體外診斷試劑分類和常見產(chǎn)品技術(shù)原理及應用

關于體外診斷試劑分類和常見產(chǎn)品技術(shù)原理及應用第1頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三體外診斷試劑和器械在國外統(tǒng)一稱為體外診斷醫(yī)療器械。屬于醫(yī)療器械的一部分。在我國，體外診斷試劑是指：可單獨使用或與儀器、器具、設備或系統(tǒng)組合使用,在疾病的預防、診斷、治療監(jiān)測、預后觀察、健康狀態(tài)評價以及遺傳性疾病的預測過程中,用于對人體樣本(各種體液、細胞、組織樣本等)進行體外檢測的試劑、試劑盒、校準品(物)、質(zhì)控品(物)等。概念第2頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三根據(jù)國家管理類別：按照產(chǎn)品風險程度的高低，體外診斷試劑依次分為第三類、第二類、第一類產(chǎn)品。不同類的產(chǎn)品在審查、批準后頒發(fā)醫(yī)療器械注冊證書上由不同的機構(gòu)進行：第三類由國家食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準；第二類由省級食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準；第一類由市級食品藥品監(jiān)督管理局審查、批準。體外診斷試劑的分類（一）第3頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三第三類產(chǎn)品：

1．與致病性病原體抗原、抗體以及核酸等檢測相關的試劑；

2．與血型、組織配型相關的試劑；

3．與人類基因檢測相關的試劑；

4．與遺傳性疾病相關的試劑；

5．與麻醉藥品、精神藥品、醫(yī)療用毒性藥品檢測相關的試劑；

6．與治療藥物作用靶點檢測相關的試劑;

7．與腫瘤標志物檢測相關的試劑;

8．與變態(tài)反應（過敏原）相關的試劑。第4頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三除已明確為第三類、第一類的產(chǎn)品，其他為第二類產(chǎn)品，主要包括：1．用于蛋白質(zhì)檢測的試劑；2．用于糖類檢測的試劑；3．用于激素檢測的試劑；

4．用于酶類檢測的試劑；

5．用于酯類檢測的試劑；

6．用于維生素檢測的試劑；

7．用于無機離子檢測的試劑；

8．用于藥物及藥物代謝物檢測的試劑；

9．用于自身抗體檢測的試劑；

10．用于微生物鑒別或藥敏試驗的試劑；

11．用于其他生理、生化或免疫功能指標檢測的試劑。第二類產(chǎn)品：第5頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三

