病原性球菌及檢驗(yàn)

病原性球菌(qiújūn)及檢驗(yàn)第一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件1.簡(jiǎn)述病原性球菌的概念及種類(lèi)。2.熟悉(shúxī)常見(jiàn)病原性球菌的主要生物學(xué)特性、臨床意義。3.說(shuō)出葡萄球菌、鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。

學(xué)習(xí)(xuéxí)目的與要求第二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

對(duì)人有致病性的球菌主要引起(yǐnqǐ)化膿性炎癥,又稱(chēng)化膿性球菌。主要包括有1、G+球菌：葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌。2、G-球菌：腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、卡他布蘭漢菌等。第三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件第一節(jié)葡萄球菌(pútáoqiújūn)屬

(Staphylococcus)

第四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（一）形態(tài)(xíngtài)與染色

G+，球形，無(wú)鞭毛、無(wú)芽孢，呈葡萄串狀排列。一、生物學(xué)特性第五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）培養(yǎng)特性

營(yíng)養(yǎng)：要求不高，耐鹽。

液體(yètǐ)：均勻渾濁生長(zhǎng)

普通瓊脂平板：

血液瓊脂平板：高鹽甘露醇平板：金黃色葡萄球菌為淡橙黃色菌落(jūnluò)；其他葡萄球菌為白色菌落。第六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）生化反應(yīng)

活潑

分解多種糖類(lèi)(tánɡlèi)、蛋白質(zhì)、氨基酸。(如：葡萄糖，麥芽糖，蔗糖，甘露醇）

觸酶（＋）（區(qū)別于鏈球菌屬）第七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（四）抗原(kàngyuán)構(gòu)造１、蛋白抗原（ＳＰＡ）２、多糖抗原

金黃色葡萄球菌：核糖醇磷壁酸（檢測(cè)磷壁酸Ａｂ有助于金葡菌感染診斷）凝固酶（－）：甘油磷壁酸第八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（五）分類(lèi):３２個(gè)種及亞種１、按色素分類(lèi)：金、白、檸２、按凝固酶分類(lèi)：凝固酶陰性、凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌３、按噬菌體分類(lèi)：金葡菌分為(fēnwéi)5群26型4.據(jù)色素、生化反應(yīng)分：

金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌第九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

三種葡萄球菌的主要(zhǔyào)性狀性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌色素金黃色白色白色或檸檬色血漿凝固酶+－－α溶血素+－－耐熱核酸酶+－－甘露醇+－－SPA+－－致病性強(qiáng)弱無(wú)第十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（六）抵抗力無(wú)芽胞菌中最強(qiáng)，耐干燥，對(duì)石炭酸、升汞、龍膽紫敏感。易產(chǎn)生耐藥性變異，如：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)（MRSA）。MRSA常呈多重耐藥，對(duì)青霉素、氧氟沙星及紅霉素的敏感率分別為1.3%、3%及14%。第十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

長(zhǎng)期住院、反復(fù)使用各種(ɡèzhǒnɡ)廣譜抗菌藥物、燒傷或有傷口的病人及與MRSA定植或感染的病人接觸都是造成院內(nèi)MRSA流行的危險(xiǎn)因素。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。MRSA定植或感染的人員及院內(nèi)環(huán)境污染是引起院內(nèi)流行的主要來(lái)源。

耐甲氧西林(xīlín)金黃色葡萄球菌（MRSA）第十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、致病性和免疫性(一)致病物質(zhì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生多種侵襲性酶與外毒素。1．血漿凝固酶（coagulase)：分：結(jié)合型凝固酶、游離型凝固酶。

鑒別(jiànbié)金黃色葡萄球菌的重要指標(biāo)。

2．葡萄球菌(pútáoqiújūn)溶血素（staphylolysin）第十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3．殺白細(xì)胞素（leukocidin）4．腸毒素（enterotoxin）：（A、B、C1、C2、C3、D、E、G、H9個(gè)血清型）5．表皮剝脫毒素（exfoliativetoxin）6.毒性(dúxìnɡ)休克綜合征毒素1（toxicshocksyndrometoxin1,TSST1）第十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）所致疾病

