病理科特殊染色操作常規(guī)

PAGE6-病理科特殊染色操作規(guī)程1．Mallory氏三色染色法（簡稱MCT法） 22．Masson氏改良三色染色法 33．VanGieson氏苦味酸酸性復(fù)紅染色法（簡稱VG法） 44．Verhoeff氏鐵蘇木素彈力纖維染色法 55．Weigert氏間苯二酚品紅染色法 66．Foot氏網(wǎng)狀纖維染色法 77．PAS過碘酸雪夫氏反應(yīng)法 88．AB-PAS阿爾辛藍(lán)過碘酸雪夫氏反應(yīng)法 99.Alcianblue染色法（pH2.5） 1010.Alcianblue染色法（pH1.0） 1111.Perls氏反應(yīng)法（顯示含鐵血黃素） 1212.Masson-Fontana氏銀染色法 1313.Groctt-Gomori氏六胺銀染色法 1414．Mallary磷鎢酸蘇木素法（PTH） 1515.梗死心肌的鑒別染色法 1616.蘇丹IV染色法 1717.油紅O染色法 1818.Mayer粘液染色法 1919.堿性剛果紅法 2020.VonKossa顯示鈣鹽法 21

1．Mallory氏三色染色法（簡稱MCT法）[試劑配制]明礬蘇木素染液0.5-1%鹽酸酒精0.5%酸性復(fù)紅水溶液：酸性復(fù)紅0.5g蒸餾水100mlMallory氏苯胺藍(lán)橘黃G溶液：水性苯胺藍(lán)0.5g橘黃G2g磷鎢酸1g蒸餾水100ml配制：先配制成1%磷鎢酸水溶液，然后用兩個燒杯，各加入約三分之一的磷鎢酸水溶液，再分別加入苯胺藍(lán)和橘黃G，稍加溫溶解。待兩液完全溶解后，分別過濾，并將濾液混合在一起。最后用剩于的磷鎢酸溶液沖洗容器亦過濾入混合容器中。染色前最好再過濾一次即可使用。[操作步驟]1.石蠟切片3~5μm，脫蠟至水洗。2.組織系用含汞鹽固定液脫去汞鹽沉淀。3.用明礬蘇木素染液染色2~3分鐘。4.水洗1~2分鐘。5.用0.5~1%鹽酸酒精液分化片刻。6.水洗返藍(lán)，鏡檢胞核著色程度。7.蒸餾水稍洗。8.用0.5%酸性復(fù)紅水溶液染色1~5分鐘。9.不經(jīng)水洗，直接用苯胺藍(lán)橘黃G染液染色20~40分鐘。10.用80%酒精液速洗一次，再以95%酒精液分化兼脫水。11.無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、堿性顆粒呈深藍(lán)色，黏液、軟骨、淀粉樣物質(zhì)呈淡藍(lán)色，纖維素、肌纖維神經(jīng)膠質(zhì)、酸性顆粒呈鮮艷的紅色，彈力纖維、紅血球、髓鞘呈橘黃色或橘紅色，細(xì)胞核呈黑藍(lán)色。

2．Masson氏改良三色染色法[試劑配制]Weigert氏鐵蘇木精麗春紅酸性復(fù)紅染液：麗春紅0.8g酸性復(fù)紅0.4g蒸餾水99ml冰醋酸1ml亮綠染液：亮綠2g蒸餾水98ml冰醋酸1ml0.2%冰醋酸水溶液1%磷鉬酸水溶液[操作步驟]1.石蠟切片脫蠟至水洗。2.蒸餾水稍洗。3.用Weigert氏鐵蘇木精或明礬蘇木素液染核5~10分鐘。4.充分水洗藍(lán)化后鏡檢。如過染時，可用0.5%鹽酸酒精稍分化，水洗。5.蒸餾水洗1~2分鐘。6.用麗春紅酸性復(fù)紅染液染色5~10分鐘。7.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。8.用1%磷鉬酸水溶液分化處理3~5分鐘。9.以0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。10.用2%亮綠染液染色3~5分鐘。11.0.2%冰醋酸水溶液浸洗片刻。12.95%酒精至無水酒精脫水。13．二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]膠原纖維呈綠色或藍(lán)色，彈力纖維呈棕色，肌纖維、纖維素、紅血球呈紅色，細(xì)胞核呈黑藍(lán)色。

