第七章經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)黑白般

經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)1本文檔共57頁；當(dāng)前第1頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)2本文檔共57頁；當(dāng)前第2頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分沉淀反應(yīng)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體在液相或凝膠中特異性結(jié)合后，形成的免疫復(fù)合物在一定條件下出現(xiàn)的蛋白質(zhì)析出現(xiàn)象。

3本文檔共57頁；當(dāng)前第3頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分沉淀反應(yīng)原理沉淀原（precipitinogen）沉淀素（precipitin）4本文檔共57頁；當(dāng)前第4頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分沉淀反應(yīng)的種類

1．溶液中沉淀反應(yīng)

2．凝膠中沉淀反應(yīng)5本文檔共57頁；當(dāng)前第5頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分溶液中沉淀反應(yīng)是指在清徹透明的液體中，呈溶解狀態(tài)的抗原與抗體在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，可凝聚成為肉眼可見的絮狀或顆粒狀的不溶性沉淀物。6本文檔共57頁；當(dāng)前第6頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分絮狀沉淀試驗(yàn)康氏反應(yīng)（Kahn‘stest）:心肌提取的類脂質(zhì)抗原+反應(yīng)素（Aegagin）敏感性高，特異性差，易出現(xiàn)假陽性。(1991年首批淘汰)性病研究實(shí)驗(yàn)室法(venerealdiseaseresearchlaboratory，VDRL)心擬脂及卵磷酯+反應(yīng)素（Aegagin）不需加熱的血清反應(yīng)素試驗(yàn)(unheatedserumreagin)心擬脂及卵磷酯+氯化膽堿+反應(yīng)素（Aegagin）7本文檔共57頁；當(dāng)前第7頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分反應(yīng)最適比測(cè)定（1）抗原稀釋法（Dean-Webb法）（2）抗體稀釋法（Ramon法）（3）方陣法或棋盤格滴定法（checkerboardtitration）8本文檔共57頁；當(dāng)前第8頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分環(huán)狀沉淀試驗(yàn)

（ringprecipitationtest）Ascoli于1902年建立用于檢查獸類內(nèi)臟、毛皮浸液等標(biāo)本中的炭疽桿菌抗原9本文檔共57頁；當(dāng)前第9頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫比濁法

（immunoturbidimetry）優(yōu)點(diǎn)：校正曲線穩(wěn)定，簡(jiǎn)便快速，易于自動(dòng)化，無放射性核素污染缺點(diǎn)：特異性、靈敏度稍差10本文檔共57頁；當(dāng)前第10頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫比濁法的分類（1）透射比濁法（transmissionturbidimetry）（2）散射比濁法（nephelometry）（3）免疫膠乳濁度測(cè)定法（immunolatexturbidimetry）（4）速率抑制免疫比濁法（rateinhibitionimmunoturbidimetry）11本文檔共57頁；當(dāng)前第11頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫沉淀技術(shù)

（Immunoprecipitationassay）12本文檔共57頁；當(dāng)前第12頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫共沉淀技術(shù)

（Co-Immunoprecipitationassay）13本文檔共57頁；當(dāng)前第13頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分GSTPULLDOWN14本文檔共57頁；當(dāng)前第14頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分小G蛋白結(jié)合活性檢測(cè)15本文檔共57頁；當(dāng)前第15頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫共沉淀的局限性（1）難以檢測(cè)低親和力和短暫的相互作用（2）不能夠確切分辨第三種蛋白的橋聯(lián)作用（3）靈敏度不如親和色譜高（4）需對(duì)未知蛋白的相關(guān)信息有一定了解16本文檔共57頁；當(dāng)前第16頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分染色質(zhì)免疫共沉淀17本文檔共57頁；當(dāng)前第17頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分RNA免疫沉淀在生理狀態(tài)下對(duì)結(jié)合在RNA上的蛋白質(zhì)進(jìn)行免疫沉淀，然后通過基因芯片或者其它手段檢測(cè)目的RNA的含量。18本文檔共57頁；當(dāng)前第18頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫沉淀中抗體的選擇19本文檔共57頁；當(dāng)前第19頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫共沉淀技術(shù)的應(yīng)用20本文檔共57頁；當(dāng)前第20頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分單相免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

（singleimmunodiffusion）21本文檔共57頁；當(dāng)前第21頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

（doubleimmunodiffusion）22本文檔共57頁；當(dāng)前第22頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫電泳

（immunoelectrophoresis）23本文檔共57頁；當(dāng)前第23頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分對(duì)流免疫電泳

（counterimmunoelectrophoresis）24本文檔共57頁；當(dāng)前第24頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分火箭免疫電泳

（rocketimmunoelectrophoresis）25本文檔共57頁；當(dāng)前第25頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分交叉免疫電泳

（crossedimmunoelectrophoresis）26本文檔共57頁；當(dāng)前第26頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫固定電泳

（immunofixationelectrophoresis）首先將蛋白質(zhì)抗原進(jìn)行電泳分離，電泳后直接將抗體加于蛋白質(zhì)區(qū)帶表面，抗體與對(duì)應(yīng)的抗原就會(huì)直接結(jié)合，形成的復(fù)合物嵌于固相支持物中。27本文檔共57頁；當(dāng)前第27頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫印漬技術(shù)

（immunoblotting）28本文檔共57頁；當(dāng)前第28頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)29本文檔共57頁；當(dāng)前第29頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分凝集反應(yīng)