1．侵襲性疾?。海?）皮膚軟組織感染

特點(diǎn)：病灶(bìngzào)局限且膿汁粘稠

（2）內(nèi)臟器官感染(gǎnrǎn)

（3）全身(quánshēn)感染

（4）尿路感染第十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件2．毒素(dúsù)性疾病

（1）食物中毒

（2）燙傷(tàngshāng)樣皮膚綜合征由表皮剝脫毒素引起。

（3）毒性(dúxìnɡ)休克綜合征由TSST1引起

（4）假膜性腸炎

第十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件人類(lèi)凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）感染中以表皮葡萄球菌的感染最為常見(jiàn)。CNS主要引起以下幾種感染：泌尿系感染，細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，敗血癥等，其中大多為醫(yī)院內(nèi)感染。此外，心臟起搏器安裝、置換人工心臟瓣膜、長(zhǎng)期腹膜(fùmó)透析、靜脈滴注等亦可造成凝固酶陰性葡萄球菌的感染。3、凝固(nínggù)酶陰性葡萄球菌的致病性第十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集（二）檢驗(yàn)程序(chéngxù)

（三）檢驗(yàn)方法第十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件三、微生物學(xué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集根據(jù)(gēnjù)病情采集標(biāo)本

種類(lèi)：膿液、傷口分泌物、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便等。

注意：無(wú)菌操作，避免污染。第十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）葡萄球菌檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序膿液、咽拭子、穿刺(chuāncì)液尿液、痰液腦脊液血液(xuèyè)糞便、嘔吐物直接涂片染色增菌培養(yǎng)分離培養(yǎng)（血平板）分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇平板）取可疑菌落鑒定試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)涂片染色血漿凝固酶耐熱核酸酶其他鑒定試驗(yàn)報(bào)告初報(bào)第二十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法1、直接涂片適用于：正常情況下無(wú)菌的標(biāo)本（如腦脊液）伴有炎癥細(xì)胞(xìbāo)的其他體液標(biāo)本、膿液等初步報(bào)告：“查見(jiàn)革蘭陽(yáng)性葡萄狀排列球菌，疑為葡萄球菌(pútáoqiújūn)”或：“查見(jiàn)類(lèi)似葡萄球菌的革蘭陽(yáng)性球菌”第二十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件2、分離(fēnlí)培養(yǎng)

50ml葡萄糖肉湯（增菌）

渾濁(húnzhuó)無(wú)菌（7天）報(bào)告(bàogào)：無(wú)菌生長(zhǎng)腦脊液、膿液、穿刺液、咽拭、尿液血平板血液標(biāo)本5ml糞便、嘔吐物高鹽甘露醇平板第二十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法3、鑒定試驗(yàn)（1）血漿凝固酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)（+）（2）甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（3）耐熱核酸酶試驗(yàn)：金黃色葡萄球菌（+）（４）腸毒素測(cè)定：金黃色葡萄球菌產(chǎn)生（5）SPA檢測(cè)：金黃色葡萄球菌（6）凝固酶陽(yáng)性和凝固酶陰性的葡萄球菌鑒定（7）API葡萄球菌鑒定試劑盒第二十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（四）結(jié)果評(píng)價(jià)(píngjià)和報(bào)告1、金黃色葡萄球菌：無(wú)論任何標(biāo)本中分離到均應(yīng)鑒定并報(bào)告臨床。2、表皮葡萄球菌及腐生葡萄球菌：從輸液導(dǎo)管、人工植入組織(zǔzhī)中分離到，應(yīng)視為致病菌。3、尿培養(yǎng)計(jì)數(shù)：>103-104為陽(yáng)性菌尿標(biāo)準(zhǔn)。4、其他凝固酶陰性葡萄球菌：引起感染流行或治療失敗時(shí)，應(yīng)鑒定到種。5、金黃色葡萄球菌（MRSA)：頭孢菌素類(lèi)抗生素體外藥敏試驗(yàn)為敏感時(shí)，不應(yīng)報(bào)告，因體內(nèi)試驗(yàn)已證實(shí)MRSA對(duì)該類(lèi)抗生素耐藥。第二十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件第二節(jié)鏈球菌屬