3．VanGieson氏苦味酸酸性復(fù)紅染色法（簡稱VG法）[試劑配制]Weigert氏鐵蘇木素染液:蘇木精1g純酒精100ml29%三氯化鐵溶液4ml鹽酸1ml蒸餾水95ml配制將蘇木精溶于酒精內(nèi)，放置1—4周使其成熟，為A液。將29%三氯化鐵水溶液及鹽酸加入蒸餾水中為B液，臨用時A，B兩液等量混合。VanGieson氏溶液：1%酸性品紅水溶液10ml苦味酸飽和水溶液(1.22%）90ml。配制:先將兩液分別配制好備用，臨用時按所需要的比例混合，過濾后即可使用。新配制的染液著色能力強(qiáng)，放置一定時間后，染色力則逐漸減弱。[操作步驟]1.石蠟切片3~5μm，脫蠟至水洗。2.用Weigert氏鐵蘇木精或明礬蘇木素液染色5~10分鐘。3.充分水洗。4.用VanGieson氏溶液染色1~5分鐘。5.傾去染液，直接用95%酒精液急速分化約數(shù)秒鐘。6.無水酒精脫水。7．二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]膠原纖維呈紅色、肌肉、神經(jīng)膠質(zhì)、胞漿、紅血球呈黃色，細(xì)胞核呈黑藍(lán)色或棕藍(lán)色。

4．Verhoeff氏鐵蘇木素彈力纖維染色法[試劑配制]Verhoeff氏鐵蘇木素染液：5%蘇木素純酒精液20ml10%三氯化鐵水溶液8mlVerhoeff氏碘溶液8ml將上述三液分別配制貯存，臨用時按比例混合搖蕩使用。此液不可久存。Verhoeff氏碘溶液：碘2g碘化鉀4g蒸餾水100ml2%三氯化鐵水溶液5%硫代硫酸鈉水溶液[操作步驟]1.石蠟切片脫蠟蒸餾水洗。2.用Verhoeff氏染液染色15~30分鐘，至顏色呈深黑色。3.自來水洗。4.2%三氯化鐵溶液分化10~20秒鐘（至彈力纖維清晰為止）。5.充分自來水洗。6.用5%硫代硫酸鈉溶液處理5分鐘。7.充分自來水洗，再用蒸餾水洗。8.95%酒精急速分化。9.無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]彈力纖維呈黑色或藍(lán)黑色，肌纖維、纖維素、神經(jīng)膠質(zhì)呈黃色，膠原纖維呈紅色，胞核呈藍(lán)黑色。5．Weigert氏間苯二酚品紅染色法[試劑配制]Weigert氏間苯二酚品紅染液：鹽基性品紅2g間苯二酚（雷鎖辛）4g蒸餾水200ml配制:將上述染料和蒸餾水放入燒杯內(nèi)加熱煮沸，再加入29%三氯化鐵水溶液25ml,用玻璃攪棒不停的混合攪拌2-5分鐘。室溫冷卻，然后過濾，傾去濾液，將濾液和上面的沉淀物一同放回?zé)?，并置于干燥箱?nèi)烘干，烘干后取出并加入95%酒精液200ml，在水浴上加熱至沉淀物完全溶解，取出濾紙，待液體冷卻后過濾，再添補(bǔ)蒸發(fā)失去的酒精量至200ml，最后加入4ml濃鹽酸，即可應(yīng)用。此液密封可保持?jǐn)?shù)月，但其染色力能夠逐漸減弱最終失敗。VanGieson氏染液[操作步驟]1.石蠟切片脫蠟至95%酒精。2.用Weigert氏間苯二酚品紅染液1~2小時或更長時間，視染色液的新舊定。3.切片從染液中取出直接用95%酒精洗去多余染液，并分化至無余色脫下為止。此時可在鏡下觀察，如果染色彌漫不清晰，可再用1%鹽酸酒精稍加分化。4.充分水洗5分鐘。5.需復(fù)染胞核，可用明礬蘇木素水溶液染色2-5分鐘。6.水洗2-3分鐘。7.用VanGieson氏液作對比染色。8.95%酒精急速分化。9.無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]彈力纖維呈深藍(lán)色或黑藍(lán)色，膠原纖維呈紅色，肌纖維和紅血球呈黃色，胞核呈黑藍(lán)色。