（agglutination）

顆粒型抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，抗原與抗體充分反應(yīng)相互聚集，形成肉眼可見的凝集團(tuán)塊。凝集原（agglutinogen）凝集素（agglutinin）30本文檔共57頁；當(dāng)前第30頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分凝集反應(yīng)特點(diǎn)1．凝集反應(yīng)中抗原顆粒較大抗原，長(zhǎng)期靜置或離心沉淀可自然下沉２．凝集反應(yīng)中凝集塊主要由抗原形成，而在沉淀反應(yīng)中，沉淀物主要由抗體形成３．凝集反應(yīng)：需稀釋免疫血清中的抗體，使抗體分子不致于過多；沉淀反應(yīng)：為了不使抗原過多則需稀釋抗原31本文檔共57頁；當(dāng)前第31頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分直接凝集反應(yīng)

（directagglutination）肥達(dá)氏反應(yīng)（Widalreaction）：一種試管凝集反應(yīng)。用已知的傷寒桿菌O、H抗原和甲、乙型副傷寒桿菌H抗原，與病人血清作定量凝集試驗(yàn)，以測(cè)定患者血清中無相應(yīng)抗體存在，作為傷寒、副傷寒診斷的參考。32本文檔共57頁；當(dāng)前第32頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分血型檢測(cè)

細(xì)胞膜表面血清中A型：A抗原抗B抗體B型：B抗原抗A抗體AB型：A和B抗原無抗A和抗B抗體O型：無A和B抗原有抗A和抗B抗體33本文檔共57頁；當(dāng)前第33頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分間接凝集反應(yīng)

（indirectagglutination）34本文檔共57頁；當(dāng)前第34頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分反應(yīng)類型（1）正向間接凝集反應(yīng)（forwardindirectagglutination）（2）反向間接凝集反應(yīng)（reverseindirectagglutination）（3）間接凝集抑制反應(yīng)（indirectagglutinationinhibitiontest）35本文檔共57頁；當(dāng)前第35頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分間接凝集抑制反應(yīng)36本文檔共57頁；當(dāng)前第36頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分病毒的血凝粘病毒、痘類病毒、呼吸道腸道病毒、某些腺病毒等37本文檔共57頁；當(dāng)前第37頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分橋梁凝集反應(yīng)38本文檔共57頁；當(dāng)前第38頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分共同凝集反應(yīng)39本文檔共57頁；當(dāng)前第39頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分玫瑰花環(huán)種類40本文檔共57頁；當(dāng)前第40頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分玫瑰花環(huán)試驗(yàn)

（rosettetest）41本文檔共57頁；當(dāng)前第41頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)42本文檔共57頁；當(dāng)前第42頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分43本文檔共57頁；當(dāng)前第43頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)利用補(bǔ)體作為一種通用試劑來檢測(cè)反應(yīng)體系中抗原抗體復(fù)合物的存在，并利用補(bǔ)體對(duì)紅細(xì)胞的裂解作用，通過紅細(xì)胞的變化可以很容易地對(duì)反應(yīng)進(jìn)行示蹤。44本文檔共57頁；當(dāng)前第44頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分溶血試驗(yàn)

（hemolyticassay）1942年Rutstein和Walker建立了測(cè)定血清中總補(bǔ)體活性的方法。即根據(jù)能使反應(yīng)體系中50%的致敏綿羊紅細(xì)胞發(fā)生溶血的血清的量，計(jì)算出每毫升血清中補(bǔ)體的含量。血清中每毫升補(bǔ)體含量（單位）=1/血清用量×稀釋倍數(shù)45本文檔共57頁；當(dāng)前第45頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

（complementfixationtest，CFT）1906年Wasermann就將其應(yīng)用于梅毒的診斷，即著名的華氏反應(yīng)。46本文檔共57頁；當(dāng)前第46頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分被動(dòng)紅細(xì)胞溶解試驗(yàn)

（passivehemolysistest）將已知抗原吸附在紅細(xì)胞表面，然后加入待測(cè)的抗體和補(bǔ)體，若待測(cè)抗體和抗原能夠特異性結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，就會(huì)激活補(bǔ)體的活性，進(jìn)而造成紅細(xì)胞的裂解。47本文檔共57頁；當(dāng)前第47頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分溶血空斑試驗(yàn)

（hemolyticplaqueassay，HPA）48本文檔共57頁；當(dāng)前第48頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分間接溶血空斑試驗(yàn)間接法一般用于測(cè)定溶血效率較低的IgG或IgA型抗體，反應(yīng)過程中需要加入抗球蛋白抗體輔助溶血空斑的形成。49本文檔共57頁；當(dāng)前第49頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分改良型溶血空斑試驗(yàn)50本文檔共57頁；當(dāng)前第50頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分反向溶血空斑試驗(yàn)51本文檔共57頁；當(dāng)前第51頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分免疫粘附血凝試驗(yàn)利用補(bǔ)體的C3b就會(huì)與紅細(xì)胞表面的CR1發(fā)生免疫粘附而出現(xiàn)凝集現(xiàn)象來有效地測(cè)定各種抗原、抗體或補(bǔ)體含量。52本文檔共57頁；當(dāng)前第52頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)一.沉淀反應(yīng)二.凝集反應(yīng)三.補(bǔ)體參與的抗原抗體反應(yīng)四.中和反應(yīng)53本文檔共57頁；當(dāng)前第53頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分中和反應(yīng)

（neutralizationtest）將待測(cè)血清與一定量的病原微生物混合，經(jīng)適當(dāng)時(shí)間作用后，接種于動(dòng)物或細(xì)胞，觀察待測(cè)血清中是否存在特異性抗體以及抗體能否保護(hù)易感的試驗(yàn)動(dòng)物免于死亡或抑制病毒對(duì)細(xì)胞的毒害作用。54本文檔共57頁；當(dāng)前第54頁；編輯于星期三\9點(diǎn)44分中和反應(yīng)優(yōu)勢(shì)（1）直