(Streptococcus)第二十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、鏈球菌第二十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色(rǎnsè)

G+，球形或橢圓形，呈鏈狀排列，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。第二十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、生物學(xué)特性（二）培養(yǎng)特性

條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，多數(shù)為兼性厭氧菌，少數(shù)專(zhuān)性厭氧。

液體：沉淀生長(zhǎng)（絮狀或顆粒狀）。

普通瓊脂(qióngzhī)平板：不生長(zhǎng)。

血液瓊脂平板：第二十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）生化反應(yīng)(fǎnyìng)

活潑

分解多種糖類(lèi)、蛋白質(zhì)、氨基酸。菊糖（-）膽汁溶菌試驗(yàn)（-）optochin敏感試驗(yàn)（-）

觸酶（-）（區(qū)別于葡萄球菌屬）（區(qū)別(qūbié)甲鏈與肺鏈）第二十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（四）抗原(kàngyuán)構(gòu)造

１、多糖抗原（C抗原）：群特異性。２、蛋白抗原（M、T、R、S）型特異性，與致病有關(guān)的是M蛋白抗原。3、核蛋白抗原：無(wú)特異性。

第三十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件多糖(duōtánɡ)抗原蛋白質(zhì)抗原(kàngyuán)核蛋白抗原(kàngyuán)鏈球菌抗原構(gòu)造模式圖莢膜第三十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（五）分類(lèi)40個(gè)種及亞種

１、按溶血情況分類(lèi)：（1）甲型溶血性鏈球菌：菌落周?chē)?～2mm寬的草綠溶血環(huán)，稱(chēng)甲型溶血或α溶血。為條件致病菌。

（2）乙型溶血性鏈球菌：菌落周?chē)纬梢粋€(gè)(yīɡè)2～4mm寬的透明溶血環(huán)，稱(chēng)乙型溶血或β溶血。又稱(chēng)溶血性鏈球菌。致病力強(qiáng)，引起多種疾病。（3）丙型鏈球菌：無(wú)溶血環(huán)，不致病第三十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件２、按抗原結(jié)構(gòu)(jiégòu)分類(lèi)：

按C抗原分群：ABCD…20群，對(duì)人致病的以A群為主。按M蛋白分型：如A群：100個(gè)型，B群：4型，C群：13個(gè)型。（五）分類(lèi)(fēnlèi)第三十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（六）抵抗力不強(qiáng)，60℃30min殺死，對(duì)多種消毒劑敏感(mǐngǎn)。乙鏈：對(duì)青霉素、四環(huán)素、紅霉素等敏感。第三十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、致病性和免疫性（一）致病物質(zhì)1、鏈球菌溶血素（1）鏈球菌溶血素O(SLO)SLO抗體(kàngtǐ)

抗鏈球菌溶血素O試驗(yàn)：協(xié)助診斷風(fēng)濕熱（>1:400)（2）鏈球菌溶血素S(SLS)：無(wú)抗原性。2、致熱外毒素（猩紅熱毒素(dúsù)/紅疹毒素(dúsù)）3、M蛋白第三十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