6．Foot氏網(wǎng)狀纖維染色法[試劑配制]0.25%高錳酸鉀水溶液1%草酸水溶液Foot氏銀溶液：10%硝酸銀水溶液10ml40%氫氧化鈉水溶液10滴配制:取10%硝酸銀水溶液，加入40%氫氧化鈉水溶液10滴，立即產(chǎn)生棕褐色的氫氧化銀沉淀，經(jīng)搖蕩、靜置、待沉淀物全部沉底，傾去上清夜，用二次蒸餾水將沉淀洗滌3-4次，倒掉最后一次蒸餾水，再加入二次蒸餾水至10ml。然后再逐滴加入濃氨水，邊加邊搖動，直至沉淀物接近溶解為止。應(yīng)避免氨水加至過量，以能濾出一些沉淀微粒為妥。最后加至蒸餾水50ml，過濾后使用。此液只能在低溫處保存數(shù)月。2%硝酸銀水溶液20%甲醛水溶液0.2%氯化金水溶液5%硫代硫酸鈉水溶液[操作步驟]1.石蠟切片4~6μm，脫臘至水洗。2.蒸餾水稍洗。3.用0.25%高錳酸鉀水溶液氧化5分鐘。4.蒸餾水洗1~2分鐘。5.1%草酸水溶液漂白5分鐘。6.水洗1~2分鐘。7.蒸餾水稍洗。8.2%硝酸銀水溶液置于陰暗處，在室溫下染色12-24小時。9.蒸餾水速洗。10.用Foot氏銀溶液染20~40分鐘。11.蒸餾水速洗。12.用20%甲醛水溶液還原5~10分鐘（中間更換1-2次）。13.蒸餾水洗2~3分鐘。14.用0.2%氯化金水溶液調(diào)色5分鐘。15.蒸餾水洗2~3分鐘。16.用5%硫代硫酸鈉水溶液固定5分鐘。17.充分水洗，根據(jù)需要可用HE或VG氏液復(fù)染。18.95%酒精及無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]網(wǎng)狀纖維呈黑色或黑褐色，其它組織呈復(fù)染的顏色。

7．PAS過碘酸雪夫氏反應(yīng)法[試劑配制]1%過碘酸水溶液Schiff氏試劑：1mol/L鹽酸20ml堿性品紅1g亞硫酸氫鈉1g活性炭2g蒸餾水200ml配制：先將蒸餾水加熱煮沸后，去火加入堿性品紅，并不停搖蕩5分鐘使其溶解；待溶液冷卻至50攝氏度時過濾，在加入當(dāng)量鹽酸；冷至25攝氏度再加入亞硫酸氫鈉搖蕩。將容器密閉后存放暗處或冰箱內(nèi)靜止12-24小時，此時的溶液以淡黃色或無色為好，為消除溶液的顏色再加入活性炭2g，搖蕩1分鐘后過濾，溶液將成為無色透明狀態(tài)；貯存于4攝氏度冰箱內(nèi)，臨用前取出，待溶液升至室溫時使用。亞硫酸氫鈉溶液：亞硫酸氫鈉2g蒸餾水180ml1mol/L鹽酸20ml[操作步驟]1.石蠟切片3~5μm，脫臘至水洗。2.蒸餾水洗1~2分鐘。3.用1%過碘酸水溶液氧化5~10分鐘。4.充分水洗。5.蒸餾水洗滌數(shù)次。6.Schiff氏試劑染5~10分鐘（溫度低時可延長浸染時間）。7.傾去Schiff氏試劑，不經(jīng)水洗直接浸入新配制的亞硫酸氫鈉液內(nèi)洗3次，每次2分鐘，然后流水沖洗10分鐘。8.過染時可用明礬蘇木素液淺染胞核2~3分鐘，用0.5%鹽酸酒精液稍分化。9.流水沖流5~10分鐘。10.脫水、透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]糖原及其它PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)均呈紅色，細(xì)胞核呈藍(lán)色。PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)類別物質(zhì)舉例染色結(jié)果多糖糖原強(qiáng)度中性黏液物質(zhì)結(jié)腸杯狀細(xì)胞強(qiáng)度某些酸性黏液物質(zhì)酸性非硫酸含唾液黏多糖中度基底膜腎小球基底膜中度各種色素脂褐素中度脂質(zhì)腦苷脂中度淀粉樣物（某些沉著物）淀粉樣物弱度軟骨軟骨強(qiáng)度霉菌曲菌強(qiáng)度腦垂體黏液樣細(xì)胞強(qiáng)度8．AB-PAS阿爾辛藍(lán)過碘酸雪夫氏反應(yīng)法[試劑配制]1%阿爾辛藍(lán)醋酸水溶液：阿爾辛藍(lán)1g蒸餾水97ml冰醋酸3ml臨用前過濾使用，pH值為2.5-3.0之間。1%過碘酸水溶液Schiff氏試劑亞硫酸氫鈉溶液：亞硫酸氫鈉2g蒸餾水180ml1mol/L鹽酸20ml[操作步驟]1.石蠟切片3~5μm，脫臘至水洗。2.蒸餾水洗1~2分鐘。3.用1%阿爾辛藍(lán)醋酸水溶液染色10-20分鐘。4.蒸餾水洗3~4次。5.用1%過碘酸水溶液氧化5~10分鐘。6.蒸餾水洗3~4次。7.用Schiff氏試劑浸染10~20分鐘。8.傾去染液直接用亞硫酸氫鈉液洗3次，每次2分鐘。9.流水沖洗5~10分鐘。10.過染時可用明礬蘇木素液淺染胞核2~3分鐘，用0.5%鹽酸酒精液稍分化。11.充分水洗返藍(lán)。12.脫水、透明、中性樹膠封固。[結(jié)果]酸性黏液物質(zhì)呈藍(lán)色，中性黏液物質(zhì)呈紅色，混合黏液物質(zhì)呈紫紅色，細(xì)胞核呈淺藍(lán)色。

