專實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)的評價驗證

專實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)的評價驗證本文檔共51頁；當前第1頁；編輯于星期一\11點20分2教學目的和要求：1、掌握實驗方法的分級；實驗方法選擇的目的、原則；檢測系統(tǒng)性能評價的內(nèi)容；方法評價實驗尤其是回收實驗和干擾實驗的原理和操作。2、熟悉實驗方法選擇的步驟；試劑盒的使用。3、了解試劑盒的類型和選購本文檔共51頁；當前第2頁；編輯于星期一\11點20分3第一節(jié)實驗方法的選擇

選擇準確可靠的實驗方法為臨床提供準確可靠的信息臨床生化檢驗分析保證本文檔共51頁；當前第3頁；編輯于星期一\11點20分4一、實驗方法的分級分級依據(jù)：國際臨床化學協(xié)會（IFCC）

根據(jù)分析方法的準確性與精密度的不同。常規(guī)方法參考方法決定性方法分為三級：本文檔共51頁；當前第4頁；編輯于星期一\11點20分5（一）常規(guī)方法（routinemethod）定義：

應具有足夠的精密度、準確度和特異度，有適當?shù)姆治龇秶?jīng)濟實用，其性能指標符合臨床或其它目的的需要。主要方法：

溴甲酚綠法、雙縮脲法、J-G法等。應用：

臨床常規(guī)檢驗使用，常規(guī)方法在作出評定以后，經(jīng)有關學術組織認可，可以作為推薦方法（recommendedmethod

）

。偏差已知方法偏離未知方法本文檔共51頁；當前第5頁；編輯于星期一\11點20分6（二）參考方法referencemethod定義：

是指準確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認的權威機構（國家主管部門、相關學術團體和國際性組織等）頒布的方法。這類方法干擾因素少，系統(tǒng)誤差很小，有適當?shù)撵`敏度、特異度、較寬的分析范圍并且線性良好，重復測定中的隨機誤差可以忽略不計。主要方法：

原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化學法，離子交換層析法等本文檔共51頁；當前第6頁；編輯于星期一\11點20分7應用：

能在條件優(yōu)越的實驗室作常規(guī)分析，主要用于鑒定常規(guī)方法，評價其誤差大小、干擾因素并決定是否可以被接受；用于鑒定二級標準品和為質(zhì)控血清定值；用于商品試劑盒的質(zhì)量評價。本文檔共51頁；當前第7頁；編輯于星期一\11點20分8（三）決定性方法definitivemethod定義：

是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法，其測定結果與真值最為接近。主要方法：重量分析法、中子活化法、同位素稀釋-質(zhì)譜分析法（ID-MS）本文檔共51頁；當前第8頁；編輯于星期一\11點20分9應用：

由于技術要求太高，費用昂貴，這類方法不直接用于鑒定常規(guī)方法的準確性，只用于評價參考方法與一級標準品。儲氫重量分析儀(北京英格海德分析技術有限公司)

本文檔共51頁；當前第9頁；編輯于星期一\11點20分10項目決定性方法參考方法鈣ID-MS原子吸收分光光度法氯電量滴定法、中子活化法電流滴定法鎂ID-MS原子吸收分光光度法磷ID-MS鉀ID-MS、中子活化法火焰光度法鈉重量分析法、中子活化法火焰光度法白蛋白免疫化學法總蛋白雙縮脲法肌酐ID-MS、離子交換層析法離子交換層析法尿素ID-MS尿素酶法尿酸ID-MS尿酸酶法（紫外法）膽紅素——重氮反應法葡萄糖ID-MS己糖激酶法膽固醇ID-MSAbell-Kendall法，膽固醇氧化酶法甘油三酯ID-MS酶法AST（GOT）

——MDH-NADH法ALT（GPT）——LDH-NADH法轉(zhuǎn)肽酶（r-GT）——連續(xù)監(jiān)測產(chǎn)物生成法肌酸激酶

——NAD+偶聯(lián)法本文檔共51頁；當前第10頁；編輯于星期一\11點20分11二、實驗方法選擇的目的1.結合自身條件，按照實驗方法原則選擇合適的項目方法2.臨床應用前初步評估方法分析性能和可能引入的誤差

本文檔共51頁；當前第11頁；編輯于星期一\11點20分12三、實驗方法選擇的原則1.實用性：微量快速、費用低廉、易于自動分析、安全可靠2.可靠性：較高精密度、準確度和較大的檢測能力

本文檔共51頁；當前第12頁；編輯于星期一\11點20分13四、實驗方法選擇的步驟1.提出要求2.收集資料3.選擇候選方法4.確立質(zhì)量目標5.進行初步評價