4、透明質(zhì)酸酶5、鏈激酶6、鏈道酶第三十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）所致疾病主要由A群鏈球菌引起(yǐnqǐ)。1、化膿性感染：由皮膚傷口侵入，經(jīng)呼吸道侵入，其他途徑（如產(chǎn)褥熱、蜂窩組織炎）特點(diǎn)：病灶界限不清,膿汁稀薄2．中毒性疾病(jíbìng)：猩紅熱由產(chǎn)生致熱外毒素的A族鏈球菌所致的急性呼吸道傳染病。第三十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3．變態(tài)反應(yīng)(biàntàifǎnyìng)性疾病：風(fēng)濕熱急性腎小球腎炎二、致病性和免疫性4．其他(qítā)疾?。杭仔停ú菥G色）鏈球菌：引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。第三十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件三、微生物學(xué)(wēishēnɡwùxué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本采集(cǎijí)

（二）檢驗(yàn)程序（三）檢驗(yàn)方法第三十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（一）標(biāo)本采集(cǎijí)

根據(jù)病情采集標(biāo)本

種類(lèi)：膿液、鼻咽拭子、血液等風(fēng)濕熱查血清抗體第四十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）鏈球菌的檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序痰、膿、穿刺(chuāncì)液咽拭子等腦脊液血液直接涂片(túpiàn)染色測(cè)抗原分離培養(yǎng)增菌培養(yǎng)(5%CO2葡萄糖肉湯)血平板（5%CO2）可疑菌落鑒定試驗(yàn)初步報(bào)告血清學(xué)鑒定（分群）桿菌肽試驗(yàn)

optochin膽汁溶菌試驗(yàn)其他鑒定敏感試驗(yàn)試驗(yàn)第四十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）鏈球菌的檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法（1）直接鏡檢：（痰、膿、穿刺液、咽拭子等）初報(bào)：發(fā)現(xiàn)G+球菌(qiújūn)，呈鏈狀排列第四十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

（2）分離(fēnlí)培養(yǎng)：①血液、腦脊液肉湯增菌

②膿液、咽拭子等血平板分離第四十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（3）鑒定鏈球菌的主要試驗(yàn)：根據(jù)形態(tài)、菌落、溶血情況進(jìn)行：①桿菌肽敏感(mǐngǎn)試驗(yàn)：A群敏感(d>10mm)②Optochin敏感試驗(yàn)：肺炎鏈球菌d>18mm，d<15mm為陰性。③膽汁溶菌試驗(yàn)：肺炎鏈球菌+

④CAMP試驗(yàn)：Ｂ群無(wú)乳鏈球菌為＋

第四十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件⑤血清學(xué)鑒定：試劑盒STREPTEX。用亞硝酸抽提待測(cè)菌的群特異性抗原(kàngyuán)，分別與包被有抗體的膠乳顆粒反應(yīng)。⑥抗O試驗(yàn)(shìyàn)：風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、急性腎小球腎炎，效價(jià)>400為+第四十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、肺炎(fèiyán)鏈球菌

(S.pneumoniae)屬鏈球菌科，鏈球菌屬。廣泛分布于自然界，主要寄生(jìshēng)于人類(lèi)上呼吸道，多數(shù)不致病。第四十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、生物學(xué)特性（一）形態(tài)與染色G+，矛頭狀，成雙（或短鏈）排列(páiliè)，無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞，有莢膜。第四十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）培養(yǎng)特性

條件：營(yíng)養(yǎng)要求較高，兼性厭氧菌，5-10%C02生長(zhǎng)最好。產(chǎn)生自溶酶。

液體：培養(yǎng)24h呈均勻混濁，后期因產(chǎn)生自溶而變得澄清。

普通(pǔtōng)瓊脂平板：不生長(zhǎng)。

血液瓊脂平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)（α溶血）

第四十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）生化(shēnɡhuà)反應(yīng)

活潑

分解多種糖類(lèi)。菊糖（多數(shù)+）膽汁溶菌試驗(yàn)（+）Optochin試驗(yàn)(+)區(qū)別(qūbié)甲鏈與肺鏈第四十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（四）抗原構(gòu)造