1．微生物培養(yǎng)基（不用于微生物鑒別和藥敏試驗）；

2．樣本處理用產(chǎn)品，如溶血劑、稀釋液、染色液等。*注：第二類產(chǎn)品中的某些產(chǎn)品，例如蛋白質(zhì)、糖類、激素、酶類等的檢測，如果用于腫瘤的診斷、輔助診斷、治療過程的監(jiān)測，或用于遺傳性疾病的診斷、輔助診斷等，則按第三類產(chǎn)品注冊管理。在藥物及藥物代謝物檢測的試劑中，如果該藥物屬于麻醉藥品、精神藥品或醫(yī)療用毒性藥品范圍，則按第三類產(chǎn)品注冊管理。第一類產(chǎn)品：第6頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三按照受理和審評分為：按照藥品受理和審評的和按照醫(yī)療器械受理審評的。一、按藥品受理和審評的體外診斷試劑：*1.ABO血型定型試劑（盒）*2.乙型肝炎表面抗原（HBsAg）試劑（盒）*3.丙型肝炎病毒（HCV）抗體試劑（盒）*4.人類免疫缺陷病毒HIV抗原/抗體診斷試劑（盒）*5.梅毒螺旋體抗體試劑（盒）6.放免試劑(盒)注：*號的品種，預期用途為血源篩查時按藥品受理和審評，為臨床診斷時，按第三類醫(yī)療器械進行管理。體外診斷試劑的分類（二）第7頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三二、按醫(yī)療器械受理和審評的體外診斷試劑：1、臨床血液學和體液學檢驗試劑2、臨床化學檢驗試劑3、臨床免疫學檢驗試劑。4、微生物學檢驗試劑5、組織細胞學檢驗試劑6、變態(tài)反應、自身免疫診斷檢驗試劑（盒）7、遺傳性疾病檢驗試劑8、分子生物學檢驗試劑9、其它檢驗試劑（盒）體外診斷試劑的分類（二）第8頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三按照技術(shù)方法分：1.比色法（顏色反應）；2.分光光度法；3.凝集法；4.散射法（沉淀反應）；5.透射比濁法（沉淀反應）；6.速率法、終點法（產(chǎn)物或底物量）；7.標記技術(shù)；8.生物親和；9.免疫技術(shù)；10.發(fā)光技術(shù)；11.熒光技術(shù)；12.放射技術(shù)；13.形態(tài)分析；14.流式細胞；15.電泳技術(shù)；體外診斷試劑的分類（三）第9頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三按照技術(shù)方法分：16.克隆技術(shù)；17.酶技術(shù)；18.基因技術(shù)；19.聚合酶鏈反應-PCR（分子生物技術(shù)）；20.雜交技術(shù)（分子生物技術(shù)）；21.印跡技術(shù)；22.層析技術(shù)；23.色譜技術(shù)；24.質(zhì)譜技術(shù)；25.溶出法；26.伏安法；27.多技術(shù)聯(lián)合應用，如：酶聯(lián)免疫、免疫比濁、放射免疫、免疫化學發(fā)光、免疫層析、熒光雜交、免疫組化、流式熒光、電極溶出伏安法等。體外診斷試劑的分類（三）第10頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三在實際應用中，單一技術(shù)往往不能滿足檢測需要，因此，診斷試劑會聯(lián)合使用多種技術(shù)。常見的體外診斷產(chǎn)品：1.生化分析儀、生化試劑；2.酶標儀、酶免試劑；3.免疫化學發(fā)光儀及試劑；4.膠體金（乳膠、熒光）免疫層析試劑；5.血細胞分析儀、細胞檢測試劑；6.尿液分析儀、尿液檢測試劑（試紙）；7.（血氣）電解質(zhì)分析儀、電解質(zhì)試劑；8.細菌、微生物培養(yǎng)及鑒定試劑；9.免疫組化染色液、液基細胞試劑、免疫印跡試劑10.PCR儀及試劑；11.血型試劑；12.流式細胞儀。

12.微量元素（原子吸收法）常見的體外診斷產(chǎn)品技術(shù)原理及應用第11頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三生化分析儀、生化試劑全自動生化分析儀；肝功類、腎功類等比色法、比濁法、散射法、速率法、終點法第12頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三酶標儀、酶免試劑酶標儀：比色計；酶免試劑：酶聯(lián)免疫法比色法抗原抗體特異性結(jié)合、酶作為標記物和催化物，加入底物產(chǎn)生顏色反應，放入比色計進行比色。第13頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三化學發(fā)光儀及試劑以酶為催化劑，通過氧化反應，使底物發(fā)光。

過氧化物酶（HRP)促發(fā)光，底物——魯米諾

堿性磷酸酶(AP)促發(fā)光，底物——螺旋金剛烷環(huán)氧化物苯磷酸酯（AMPPD)第14頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三非酶促化學發(fā)光及電化學發(fā)光非酶促化學發(fā)光：以吖啶酯、過氧化氫為發(fā)光系統(tǒng)，不需要酶的催化。儀器成本高，技術(shù)復雜，尚未國產(chǎn)化（Abbott)電化學發(fā)光：氧化反應是通過電極上的電化學反應產(chǎn)生，標記物為三氯聯(lián)吡啶釕。儀器成本高，技術(shù)復雜，尚未國產(chǎn)化。（Roche）第15頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三膠體金（乳膠、熒光）層析試劑膠體金免疫層析法：將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上，當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標記試劑后相互反應，當移動至固定的抗原或抗體的區(qū)域時，待檢物與金標試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。該法現(xiàn)已發(fā)展成為診斷試紙條，使用十分方便。第16頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三膠體金免疫層析法反應示意圖吸樣墊膠體金墊包被T線包被C線上樣墊NC膜支撐物第17頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三HIV膠體金類快速診斷試劑檢測結(jié)果第18頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三第三類）