本文檔共51頁；當前第13頁；編輯于星期一\11點20分14第二節(jié)試劑盒的選擇

一、試劑盒的類型臨床生化診斷試劑種類繁多，有液體試劑、干粉試劑、干片試劑，一次性試劑包等液體試劑：臨床應用最為廣泛1.液體單試劑2.液體雙試劑二、試劑盒的選購（了解，自學）三、試劑盒的使用（了解，自學）本文檔共51頁；當前第14頁；編輯于星期一\11點20分15第三節(jié)檢測系統(tǒng)性能評價方法性能評價主要內(nèi)容：精密度、正確度、線性范圍、檢測限、抗干擾能力、生物參考區(qū)間等本文檔共51頁；當前第15頁；編輯于星期一\11點20分16在相同條件下，對同一樣本連續(xù)進行n次重復測定結果的符合程度。在有限次測定情況下，一般用（總體標準差）的估計值S（樣本標準差）和變異系數(shù)CV來表達這種精密度。定義：一、精密度評價本文檔共51頁；當前第16頁；編輯于星期一\11點20分17批內(nèi)精密度試驗：

指在相同條件下（同樣方法、同一種試劑和標準品、同樣儀器、在同一實驗室由同一人操作，并要保持實驗期間準確性不變）對同一標本在盡可能短的時間內(nèi)進行m輪n次重復測定結果之間相互接近的程度。重復性（批內(nèi)）精密度（Sω）ΣSi2mSω=Si=Σ(xt-xt)2n-1CV=SωX×100定義：重復性試驗是評價精密度常用方法，包括：(一)基本方法本文檔共51頁；當前第17頁；編輯于星期一\11點20分18日間精密度試驗定義：將同一樣本分成數(shù)份，隨機插入常規(guī)患者樣本中，每天測定一次，最少連續(xù)測定20天，計算均值、標準差、變異系數(shù)。本文檔共51頁；當前第18頁；編輯于星期一\11點20分19

1.試驗條件穩(wěn)定2.實驗標本應與真實標本有同樣基質(zhì)3.檢測系統(tǒng)應處于良好狀態(tài)(二)精密度評價注意事項：(三)性能可接受性判斷：

1.國家行業(yè)標準WS/T403-20122.美國標準CLIA’88本文檔共51頁；當前第19頁；編輯于星期一\11點20分20二、正確度評價定義:

1.大批檢測結果均值與真值的一致程度

2.指測定結果與真值接近的程度，一般用偏差和偏差系數(shù)表示。表示方法:

偏倚為重復測定均值（X）與真值之差。

偏倚系數(shù)（CB）=×100

。｜真值-X｜真值定量的標準品確認的標準方法或

1.正確度2.準確度

本文檔共51頁；當前第20頁；編輯于星期一\11點20分21影響因素：

系統(tǒng)誤差、隨機誤差（了解）Σ表示已定系統(tǒng)誤差的綜合。A=Σ+Δα（不確定度）

不確定度（uncertainty）是表達測定結果的一個組成部分，它表明被測標本中真值存在的范圍本文檔共51頁；當前第21頁；編輯于星期一\11點20分22特異度和干擾即專一性，是指在特定實驗條件下分析試劑只對待測物質(zhì)起反應，而不與其它結構相似的非被測物質(zhì)發(fā)生反應。分析方法特異度越高，則測定結果越準確。特異度（specificity）是指標本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低，這些非被測物質(zhì)稱為干擾物。干擾（interference）特異度干擾方法的準確性側面指標正面指標本文檔共51頁；當前第22頁；編輯于星期一\11點20分23（一）重復性試驗試驗的目的:

試驗的方法:

對同一材料（標準液、質(zhì)控液、標本等）分成數(shù)份試驗標本進行多次分析測定，并計算其均數(shù)、標準差與變異系數(shù)。檢測候選方法的隨機誤差（1）批內(nèi):標準液（2）日內(nèi):（3）日間:質(zhì)控液（4）平行雙份:試驗的形式:應注意的問題:（1）分析標本選擇（2）被測物濃度本文檔共51頁；當前第23頁；編輯于星期一\11點20分24(二)回收試驗試驗的目的:

試驗的方法:

將被測物標準液加人病人標本中，成為分析標本；原病人標本中加人等量的無被測物的溶劑作基礎標本；然后用候選方法測定并得到各自濃度。檢測候選方法的比例系統(tǒng)誤差?；厥?