１、莢膜多糖抗原：據(jù)此將肺炎鏈球菌分85型，對(duì)人致病的有20多型。Ⅰ-Ⅲ型引起大葉性肺炎。

２、菌體多糖抗原：可與CRP反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀(chéndiàn)。

3、M蛋白抗原：型特異性。

第五十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（五）抵抗力較弱，加熱56℃，20min即死亡。對(duì)一般(yībān)消毒劑敏感，對(duì)干燥抵抗力較強(qiáng)。莢膜變異：有莢膜的光滑（S）型菌有毒力，失去莢膜的粗糙（R）型毒力減低(jiǎndī)或消失。（六）變異性第五十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、致病性和免疫性（一）致病物質(zhì)

1、莢膜：肺炎球菌的致病力，主要是莢膜的抗吞噬作用(tūnshìzuòyònɡ)。

2、蛋白粘附素、脂磷壁酸、肺炎鏈球菌溶素O等

溶血毒素“O”：自溶后釋放，能溶解人和動(dòng)物的紅細(xì)胞，高濃度對(duì)動(dòng)物有壞死及致死作用。第五十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）所致疾病

存在于正常人上呼吸道，為條件致病菌，僅在人體抵抗力下降時(shí)才引起疾病?？梢穑捍笕~性肺炎，胸膜炎，膿胸(nónɡxiōnɡ)，慢性支氣管炎，中耳炎，腦膜炎，敗血癥等。第五十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件三、微生物學(xué)(wēishēnɡwùxué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本(biāoběn)采集痰液，膿液，血液，腦脊液等。（二）檢驗(yàn)程序（三）檢驗(yàn)方法第五十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序痰、膿腦脊液血液(xuèyè)直接涂片分離(fēnlí)培養(yǎng)革蘭染色、美蘭染色莢膜腫脹試驗(yàn)增菌培養(yǎng)（葡萄糖肉湯、硫酸鎂肉湯）（血平板）挑選可疑菌落純培養(yǎng)初報(bào)兔血清肉湯小白鼠毒力試驗(yàn)涂片莢膜腫脹試驗(yàn)?zāi)懼芫囼?yàn)菊糖發(fā)酵Optochin試驗(yàn)藥敏試驗(yàn)報(bào)告第五十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法1、直接鏡檢適用于：痰、膿、腦脊液標(biāo)本。

報(bào)告：“找到肺炎鏈球菌”

2、分離培養(yǎng)

硫酸鎂肉湯：均勻(jūnyún)混濁生長(zhǎng)，有綠色熒光。

血平板：灰白色，圓形，扁平，較小，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)（α溶血）

第五十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3、鑒定(jiàndìng)試驗(yàn)（1）莢膜腫脹試驗(yàn)（2）膽汁溶菌試驗(yàn)：+（3）Optochin試驗(yàn)：+（4）菊糖發(fā)酵試驗(yàn)：+（5）小鼠毒力試驗(yàn)：有毒力的菌株，接種后12-36h，死亡。

第五十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件膽汁(dǎnzhī)溶菌試驗(yàn)陽(yáng)性：加入膽汁或10%去氧膽酸鈉，37℃，5-10min，激活(jīhuó)本菌的自溶酶，出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象。第五十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件Optochin敏感試驗(yàn)(shìyàn)陽(yáng)性：取肉湯培養(yǎng)液均勻涂于血平板上用optochin紙片貼于接種區(qū)中央（或分區(qū)劃線法，紙片貼于1-2區(qū)），35℃需氧培養(yǎng)過(guò)夜，抑菌圈>18mm。第五十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件Optochintest

第六十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件肺炎鏈球菌的主要鑒定(jiàndìng)依據(jù)1、鏡下形態(tài)：革蘭陽(yáng)性球菌，矛頭狀成雙排列，平端相對(duì)，尖端向外；2、血平板菌落特點(diǎn)：直徑0.5-1.5mm，灰白色，半透明，光滑（有些(yǒuxiē)菌株為粘液狀），扁平，周?chē)胁菥G色溶血環(huán)。培養(yǎng)或放置24h以上，菌落中央可塌陷，呈臍窩狀。3、生化鑒定：Optochin試驗(yàn)+，膽汁溶菌試驗(yàn)+。第六十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件肺炎(fèiyán)鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌的鑒別

