熒光分光光度計使用

熒光分光光度計使用工作原理熒光產(chǎn)生的原理熒光的定義：某些物質(zhì)受紫外光或可見光照耀激發(fā)后能放射出比激發(fā)光波長較長的光。熒光產(chǎn)生的原理：化學(xué)物質(zhì)能從外界吸取并儲存能量如光能、化學(xué)能等而進入激發(fā)態(tài)，當(dāng)磁輻射的形式放射即發(fā)光。熒光化合物的兩種特征光譜熒光激發(fā)光譜，就是通過測量熒光體的發(fā)波長激發(fā)光引起熒光的相對效率。熒光放射光譜，如使激發(fā)光的波長和強度保持不變，而讓熒光物質(zhì)所產(chǎn)生的熒光通過放射的譜圖稱為熒光光譜。物質(zhì)的激發(fā)光譜和熒光放射光譜，可以用作該物質(zhì)的定性分析。當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用關(guān)系，可以用作定量分析。熒光分析法的靈敏度一般較紫外分光光度法或比色法為高，濃度太大的溶液會有“自熄滅”作用，以及由于在液面四周溶液會吸取激發(fā)光，正比，故熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進展。熒光放射的特點：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在承受能量后即刻引起發(fā)光而一旦停頓供能，發(fā)光熒光現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消逝。溶液熒光光譜通常具有的特征：斯托克斯位移：在溶液熒光光譜中，所觀看到的熒光的波長總是大于激發(fā)光的波長。熒光放射光譜的外形與激發(fā)波長無關(guān)。熒光放射光譜的形成與吸取光譜的外形有鏡像關(guān)系熒光的猝滅：熒光分子的輻射力量在受到激發(fā)光較長時間的照耀后會減弱甚至猝滅，這是用的熒光。因此熒光物質(zhì)的保存應(yīng)留意避開光特別是紫外光的直接照耀和與其他化合物的接觸。熒光效率：熒光分子不會將全部吸取的光能都轉(zhuǎn)變成熒光，總或多或少地以其他形式釋放。熒光效率是指熒光分子將吸取的光能轉(zhuǎn)變成熒光的百分率，與放射熒光光量子的數(shù)值成正比。熒光效率=放射熒光的光量分子數(shù)熒光強度吸取光的光量子數(shù)激發(fā)光強度)放射熒光的光量子數(shù)亦即熒光強度，除受激熒光分子有其特定的吸取光譜和放射光譜熒光光譜光波峰時，得到的熒光強度也最大。測量原理稀溶液IF=2.303φFI0εcb,其中，I0為激發(fā)光強度為熒光強度;φf為熒光效率b為液池厚度;ε和c分別為發(fā)光物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù)和摩爾濃度。技術(shù)指標：波長掃描范圍：220-900nm波長精度：1.5nm;狹縫范圍：0.15-20nm信噪比：S/N150以上水拉曼峰測定，狹5nm)最高掃描速度：5，500nm/min操作規(guī)程開機確認所測試樣液體或固體，選擇相應(yīng)的附件。先開啟儀器主機電源，預(yù)熱半小時后啟動RF-530XPC，儀器自檢通過后，即可正常使用。測樣spectrum模式在“AcquireMode”中選擇“Spectrum”模式。對于做熒光光譜的樣品，“Configure”中“Parameters”的參數(shù)設(shè)置如下：Type”Emission;給定EX波長EM的掃描范圍最大范圍設(shè)定掃描速度掃描間隔狹縫寬度，點擊“OK”完成參數(shù)的設(shè)定。對于做激發(fā)光譜的樣品，“Configure”中“Parameters”的參數(shù)設(shè)置如下：EM波長EX的掃描范圍最大范圍設(shè)定掃描速度掃描間隔狹縫寬度，點擊“OK”，完成參數(shù)的設(shè)定。在樣品池中放入待測的溶液，點擊“Start”，即可開頭掃描。掃描完畢后，系統(tǒng)提示保存文件?？稍凇癙resentation”中選擇“Graf”“Radar”“BothAxesCtrl+R”來調(diào)整顯示結(jié)果范圍在“Manipulate”中選擇“PeakPick”來標出峰位，最終在“Channel”中進展通道設(shè)定。述操作步驟對固體樣品同樣適用。Quantitativ模式在“AcquireMode”中選擇“Quantitative”模式。中“Parameters”的參數(shù)設(shè)置如下：Method選擇“MultiPointWorkingCurve;“OrderofCurve”中選擇“1st和“No”;EX、EM波長設(shè)定狹縫寬度，點擊“OK”，完成參數(shù)的設(shè)定。在樣品池中放入裝有空白溶液的比色皿后執(zhí)行“AutoZero”命令校零點。點擊“Standard”模式，制作工作曲線。將樣品池中的空白溶液換成一系列的濃度的樣品標準溶液進展測量，執(zhí)行“Read”命生成一條“熒光強度濃度”曲線。在“Presentation”中選擇“Display“Save”為擴展名為“.std”的文件。工作曲線制備完畢，即可進入未知樣的測量，選擇進入“Unknown”模式，將樣品池中的濃度標準溶液換成待測樣品溶液，執(zhí)行“Read”命令，即可得到相應(yīng)的熒光強度和相應(yīng)“Save”為擴展名為“.qnt”的文件。TimeCourse模式在“AcquireMode”中選擇“TimeCourse”模式。中“Parameters”的參數(shù)設(shè)置如下：EXEM波長設(shè)定狹縫寬度設(shè)定反響時間讀取速度讀取點數(shù);點擊“OK”，完成參數(shù)的設(shè)定。在樣品池中放入裝有空白溶液的比色皿后執(zhí)行“AutoZero”命令校零點。將樣品池中的空白溶液換成待測溶液，點擊“Start”，即可開頭掃描。掃描完畢后，即可得到熒光強度對時間的工作曲線。將此工作曲線“Save”為擴展名為“.TMC”的文件。關(guān)機留意事項請留意疼惜液體比色皿，特別是測試有機污染，影響透光度。固體樣品池僅剩一個，測試完畢請物歸原處。測試完畢請留意登記，關(guān)閉儀器。分子吸取、熒光、磷光輻射躍遷無輻射躍遷——去活化過程處于激發(fā)態(tài)分子不穩(wěn)定，通過輻射或非輻射振動弛豫在液相或壓力足夠高的氣相中，處于激發(fā)態(tài)的分子因碰撞將能量以熱的形式傳遞給四周的程，稱為振動弛豫。內(nèi)轉(zhuǎn)換對于具有一樣多重度的分子，假設(shè)較高電子能級的低振動能層與較低電子能級的高振動能層S2-S1;T2-T1。定性分析任何熒光都具有兩種特征光譜：激發(fā)光譜與放射光譜。它們是熒光定性分析的根底。激發(fā)光譜轉(zhuǎn)變激發(fā)波長，測量在最強熒光放射波特長激發(fā)光譜。激發(fā)光譜外形與吸取光譜外形完全相像，經(jīng)校正后二者完全一樣這是由于分子吸取光能的過程就是分子的激發(fā)過程。激發(fā)光譜可用于鑒別熒光物質(zhì)在定量時，