免疫印跡試劑免疫印跡試劑盒:風濕病自身抗體檢測試劑盒（免疫印跡法）第19頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三免疫印跡法示意圖第20頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第四類）

蛋白芯片（微陣列）類試劑蛋白芯片（微陣列）：丙型肝炎病毒抗體檢測試劑盒（蛋白芯片法）；多腫瘤標志物檢測試劑盒（蛋白芯片法）第21頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第五類）

單抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（單克隆抗體）免疫組化：ImmuChem免疫組化試劑盒（單抗）免疫比濁：血清載脂蛋白A1免疫比濁試劑盒乳膠凝集：D-dimer二聚體乳膠凝集試劑盒第22頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第六類）

多抗類試劑血型定型類試劑：血型定型試劑盒（人血清/馬血清）免疫組化：癌胚抗原檢測試劑盒（多抗）免疫比濁：β-微球蛋白測定試劑盒（免疫比濁法）乳膠凝集：沙門氏菌乳膠凝集試劑盒第23頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三抗原抗原：指進入有免疫活性的組織（宿主）而引發(fā)免疫應答的物質(zhì)。或雖不能引發(fā)免疫，但可以同抗體結(jié)合的物質(zhì)。

蛋白質(zhì)，多糖，核酸，糖脂，青霉素全抗原性具有多個抗原決定族第24頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三抗體宿主對體內(nèi)存在的外來分子，微生物或其他因子的應答而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)（免疫球蛋白，丙種球蛋白）根據(jù)抗體性質(zhì)：多克隆抗體，單克隆抗體根據(jù)抗體分子結(jié)構(gòu)：IgA,D,E,G,M第25頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三IgGIgM抗體模式圖第26頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三單克隆抗體由一株淋巴細胞產(chǎn)生，針對一種抗原決定族抗原免疫小鼠-取脾臟-與瘤細胞融合-克隆篩選-單克隆抗體細胞株擴增細胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-純化抗體第27頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三流程雜交瘤技術(shù)第28頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三多克隆抗體針對多個抗原決定族抗原免疫動物-采集動物血清純化抗體第29頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第七類）

診斷血清（菌液）診斷血清：侵襲性大腸埃希氏菌診斷血清；志賀氏菌屬四種混合多價血清診斷菌液：傷寒沙門菌菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原診斷菌液第30頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第八類）

血球凝集類試劑抗體致敏血球：破傷風抗體診斷試劑（血凝法）；白喉抗體診斷試劑（血凝法）第31頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第九類）

核酸擴增類試劑熒光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒PCR-ELISA：結(jié)核分支桿菌檢測試劑盒（核酸擴增酶聯(lián)免疫法）PCR-毛細管電泳：性染色體多倍體（分型與突變）檢測試劑盒；PCR-電泳：α-地中海貧血基因診斷試劑盒（gap-PCR法）轉(zhuǎn)錄介導擴增（TMA）：沙眼衣原體與結(jié)核分枝桿菌檢測試劑盒第32頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三PCR基本原理示意圖第33頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三PCR過氧化物酶聯(lián)物96孔酶標法加樣分析觀察數(shù)據(jù)PCR產(chǎn)物的檢測

96孔酶標法

第34頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十類）

基因芯片（微陣列）類試劑基因芯片（微陣列）：α-地中海貧血基因芯片診斷試劑盒PCR-雜交：人乳頭瘤病毒基因分型檢測試劑盒（PCR-反向雜交法）第35頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十一類）