形態(tài)菌落血清膽汁(dǎnzhī)菊糖Opto-小鼠肉湯溶菌chin毒力試驗(yàn)肺鏈甲鏈矛頭狀，稍大，濕潤(rùn)(shīrùn)渾濁++++成雙，扁平，有莢膜臍窩狀圓形，較小，稍干，沉淀————無(wú)莢膜圓，凸起第六十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（四）結(jié)果(jiēguǒ)評(píng)價(jià)和報(bào)告

乙型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌為毒力強(qiáng)的致病菌，無(wú)論從任何臨床標(biāo)本中分離出均應(yīng)報(bào)告(bàogào)臨床。及時(shí)鑒定和報(bào)告咽部標(biāo)本中分離出的化膿性鏈球菌，有利于早期治療，以減少并發(fā)癥（如風(fēng)濕熱，腎小球腎炎）的產(chǎn)生。

草綠色鏈球菌在重癥感染時(shí)，應(yīng)鑒定到種。第六十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件第三節(jié)腸球菌(qiújūn)屬

是腸道中的正常(zhèngcháng)菌群導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)感染：如尿路感染、腹部和盆腔感染、敗血癥、腦膜炎。第六十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、生物學(xué)特性(tèxìng)（一）形態(tài)染色(rǎnsè)

G+球菌，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。無(wú)莢膜、芽胞，部分菌株有鞭毛。第六十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件營(yíng)養(yǎng)要求較高。能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（PH9.6）、高膽汁（40%）、10~45℃生長(zhǎng)。

菌落(jūnluò)：圓形、中等大小、灰白色、不透明、S型，有γ或α溶血。（二）培養(yǎng)(péiyǎng)特性第六十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件能分解多種糖類(lèi)(tánɡlèi)

觸酶（-）PYR（吡咯烷酮-β-萘基酰胺）試驗(yàn)（+）（三）生化(shēnɡhuà)反應(yīng)第六十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件目前分18種。引起醫(yī)院內(nèi)感染常見(jiàn)的是糞腸球菌和屎腸球菌。常用的分型方法(fāngfǎ)：rRNA基因探針?lè)中头?。（四）分型（五）抵抗?/p>

對(duì)理化(lǐhuà)因素抵抗力弱。但對(duì)大多數(shù)抗生素天然耐藥。第六十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、微生物學(xué)(wēishēnɡwùxué)檢驗(yàn)（一）標(biāo)本(biāoběn)采集

尿液、血液、腦脊液、膿汁分泌物等。第六十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序尿液、膿汁、穿刺(chuāncì)液血液涂片染色分離(fēnlí)培養(yǎng)（血平板、5%CO2）初報(bào)挑選可疑菌落增菌培養(yǎng)（葡萄糖肉湯、5%CO2）PYR試驗(yàn)?zāi)懼呷~苷試驗(yàn)6.5%NaCl生長(zhǎng)試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)其他鑒定試驗(yàn)報(bào)告第七十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（三）檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法1、直接鏡檢適用于：痰、膿、腦脊液、穿刺液標(biāo)本。2、分離培養(yǎng)

血平板(píngbǎn)：灰白色，圓形，中等大小，不透明，S型菌落，周?chē)笑寥苎颚萌苎?。選擇培養(yǎng)基：疊氮膽汁七葉苷瓊脂平板。第七十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3、鑒定試驗(yàn)（1）菌屬鑒定試驗(yàn)：①PYR試驗(yàn)：腸球菌、A群鏈球菌、某些凝固(nínggù)酶陰性葡萄球菌為（+）②膽汁七葉苷試驗(yàn)：+③鹽耐受試驗(yàn)：+（4）種間鑒定試驗(yàn)：P175表17-3第七十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件第四節(jié)奈瑟菌屬

