生物產(chǎn)品分析與檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)一、乳酸菌飲料中乳酸菌的微生物檢驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?理2.。驗(yàn)原理需的將量產(chǎn)品品種和質(zhì)量的依據(jù)。乳養(yǎng)的長(zhǎng)水氨類(lèi)酸、生質(zhì)基定酸將酸檢定好平酸。料1基改良C培養(yǎng)基(MdiidCes培養(yǎng)基)2儀和器具（2l（ll養(yǎng)均。培。實(shí)法：酸培數(shù)1.樣品稀釋先將酸拌品25ml加入盛有22l三為1然菌適。2.制平板用釋液l置作2至6的良C培養(yǎng)基倒平皿，迅速轉(zhuǎn)。3.培養(yǎng)和計(jì)數(shù)于養(yǎng)擇菌。果1.指示劑顯色反應(yīng)使C3。2.鏡檢形態(tài)可制桿加菌。3.計(jì)數(shù)結(jié)果公式：平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)稀釋度重復(fù) 1 2 1 2 1 2菌落數(shù)平均數(shù)報(bào)告八、思考1.？2.加CaCO？實(shí)驗(yàn)二、發(fā)酵制品中大腸菌群的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、學(xué)習(xí)食品中大腸菌群檢測(cè)程序、方法；2、掌握食品中大腸菌群檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告方式。二、實(shí)驗(yàn)原理。該菌主要來(lái)源于人畜糞便斷有。料1、設(shè)備和材料玻片接種針2、培養(yǎng)基及試劑乳糖（E、液3、樣品酵腸四、驗(yàn)法驟1、采樣及稀釋①以無(wú)作樣25g放有2l滅菌生理鹽水器以8的速理1n成∶0。②用l滅菌吸取10稀液有l(wèi)滅理或稀液管振勻成：10的稀釋液用1支l滅菌吸，上作次作10倍遞稀釋液③根據(jù)食品衛(wèi)生要求或稀種3。也可直接用樣品接種。2.乳糖初發(fā)酵試驗(yàn)定品細(xì)。內(nèi)在l以糖；l及l(fā)以下者料管稀種3管，36）0C箱，培（4±2h有，程行3.分離培養(yǎng)0將產(chǎn)氣的發(fā)紅康（±）C箱養(yǎng)1804.乳糖復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)到的革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌，確能發(fā)酵乳糖產(chǎn)生氣體。群發(fā)酵管，置61）C（2±）h，情。糖管發(fā)氣為為性。5.報(bào)告根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN每1（g菌的可數(shù)。管號(hào) 釋度 發(fā)酵 離驗(yàn) 形態(tài) 發(fā)酵 驗(yàn)果123456789報(bào)告實(shí)驗(yàn)三傷寒疫菌免疫力實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?理是寒染寒有征是。傷寒及副傷寒的傳播途徑是經(jīng)由一些受到病者或帶菌者的糞便或尿液所沾染的飲食而者人些不斷排放病菌的人員處理副寒病報(bào)有100約0。料鼠菌寒苗驟經(jīng)6℃0分鐘加溫（用方菌不防的稀每l含菌2.508為14~16g鼠少0每射，射2隔7后9~11天進(jìn)行毒菌攻擊射1D于0l鼠3少5射1及1/2D于0.l察3，染2MLD及1MLD者應(yīng)全部死染1/2MLD部疫組至護(hù)7。