9.Alcianblue染色法（pH2.5）[試劑配制]3%醋酸水溶液1%阿爾新藍(lán)染液：阿爾新藍(lán)1g3%醋酸水溶液100ml1%中性紅水溶液[操作步驟]1．石蠟切片4~6μm，脫臘至蒸餾水洗數(shù)次。2．用3%醋酸水溶液洗滌。3．1%阿爾新藍(lán)染液染10~30分鐘。4．3%醋酸水溶液洗滌，吸水紙吸干。5．1%中性紅水溶液染細(xì)胞核2~3分鐘。6．水洗，常規(guī)脫水，透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]酸性粘液（唾液酸粘液）呈鮮藍(lán)綠色，細(xì)胞核呈紅色。

10.Alcianblue染色法（pH1.0）[試劑配制]0.1mol/L鹽酸溶液1%阿爾新藍(lán)染液：阿爾新藍(lán)1g0.1mol/L鹽酸溶液100ml1%中性紅水溶液[操作步驟]1．石蠟切片4~6μm，脫臘至蒸餾水洗數(shù)次。2．用0.1mol/L鹽酸溶液。3．1%阿爾新藍(lán)染液染10~30分鐘。4.0.1mol/L鹽酸溶液，吸水紙吸干。5．1%中性紅水溶液染細(xì)胞核2~3分鐘。6．水洗，常規(guī)脫水，透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]硫酸化性粘液呈鮮藍(lán)綠色，細(xì)胞核呈紅色。

11.Perls氏反應(yīng)法（顯示含鐵血黃素）[試劑配制]Perls氏溶液：2%亞鐵氰化鉀水溶液25ml2%鹽酸水溶液25ml兩液分別配制貯存，臨用前等量混合過濾使用。0.5%堿性品紅酒精溶液：堿性品紅0.5g50%酒精液100ml[操作步驟]1.石蠟切片4~6μm，脫臘至蒸餾水洗數(shù)次。2.用Perls氏溶液染色20~30分鐘。3.蒸餾水充分水洗。4.0.5%堿性品紅酒精溶液復(fù)染30~50秒鐘。5.直接以95%酒精液迅速分化及脫水。6.無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]含鐵血黃素成藍(lán)色，其它組織均呈紅色。

12.Masson-Fontana氏銀染色法[試劑配制]氨銀溶液：5%硝酸銀水溶液40ml濃氨水配制:取5%硝酸銀水溶液40ml，然后逐滴加入濃氨水至產(chǎn)生沉淀，逐漸溶解變清，再滴加硝酸銀水溶液數(shù)滴至溶液呈輕度渾濁為度。此溶液雖可短期保存，但最好臨用前現(xiàn)配制。0.2%氯化金水溶液[操作步驟]1.石蠟切片4~6μm，脫臘至水洗。2.蒸餾水充分洗滌3~5分鐘。3.用氨銀溶液置于避光浸染12~18小時或更長時間。4.蒸餾水洗1~2分鐘。5.用0.2%氯化金水溶液處理5~10分鐘。6.蒸餾水洗1~2分鐘。7.用5%硫代硫酸鈉水溶液固定5分鐘。8.充分水洗5分鐘。9.需要時可用HE、VG氏液或中性紅液等復(fù)染。10.95%酒精及無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]黑色素及嗜銀細(xì)胞顆粒呈黑色，其它組織呈復(fù)染的顏色。