指候選方法準確測定加入常規(guī)分析標本的純分析物的能力。本文檔共51頁；當前第24頁；編輯于星期一\11點20分25回收濃度=分析標本測得濃度-基礎標本測得濃度（實際測得值）計算:加入濃度=標準液量病人樣品量（ml）＋標準液量（ml）

×標準液濃度（理論真實值）回收率（%）=回收濃度加入濃度

×100（理想值為１００％）比例系統(tǒng)誤差＝１－回收率＝＝真實值－測定值

真實值誤差值

真實值本文檔共51頁；當前第25頁；編輯于星期一\11點20分26注意事項：吸量準確；加入標準液后，其實驗樣品的被子測濃度最好達到醫(yī)學決定水平；總濃度必須在方法分析范圍內(nèi)；需加入高中低不同濃度回收試驗，計算平均回收率；加入標準液的體積一般在10%內(nèi)；重復2-3次。本文檔共51頁；當前第26頁；編輯于星期一\11點20分27干擾試驗試驗的目的:

用來檢測候選方法的恒定系統(tǒng)誤差。干擾物濃度不同，誤差大小也不同干擾:指標本中某些非被測物質(zhì)本身不與分析試劑反應但以其它形式使待測物測定值偏高或偏低。本文檔共51頁；當前第27頁；編輯于星期一\11點20分28試驗的方法:

基本與回收試驗一樣，但在病人標本中加人的是疑有干擾或非特異性反應的物質(zhì)。將可能引起干擾的物質(zhì)配成一定濃度的溶液，加到病人標本中成為干擾分析樣本；原病人標本加人相同量的無干擾物質(zhì)的溶劑作為基礎樣本；然后用候選方法對此兩種樣本同時測定，兩者之差即表示該干擾物質(zhì)產(chǎn)生的干擾所引起的誤差，即干擾值干擾值=分析標本測得濃度-基礎標本測得濃度計算:本文檔共51頁；當前第28頁；編輯于星期一\11點20分29注意事項被試驗的物質(zhì)：膽紅素、溶血、防腐劑、抗凝劑、藥物等可疑干擾物的濃度：干擾物濃度有可能達到病理標本最高濃度值。本試驗檢測的誤差包括方法特異度不高和干擾物作用引起的誤差。消除干擾常用方法空白對照：試劑空白：常見標本空白：內(nèi)空白法和外空白法物理、化學方法分離干擾物雙波長或多波長法檢測排除干擾誤差較大又無法消除，則改進或更換方法。（分析標本就是模擬實際標本）本文檔共51頁；當前第29頁；編輯于星期一\11點20分30(四)方法對比試驗（熟悉）試驗的目的:

試驗的方法:

對一組病人的標本用候選方法和比較方法同時進行分析測定，觀察二者之間的差異。這是考驗候選方法是否可采用的重要措施。

用于檢測候選方法的系統(tǒng)分析誤差。對所得數(shù)據(jù)進行分析，可提供系統(tǒng)誤差的性質(zhì)（恒定或／和比例誤差）本文檔共51頁；當前第30頁；編輯于星期一\11點20分31①在進行臨床化學常規(guī)方法的評價時，最好選擇參考方法作為比較方法②若采用已知偏差法，則有部分誤差來自比較方法（與已知偏差一致的那部分誤差），剩余的則屬于侯選方法。③若采用未知偏差法，分析誤差可能來源于二者之一或兩者都有，難以分析。比較方法的選擇：應注意的問題:統(tǒng)計處理：配對t檢驗、相關和回歸分析直線回歸處理：

理想的回歸為：本文檔共51頁；當前第31頁；編輯于星期一\11點20分32三、可報告范圍評價定義：觀察一種檢測方法或一個檢測系統(tǒng)的檢測范圍。檢測范圍的要求：覆蓋寬，至少應該覆蓋醫(yī)學決定水平（一）實驗前準備：最理想標本：患者的新鮮低值和高值血清標本。多用人工方法制備。1.試驗樣本2.確定濃度范圍（二）樣本檢測：隨機排列，每個樣本測3-4次（三）統(tǒng)計處理:本文檔共51頁；當前第32頁；編輯于星期一\11點20分33四、檢出限的驗證

檢出限（LoD）檢測系統(tǒng)可檢測出分析物的最小值

空白限（LoB）規(guī)定的可能條件下，空白樣品被觀察到的系列檢測結果的最大值驗證LoD的程序1.試驗樣品：空白樣品、檢測限樣品2.測定次數(shù)：至少20次3.檢測LoB4.結果判斷本文檔共51頁；當前第33頁；編輯于星期一\11點20分34五、生物參考區(qū)間的驗證定義：指某項檢查結果在正常人群的分布范圍，是解釋檢驗結果、分析檢驗信息的基本尺度和依據(jù)。建立生物參考區(qū)間的方法:（一）實驗前準備1.評價對象的選擇2.采集標本：采集的注意事項（二）樣本測定（三）結果評價：95%的可信度本文檔共51頁；當前第34頁；編輯于星期一\11點20分35醫(yī)學決定水平