：實(shí)驗(yàn)四光化學(xué)熒光分析法測(cè)定氨芐青霉素一實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆ɡ戆逼S青霉素(Ampic用控制細(xì)菌感染的一類(lèi)重要的青霉素類(lèi)抗生素,屬?gòu)V譜抗多數(shù)G+菌的素,陰性桿菌的作青。但腸球菌對(duì)氨芐青霉素較為敏對(duì)G素大霉素,與四環(huán)素相仿,對(duì)傷寒桿菌,大腸桿菌的抗菌作用較強(qiáng),綠膿桿菌和金葡菌對(duì)本品耐藥.主要用效氯素仿腦癥腦炎雙及菌腦其青甙用強(qiáng)。鑒于其特殊的藥理作用其質(zhì)量控制就顯得更為重要。目前國(guó)內(nèi)外主要通過(guò)高效液相色譜法來(lái)測(cè)定氨芐青霉素的含量,本實(shí)驗(yàn)采用光化學(xué)熒光分析法來(lái)測(cè)定其粉針劑中氨芐青的。實(shí)料青（）F0型光計(jì)Y-1計(jì)W高壓汞燈（破除玻璃外殼）A型Ph計(jì)2%溶液四、實(shí)驗(yàn)步驟：將藥物樣品稀釋?zhuān)贫ㄈ芤?，移取一定量的藥物溶液于l干燥燒杯中，加入2.ml,h=56至l取2l于l容量瓶中入1.00ml2%用H置于處測(cè)量熒光相強(qiáng)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：該氨素為實(shí)驗(yàn)一動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)是用無(wú)菌操作的方法將動(dòng)物織(官條化衰象。等分化構(gòu)胞等的胞的易技我們忽因脫體—。、學(xué)、及等本培代。兩洗細(xì)察。滅菌實(shí)的用器熱和濾過(guò)除菌法消。實(shí)理。清何物質(zhì)。如有毒的化學(xué)物質(zhì)，哪怕殘留．個(gè)，也可能影響細(xì)胞生長(zhǎng)。滅菌手段的選擇十分同方被介其用圍。實(shí)料品材料：無(wú)臭氧型紫外燈，微孔濾膜直徑2孔徑為．22，微孔濾膜直徑9孔徑為．2μ，過(guò)濾器直徑2)藥品：7％或75酒精，．％新潔爾滅，煤酚皂溶液來(lái)蘇兒水，．％過(guò)氧乙酸，乳酸37甲醛高錳酸鉀Na酸重鉻酸鉀濃硫酸工業(yè)DE體積分?jǐn)?shù)％的焦炭酸二乙酯(diethylpyrearbonate)]儀器：超凈臺(tái)，干燥箱，高壓鍋，過(guò)濾器，過(guò)濾泵。實(shí)驟一清洗1．新玻璃器皿的清洗先用自來(lái)水刷洗，再浸泡％稀鹽酸以中和玻璃表面的堿性物質(zhì)和其害。2洗(1使用過(guò)的培養(yǎng)用品應(yīng)立即浸入清水，避免干涸難洗。(2用洗滌劑清洗玻璃器皿，自來(lái)水清洗數(shù)遍，倒置自然干燥。()酸性洗液過(guò)夜。()酸性洗液撈出后自來(lái)水沖洗10．1次去除殘余酸液，蒸餾水涮洗次，倒置烘干。()裝牛皮紙或一般紙)。(6高壓(1磅20min)熱(10℃2菌。()存?zhèn)溆?。．膠塞的處理(1新膠塞應(yīng)先用清水清洗之后再用0．2％Na沸l(wèi)O-20min(2自來(lái)水清洗10次。()用1％稀鹽酸浸泡30min()來(lái)水清洗10次，蒸餾水涮洗次晾干，高壓滅菌見(jiàn)二)消毒與滅菌)。舊膠塞不必理劑次過(guò)蒸餾使。（）消毒1物法(1紫外線(xiàn)消毒的料培養(yǎng)皿、培用。(2干熱滅菌于，至160℃，保溫9010m用于R取實(shí)驗(yàn)的用品則需180℃，保溫－8h。