13.Groctt-Gomori氏六胺銀染色法[試劑配制]5%鉻酸水溶液1%亞硫酸氫鈉液六胺銀液染液：環(huán)六亞甲基四胺銀原液25ml蒸餾水25ml25%硼砂水溶液（四硼酸鈉）5ml將硼砂水溶液加入蒸餾水內(nèi)，然后再加入六胺銀原液,用前配制。環(huán)六亞甲基四胺銀原液：5%硝酸銀水溶液5ml3%烏洛脫品100ml兩液混合，立即產(chǎn)生白色沉淀，振蕩后即溶解而澄清。此液放置于冰箱內(nèi)備用，可保存數(shù)月。0.1%氯化金水溶液2%硫代硫酸鈉水溶液0.2%亮綠溶液：亮綠0.2g冰醋酸0.2ml蒸餾水100ml[操作步驟]1.石蠟切片脫臘至水洗。2.用5%鉻酸水溶液氧化1小時。3.充分水洗5分鐘。4.用1%亞硫酸氫鈉液處理1分鐘，以除去殘留的鉻酸。5.流水沖洗5分鐘，然后蒸餾水洗滌。6.用六胺銀液置于45~50℃溫箱內(nèi)浸染60~90分鐘，至切片呈黑褐色為止。7.蒸餾水洗2~3次。8.用0.1%氯化金水溶液調(diào)色3~5分鐘，以除去霉菌以外的黑色背景。9.蒸餾水洗2~3分鐘。10.2%硫代硫酸鈉水溶液處理2~3分鐘，除去未還原的銀粒。11.充分水洗5分鐘。12.0.2%亮綠溶液復(fù)染2~3分鐘，亦可用VG氏液或HE復(fù)染。13.水洗1~2分鐘。14.脫水、透明，中性樹膠封固。[結(jié)果]霉菌呈黑色，背景呈復(fù)染的顏色或無色。14．Mallary磷鎢酸蘇木素法（PTH）[試劑配制]0.25%高錳酸鉀水溶液2.5-5%草酸鉀水溶液Mallary氏磷鎢酸蘇木精：蘇木素0.5g磷鎢酸0.5g蒸餾水100ml配制：用部分蒸餾水加熱溶解蘇木精用其余蒸餾水溶解磷鎢酸待完全溶解和冷卻后，將兩液混合，貯于茶色試劑瓶中。放置數(shù)月待自然氧化成熟后使用。[操作步驟]1．石蠟切片脫蠟至水。2．0.25%高錳酸鉀水溶液處理1~5~10分鐘。3．自來水沖洗2~3次，蒸餾水洗1~2次。4．2.5-5%草酸鉀水溶液，1~5分鐘，漂白為止。5．蒸餾水沖洗2~3次。6．磷鎢酸蘇木精4~12~24小時。7．迅速用95%酒精脫色兼水化。8．脫水，透明，封固。[結(jié)果]神經(jīng)膠質(zhì)纖維、纖維素、線粒體、黏液物質(zhì)等呈深藍(lán)色；胞核、彈力纖維、正常骨骼肌、心肌呈藍(lán)色，橫紋清晰；變性肌纖維呈藍(lán)黑色；膠原纖維、網(wǎng)狀纖維、骨及軟骨基質(zhì)等磚紅色或棕黃紅色。

15.梗死心肌的鑒別染色法[試劑配制]甲紫溶液：0.2%甲紫水溶液10ml1%草酸水溶液0.2ml蒸餾水40ml（混合，1小時后過濾，臨用時配制）1%磷鎢酸水溶液酸性品紅-甲綠溶液：0.01%酸性品紅溶液50ml0.01%桔黃G水溶液0.15ml0.01%甲綠水溶液15ml1%草酸水溶液0.2ml（臨用時配制，并預(yù)熱至60℃）0.5%冰醋酸水溶液[操作步驟]1．石蠟切片脫蠟至水。2．切片浸于甲紫溶液中15分鐘，流水洗10分鐘。3．1%磷鎢酸水溶液中15分鐘，流水洗3~15分鐘。4．酸性品紅-甲綠溶液中60分鐘（60℃溫箱中進(jìn)行，經(jīng)常振蕩）。5．0.5%冰醋酸水溶液中洗1~2分鐘。6．常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封固。[結(jié)果]正常心肌呈綠色，梗死心肌呈紫紅色。

16.蘇丹IV染色法[試劑配制]70%酒精溶液蘇丹IV染色液：取適量蘇丹IV使其飽和于70%酒精及丙酮等量混合液中，臨用時過濾。[操作步驟]1．冰凍切片70%酒精溶液洗數(shù)秒鐘。2．蘇丹IV染液中染5分鐘。3．70%酒精溶液洗數(shù)秒鐘。4.水洗。5．蘇木素染液染細(xì)胞核，水洗使細(xì)胞核變藍(lán)。6．甘油明膠封固