(Neisseria)

特點(diǎn)：為一群(yīqún)G-雙球菌，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，有菌毛，需氧，氧化酶及觸酶+。

種類(lèi)：共九種，主要致病菌是

腦膜炎奈瑟菌(merningococcus)

淋病奈瑟菌(gonorrhoeae)第七十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件一、腦膜炎奈瑟菌

(N.meningitidis)即腦膜炎球菌(qiújūn)，是流行性腦脊髓膜炎的病原體第七十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（一）生物學(xué)性狀(xìngzhuàng)1．形態(tài)結(jié)構(gòu)2．培養(yǎng)特性3．生化反應(yīng)(fǎnyìng)

4.抗原結(jié)構(gòu)5.抵抗力特點(diǎn)

第七十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

（一）形態(tài)(xíngtài)結(jié)構(gòu)G-，腎形成雙排列在患者腦脊液標(biāo)本中位于(wèiyú)中性粒細(xì)胞內(nèi)無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛，具有莢膜、菌毛。

第七十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件2．培養(yǎng)(péiyǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高，必須在含有血清或多種氨基酸、無(wú)機(jī)鹽的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)(shēngzhǎng)良好。血平板：半透明，灰褐色，圓形，濕潤(rùn)光滑露滴樣菌落。易自溶。第七十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件巧克力平板：圓形，扁平，藍(lán)灰色，半透明，光滑濕潤(rùn)的菌落。卵黃雙抗（EPV）平板：較大，無(wú)色，光滑濕潤(rùn)，扁平，邊緣整齊的菌落。血清(xuèqīng)肉湯：呈微混濁。第七十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3.生化(shēnɡhuà)反應(yīng)分解葡萄糖、麥芽糖：+硝酸鹽還原試驗(yàn)(shìyàn)陰性，不分解尿素氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性第七十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件4.抗原(kàngyuán)結(jié)構(gòu)可分9個(gè)血清(xuèqīng)群，對(duì)人致病的主要是A群5．抵抗力特點(diǎn)(tèdiǎn)

對(duì)寒冷、光、熱力，干燥等十分敏感。室溫3h，60℃5min死亡。采集標(biāo)本：注意保溫迅速送檢。對(duì)磺胺類(lèi)、青霉素、鏈霉素均敏感。

第八十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（二）致病性與免疫性1．致病物質(zhì)：菌毛、莢膜、內(nèi)毒素

2．所致疾?。簜魅驹?、傳播途徑寄生在正常人鼻咽部，存在易患人群(rénqún)，與患者補(bǔ)體介導(dǎo)的殺菌活性缺陷有關(guān)。約2%-3%的人表現(xiàn)為流腦癥狀。

3.免疫性病原(bìngyuán)可產(chǎn)生群特異性抗體，但不持久。第八十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件(三)微生物學(xué)(wēishēnɡwùxué)檢驗(yàn)1．標(biāo)本采集

菌血癥期病人采集血液有出血點(diǎn)或瘀斑者，可取瘀斑滲出液有腦膜刺激癥狀(zhèngzhuàng)，抽取腦脊液帶菌者：咽拭子第八十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件注意事項(xiàng)：立即送檢注意(zhùyì)保溫（勿放冰箱）防干燥防紫外線第八十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件２、腦膜炎球菌的檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序血液增菌培養(yǎng)(péiyǎng)（葡糖肉湯）分離培養(yǎng)(péiyǎng)

（巧克力、血平板）鑒定試驗(yàn)涂染檢氧化酶葡、麥糖多價(jià)血清藥敏試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告鼻咽拭子卵黃雙抗平板5~10%co237℃18~24h37℃18~24h37℃18~24h腦脊液瘀血點(diǎn)離心上沉清淀液物5~10%ＣＯ2涂片染色初步報(bào)告直接凝集第八十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件腦膜炎球菌的鑒定(jiàndìng)依據(jù)菌落特征符合形態(tài)染色符合分解葡、麥糖產(chǎn)酸氧化酶、觸酶陽(yáng)性(yángxìng)