(3)菌、膠品塞)無(wú)液(如Han、PS20×SSC等)。手動(dòng)高壓滅菌鍋操作如下：壓，。②加熱高壓鍋。將放氣閥打開(kāi)，放氣50min，以。③待鍋內(nèi)水沸騰后，落下放氣閥繼續(xù)升溫升壓，玻璃器皿等用15磅(121℃0mi膠、塑料制品、溶液等可用0磅(5)0n火大持壓。④停止加熱，待壓力自然下降至0再打開(kāi)放氣閥排汽，開(kāi)。電熱自動(dòng)滅菌鍋使用說(shuō)明(型號(hào)：SANYOAutoclaeMLS-3020)①放氣筒加水至L平線(xiàn)處將與高壓鍋相連的導(dǎo)氣管插入放氣筒里然后將放氣筒歸于。②打開(kāi)高壓鍋蓋加入蒸餾水至高壓鍋底的水位線(xiàn)水位線(xiàn)位于型凹槽的1／3－2／3處。開(kāi)。④設(shè)定及為105－12℃用121℃20—0n。⑤把待高壓的物品置于高壓鍋內(nèi)，順時(shí)針?lè)较驅(qū)xhtcl。壓示紅止。⑦按st開(kāi)始高壓，在溫度達(dá)80℃時(shí)顯示器開(kāi)始顯示溫度，當(dāng)溫度達(dá)到所需的設(shè)定度在亮蜂鳴器報(bào)警一聲。當(dāng)壓力降至0M，蜂鳴器再報(bào)警一聲。溫度降至80℃時(shí)，蜂鳴器報(bào)警0。⑧關(guān)電源，開(kāi)高壓鍋蓋，取出已滅菌的物品，烘干。)菌用料如濾量大的培養(yǎng)用液常用較大型號(hào)的金屬濾器(直徑90m0m2等配泵使用。過(guò)濾量較小的液體常用注射器推動(dòng)的塑料小濾器直徑205。濾膜孔徑有．6μ、．4μ、．3μ、．2μ、．10m等，以．2μ除菌最為難膜。①在過(guò)濾器上裝上微孔濾膜，孔徑為．2μ。布濕后。．化學(xué)消毒法：(1075酒精超凈臺(tái)里常備70酒精棉球衛(wèi)生級(jí)酒精用于手和一些金屬器械作的。(2．％新潔爾滅：主要用于手和前臂的清洗以及工作后超凈臺(tái)面的清潔。超凈臺(tái)旁應(yīng)常備盛有．％新潔爾滅溶液的容器及紗布。(蘇兒水煤酚皂溶液：主要用于無(wú)菌室桌椅、墻壁、地面的消毒和清洗，以及空氣噴細(xì)明。(4％過(guò)氧乙酸是強(qiáng)效消毒劑1m可將芽孢菌殺死。用于各種物品的表面消毒，撒式。(酸蒸氣：將乳酸放入坩鍋內(nèi)用酒精燈或電爐加熱至沸騰為止。將門(mén)窗緊閉—?？芍形铩?6醛加高錳酸鉀：使用前先緊閉門(mén)窗。將3％甲醛用酒精燈或電爐加熱至沸騰后斷電或滅火。用一張紙盛好適量的高錳酸鉀，迅速放人已加熱好的甲醛中形成蒸氣?！?d達(dá)的。．煮沸消毒急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15用。注項(xiàng)清洗玻璃制品時(shí)浸酸之后一定要用自來(lái)水沖洗1—1次因?yàn)闅埓娴南匆簩?duì)細(xì)胞粘附大品料表面后細(xì)胞不易貼壁。TpTu定要用超聲清洗處理后逐個(gè)清洗。如沒(méi)有洗凈會(huì)影響次的。．干熱滅菌時(shí)，應(yīng)在白天使用烤箱，并不斷觀察，以免發(fā)生意外。當(dāng)溫度超過(guò)100℃時(shí)，不能再打開(kāi)烤箱門(mén)。至1器、制用菌．．高壓滅菌后器皿務(wù)必晾干或烘干，以防包裝紙潮濕發(fā)霉。．牛血清、大部分培養(yǎng)基、胰酶和一些生物制劑是有機(jī)溶液，均不能高壓如T秋水仙素，谷氨酰胺，異硫氰酸胍，MO。．濾過(guò)除菌時(shí)，濾器在使用前先裝好濾膜有時(shí)可在上面加一層定性濾紙，包好，經(jīng)高壓，壓力數(shù)字以為宜壓力太大時(shí)微孔濾膜可能破裂或使某些微生物變形而通過(guò)濾膜裝濾釘擰緊壓進(jìn)高滅菌之后，再擰緊使用。．