定義：對臨床診治疾病具有決定性作用的被分析物質(zhì)的濃度，是臨床上按照不同病情給予不同治療方案而確定的閾值。

作用：

１、判斷被檢對象有病或完全排除被檢對象有病。２、確定診斷試驗在不同病情時的變化，需要有治療及判斷預后的界值。DL3本文檔共51頁；當前第35頁；編輯于星期一\11點20分36

水平１：提示需要進一步檢查的閾值水平２：提示需要治療措施的界點水平３：提出預后或要緊急處理的界值一個診斷試驗一般確定三個決定水平：臨床生化檢驗指標的醫(yī)學決定水平本文檔共51頁；當前第36頁；編輯于星期一\11點20分37第四節(jié)檢測系統(tǒng)性能驗證和確認

一、量值溯源的基本原理

檢測系統(tǒng)

是指完成一個檢驗項目的測定所涉及的儀器、試劑、校準品、消耗品、操作程序、質(zhì)量控制程序、設備維護程序等的組合。量值溯源

通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測量結果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準，通常是與國家測量標準或國際測量標準聯(lián)系起來的特性 ［ISO17511;VIM：1993，定義6.10］本文檔共51頁；當前第37頁；編輯于星期一\11點20分量值溯源的目的 對于臨床實驗室定量檢測來說，最基本的要求是要保證試驗結果足夠準確（正確和精密），以保證臨床的正確診斷并且具有時間和空間的可比性。本文檔共51頁；當前第38頁；編輯于星期一\11點20分量值溯源的基本原理利用參考系統(tǒng)（尤其是參考方法和參考物質(zhì)）提高檢驗結果的準確性和可比性參考系統(tǒng)是溯源的基礎本文檔共51頁；當前第39頁；編輯于星期一\11點20分參考物的量值溯源等級圖制造商工作校準品制作商產(chǎn)品校準品常規(guī)樣品測定結果制造商選定測量方法制造商常設測量方法臨床用戶的常規(guī)測量方法一級參考物二級參考物一級參考測量方法二級參考測量方法SI單位不確定度溯源本文檔共51頁；當前第40頁；編輯于星期一\11點20分量值溯源的理想情況是可溯源至國際單位制SI，要溯源至國際單位，必須有一級參考測量程序目前滿足上述條件的檢驗指標有25-30種定義明確的小分子化合物（如某些電解質(zhì)，代謝產(chǎn)物和底物類、甾體激素、甲狀腺激素）本文檔共51頁；當前第41頁；編輯于星期一\11點20分檢測不能溯源到SI的情況有國際約定參考測量程序（非一級參考測量程序）和一種或多種用此參考測量程序定值的國際約定校準物質(zhì)，如GHb有一種國際約定參考測量程序,無國際約定校準物質(zhì)，如高密度脂蛋白膽固醇一種或多種國際約定校準物質(zhì)及定值方案，無國際約定參考測量程序，如抗體和腫瘤標記物等300多種指標既無參考測量程序也無校準的參考物質(zhì)本文檔共51頁；當前第42頁；編輯于星期一\11點20分臨床實驗室的溯源

欲使醫(yī)學實驗室的測量結果具有溯源性，最直接、簡便的途徑是進入“不間斷的溯源鏈”本文檔共51頁；當前第43頁；編輯于星期一\11點20分參考系統(tǒng)包括三個方面參考方法參考物質(zhì)參考實驗室其中最主要的是參考物質(zhì)和參考方法，對于有參考方法的檢驗項目，關鍵又是參考方法本文檔共51頁；當前第44頁；編輯于星期一\11點20分參考方法分類參考方法分為一級參考方法/決定性方法二級參考方法/參考方法在臨床檢驗領域所指的參考方法一般為二級參考方法。本文檔共51頁；當前第45頁；編輯于星期一\11點20分參考物質(zhì)一級參考物質(zhì)：高度純化的分析物二級參考物質(zhì)：基質(zhì)與實際樣本相似的參考物質(zhì)，二級參考物質(zhì)一般由二級參考方法定值本文檔共51頁；當前第46頁；編輯于星期一\11點20分溯源性有關文件ISO17511（2003），體外診斷醫(yī)學器具－生物樣本中量的測量－校準物質(zhì)和質(zhì)控物質(zhì)定值的計量學溯源ISO18153（2003），體外診斷醫(yī)學器具－生物樣本中量的測量－酶催化濃度校準物質(zhì)和質(zhì)控物質(zhì)定值的計量學溯源ISO15193（2002），體外診斷醫(yī)學器具－生物樣本中量的測量－參考測量程序的表述ISO15194(2002),體外診斷醫(yī)學器具－生物樣本中量的測量－參考物質(zhì)的描述ISO15195(2002),體外診斷醫(yī)學器具－生物樣本中量的測量－參考測量實驗室的要求本文檔共51頁；當前第47