探針放大（原位雜交）類試劑bDNA類：HIV-1bDNA檢測試劑盒；mRNA檢測試劑盒(生物素原位雜交法)第36頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三探針放大類試劑--支鏈DNA技術(shù)病毒的RNA釋放后加入微孔板中——板孔中包被有可與病毒特異結(jié)合的一系列靶探針（TargetProbe），另一系列靶探針的一端可標記在游離的病毒核酸鏈上，另一端可與bDNA結(jié)合——bDNA信號放大——加入酶標記物對結(jié)合的bDNA進行標記——經(jīng)過清洗后加入底物進行反應，測定反應強度。第37頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十二類）

普通生化類試劑（十萬級要求）（包括酶類化學試劑、凝血試劑類等試劑）酶類化學試劑:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）測定試劑盒；堿性磷酸酶（ALP）測定試劑盒凝血試劑:凝血酶原時間（PT）測定試劑盒；組織纖溶酶原激活物（t-PT）測定試劑盒第38頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三普通生化類試劑(十萬級要求)（1）★原理：

臨床普通生化類試劑是一類用于測定人血液、尿液等中各項生化指標的試劑。含有各種非特異性蛋白成分，要求在十萬級潔凈環(huán)境中生產(chǎn)。檢測方法均為比色法，方法學原理均為顯色反應。

★產(chǎn)品涉及：1、酶類：含酶、輔酶與牛血清白蛋白等、劑型為干粉或液體。2、血凝類：試劑組分中含有其他活性類組分（如兔腦粉等）?！锷a(chǎn)工藝：原材料稱量、溶解、定容、中試、分裝、組裝、成品檢驗?！镪P鍵控制點：原料稱量、配制、物料平衡?！都殑t》要求：應在10萬級凈化環(huán)境中進行生產(chǎn)操作。第39頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十三類）

普通生化類試劑（清潔環(huán)境）（包括一般化學試劑、血氣電解質(zhì)類、血液分析儀用試劑類等）一般化學試劑：無機離子（鋁、鎘等）測定試劑盒；白蛋白測定試劑盒（BCG法）；總膽固醇測定試劑盒（COD-CE-PAP法）血氣電解質(zhì):電解質(zhì)分析儀隨機試劑；生化分析儀用稀釋液、沖洗液血液分析儀用試劑:血液分析儀用稀釋液、溶血劑第40頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三普通生化類試劑（清潔環(huán)境）★原理：與普通生化試劑（十萬級要求）類相同?！锂a(chǎn)品涉及：無機離子檢測、血氣電解質(zhì)類、血液分析儀用試劑類等試劑?！锕に囈螅撼a(chǎn)可在清潔環(huán)境中進行操作外，生產(chǎn)工藝和關鍵控制點與普通生化試劑（十萬級要求）類相同。第41頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十四類）

干化學類試劑干化學試劑（條、卡或盒）：干化學尿液分析試紙條；尿微量白蛋白（UALB）測試卡第42頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三干化學類試劑

◆原理：以濾紙為載體，將各種試劑組分浸漬后干燥，作為試劑層，固定在支持物上，試紙上的各測試塊與被測樣品中的成分發(fā)生酶化學反應，使試紙塊發(fā)生不同的顏色變化，顏色深淺與樣品中的成份含量成正比，再由光電耦合元件對測試塊的顏色進行判讀，達到測定樣品中化學成分含量的目的。◆生產(chǎn)工藝主要環(huán)節(jié)：

特定試劑的配制、試劑條的浸潤、干燥、切割、分包裝等；第43頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三（第十五類）

藥敏類試劑藥敏紙片（卡）：抗生素藥敏紙片；隨機專用藥敏試劑（盒）（卡）第44頁，講稿共48頁，2023年5月2日，星期三藥敏類試劑

●原理：是將抗菌藥物吸收到特定的紙片中，然后置于已接種待測