使用化學(xué)消毒法時(shí)，配制75酒精應(yīng)用衛(wèi)生級(jí)，不要用化學(xué)純、分析純和優(yōu)質(zhì)純酒精。水膚消所物事備全并使消毒者徑上重害。六思考題1。．紫外線(xiàn)消毒的適用范圍和目的是什么?I傳代細(xì)胞養(yǎng)與觀察一實(shí)驗(yàn)?zāi)康膫饔^長(zhǎng)況二、實(shí)驗(yàn)原理傳代培養(yǎng)是瓶以2或2另養(yǎng)的培養(yǎng)。當(dāng)成時(shí)酶和破用和胺乙鹽化。，、調(diào)是菌。驗(yàn)品1器材解剖剪、科剪(尖頭、彎頭)眼科鑷(尖頭、彎頭)、培養(yǎng)皿、量筒、試管、瓶瓶)裝好，9．9xl04Pa(15磅菌3n。試。2劑L磷鹽緩沖液(Ps)、液細(xì)胞消：．5和oAEEM液3%酰胺o．5％臺(tái)盤(pán)藍(lán)等3料癌胞、方法在做傳養(yǎng)養(yǎng)鏡致密單層，如已長(zhǎng)成單層，即可進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。.制:EEM液牛清雙抗(1位／m1)3胺7．4NaO3

%10%加至約100單位／11調(diào)至68—．02液:，。.裝在上入A量A或0.04l十液留翻轉(zhuǎn)培瓶隙孔小空隙，縫隙為讓。此時(shí)，可倒去消化液，加入新配制的營(yíng)養(yǎng)液201。營(yíng)胞細(xì)，散行。4養(yǎng)好胞做標(biāo)志注細(xì)代于養(yǎng)上均，于37℃養(yǎng)。.觀察(1；胞養(yǎng)2h后：A.首先要觀察培度B.觀察培養(yǎng)姬顏色。C.如細(xì)胞已生長(zhǎng)，則要觀察細(xì)胞的形態(tài)特征并判斷其所處的生長(zhǎng)階段。觀察時(shí)可參照(2)的描進(jìn)行。D．觀察。(2胞及征的察的情況—一個(gè)連續(xù)長(zhǎng)為5界限?，F(xiàn)分別描述如下：A及為數(shù)。B期(壁)間(約7—8h)便在上(不同細(xì)形細(xì)立粒。養(yǎng)以到7h胞包括由幾個(gè)細(xì)胞形成的細(xì)胞島(即由少數(shù)細(xì)胞緊密聚集而呈現(xiàn)的孤立細(xì)胞群，常散在地分布在瓶壁上)，到細(xì)胞鋪滿(mǎn)整個(gè)瓶壁(即所謂形成細(xì)胞單層)的過(guò)程。此期細(xì)胞形態(tài)為多角形(現(xiàn)胞征。壁長(zhǎng)級(jí)“十：十積細(xì)瓶積)的25％以?xún)?nèi)有般要觀察35個(gè)視野內(nèi)的細(xì)。細(xì)效的5—5。的7—。壁5。十期(增期。D這細(xì)明黃色黃色。E．衰退期：由于溶液中營(yíng)養(yǎng)的減少和日齡的增長(zhǎng)，以及代謝產(chǎn)物的累積等因素，此時(shí)間現(xiàn)胞進(jìn)染脫下。、思考題1．簡(jiǎn)述細(xì)胞傳代培養(yǎng)的操作程序及注意。3?3．簡(jiǎn)述體外。實(shí)驗(yàn)二植物細(xì)胞組織培養(yǎng)一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛷?qiáng)織技對(duì)作。實(shí)理植物全性植胞成的為物全性。性物養(yǎng)其始義已物的離即、織原技。（Pimsi蔬作豌豆根、功包米至的常點(diǎn)病救品產(chǎn)量。三．實(shí)驗(yàn)材料儀器設(shè)備酒精燈三角燒瓶培養(yǎng)皿鑷子剪刀剖針雙筒解剖顯微鏡光或；料煙草豌。劑（）M培養(yǎng)基，植物激素：N6-；（）飽和漂白粉液（次氯酸鈉；（）7精、10酒精、酒精棉球；（4水驟莖養(yǎng)⑴芽6苗0株取1厘米浸入7%的中1，毒15此用水沖洗5滅上入中。⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長(zhǎng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶三生。⑶將挑好的莖尖移到S07μ萘乙酸(NAA)+.4μ6-芐基腺嘌呤（6上養(yǎng)。（4），下養(yǎng)實(shí)驗(yàn)三酵母菌細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)酵母菌原生質(zhì)定。二、實(shí)驗(yàn)原理菌酒是隨科的步傳源術(shù)經(jīng)處的（者母。僅學(xué)應(yīng)酵。本實(shí)驗(yàn)以釀酒酵母為材料的母體一不時(shí)溫所實(shí)程設(shè)計(jì)應(yīng)綜種生上養(yǎng)可細(xì)完態(tài)即受個(gè)。生制長(zhǎng)酵易可不數(shù)8期也略有差異，一般在121小時(shí)之間（1細(xì)胞/。制成的原生質(zhì)體懸浮液在℃條8件下保存～小時(shí)，不會(huì)影響融合再生率。所以欲進(jìn)行原生質(zhì)體融合，應(yīng)在制備后盡快進(jìn)以過(guò)響。分離過(guò)程中的β巰基乙醇可使細(xì)胞壁組分中的二硫鍵破壞，使蝸牛酶易于分解細(xì)胞壁。此外，滲透壓的調(diào)節(jié)可用0.8m、1％蔗糖，或者0.6mol液。KCl三、實(shí)驗(yàn)材料菌種：釀酒酵母SP-48、L-母：和：菌。液體YEPD000分ml瓶（蛋白胨2葡萄糖2酵母浸膏1自然p值）高滲YE000lkcl 52.液養(yǎng)基瓊脂P：2000ml檸檬酸2克溶于10升蒸餾水中磷酸氫二鈉143620升蒸餾水中取檸檬酸溶液6升取磷酸氫二鈉溶液13升混合得20毫升PB高滲PB取10毫升P加入KCL52.185PEG-CaCl醇6000克至1升高滲P溶液中使氯化鈣為0.4mol/l0.β巰基乙醇，無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾.蝸牛酶液:1.5%酶用高滲P緩沖溶液配制，無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾.粉YEPDS0l(入kcl 525g) YPD液入2（白胨%粉% 母膏1% 自然pH值）四、實(shí)驗(yàn)步驟。1原生質(zhì)體的制備:(1)菌種培養(yǎng):將酵母菌sp-48和L母化接斜面.環(huán)sp-48酵母和母轉(zhuǎn)入l完全培養(yǎng)基中,3養(yǎng)16-18h.(2)收集細(xì)胞液5ln離心10上清液.檸檬酸磷酸緩沖液(PB)次，收集菌體(3)取l%β巰醇PB中0溫,以10轉(zhuǎn)/心10min,去上液(4)脫壁的P－4菌泥兩只心管入5ml1.%酶-PB溶液置0℃水浴中處理,取樣鏡檢,當(dāng)80%以上的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樵|(zhì)體n離心1,用PB液離心洗滌入l滲PB成106l以上的原生質(zhì),率原生質(zhì)體形成率=酶解前菌落計(jì)數(shù)未形成原生質(zhì)體菌數(shù))酶解前菌落計(jì)數(shù)×100%2原生質(zhì)體再生率測(cè)定:將制到23×07個(gè),取l原生質(zhì)體用PB液稀釋后涂布在高滲完全培（YPD和基(YD).30養(yǎng)2落,接用無(wú)菌水稀，。100%再生平板得總菌數(shù)未形100%質(zhì)生＝酶解前總菌數(shù)未