或5~7個核昔酸

表位類型線性表位構(gòu)象表位：線性表位

表位位置抗原分子任意部位抗原分子表面

T細胞和B細胞抗原表位的特性比較XI)

Immunology

知識點

1.DC的起源和發(fā)育：

1、起源

髓系來源的DC（myeloidDC

淋巴系來源的DC（lymphoidDC）

大多數(shù)DC來源于骨髓，由骨髓進入外周血，再分布到全身各組織。

2、DC的組織分布

■體內(nèi)DC分布廣泛，同時呈現(xiàn)高度的異質(zhì)性

■不同組織中的DC有不同的名稱

細犍稱體內(nèi)肺XHCIIFcRC3RBiibeck果能

DC細胞

濾泡DC淋巴濾泡+4/-——-

祖旨相購?fù)狭茼?+++---

胸腺DC胸腺一+?+

坪成表皮粒層及基層++++——+

胃

I,璇性DC性：黯間質(zhì)—??—

的號瞰都寸近

3、DC分化發(fā)育的

基本過程

前體階段維持非淋巴組織內(nèi)DC達到一定

水平,體外：在某些細胞因子存

在的條件下直接發(fā)育為DC;體

內(nèi)：發(fā)育為DC或岫g.

未成熟期＞主要存在于多種實體器官及

非淋巴組織的上皮

＞表達______受體一

＞刺激初始聯(lián)田胞的能力很弱

成熟期＞主要存在于淋巴結(jié)、脾

調(diào)控DC遷移的可能機制

■抗原的種類：抗原刺激體內(nèi)細胞因子的產(chǎn)生

■LPS可刺激許多細胞產(chǎn)生細胞因子：

■GM-CSF.