血清凝集試驗(yàn)陽(yáng)性第八十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件二、淋病(lìnbìng)奈瑟菌（N.gonorrhoeae）

即淋球菌為淋病(lìnbìng)的病原體，人是唯一天然宿主和傳染源第八十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（一）生物學(xué)性狀(xìngzhuàng)1．形態(tài)結(jié)構(gòu)2．培養(yǎng)特性(tèxìng)

3.生化反應(yīng)4．抵抗力特點(diǎn)

第八十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件1．形態(tài)(xíngtài)結(jié)構(gòu)G-，球形或腎形，成對(duì)排列(páiliè)

有莢膜，無(wú)芽胞和鞭毛第八十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件2．培養(yǎng)(péiyǎng)特性營(yíng)養(yǎng)要求高，30-37℃生長(zhǎng)，須在含有血液或血清的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，常用血液、巧克力等培養(yǎng)基初次分離，須5-10%CO2才能生長(zhǎng)發(fā)育菌落(jūnluò)：凸起，光滑、圓形，灰褐色，半透明第八十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件3.生化(shēnɡhuà)反應(yīng)

氧化酶試驗(yàn)(shìyàn)：（+）觸酶：（+）葡萄糖（+），麥芽糖（-）易自溶第九十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件4．抵抗力特點(diǎn)(tèdiǎn)

抵抗力弱，在干燥環(huán)境中僅能存活1-2h，濕熱(shīrè)55℃5min,100℃立即死亡。室溫下存活1-2d。對(duì)消毒劑極敏感

第九十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件１、致病物質(zhì)：菌毛、外膜蛋白、等２、所致(suǒzhì)疾?。呵址溉祟?lèi)泌尿生殖系統(tǒng)引起淋病(首位性病)

新生兒眼炎（二）致病性與免疫性

第九十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件1．標(biāo)本(biāoběn)采集標(biāo)本：男性：尿道分泌物女性：陰道分泌物全身性淋?。貉?xuèyè)、泌尿、生殖道的各種分泌物、尿液立即送檢

２．檢驗(yàn)(jiǎnyàn)程序(三)微生物學(xué)檢驗(yàn)第九十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件膿汁、分泌物直接(zhíjiē)涂片染色分離培養(yǎng)血、巧克力、TM平板(píngbǎn)5－10%co235℃18－24h鑒定(jiàndìng)試驗(yàn)涂染檢氧化酶糖發(fā)酵藥敏試驗(yàn)報(bào)告初步報(bào)告35℃18－24h第九十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（１）直接(zhíjiē)涂片鏡檢急性淋?。菏戎行粤＜?xì)胞內(nèi)大量G-，腎形雙球菌——具有(jùyǒu)診斷意義慢性淋?。虹R檢較困難３．檢驗(yàn)(jiǎnyàn)方法第九十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件（２）分離(fēnlí)培養(yǎng)即采集(cǎijí)即培養(yǎng)，常用含有兩種以上抗生素（萬(wàn)古霉素、粘菌素、磺胺類(lèi)等）的選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)（如ML、TM）5-10%CO2培養(yǎng)基先預(yù)溫。第九十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件氧化酶試驗(yàn)：（+）觸酶：（+）（多數(shù)奈瑟菌為陰性）

葡萄糖（+），麥芽糖（-）PCR：靈敏，特異(tèyì)，標(biāo)本不受限制(不需活菌)

（３）鑒定(jiàndìng)第九十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件

1.名詞解釋?zhuān)貉獫{凝固酶、SPA、抗鏈“o”試驗(yàn)、Optochin試驗(yàn)。

2.根據(jù)色素和生化反應(yīng)將葡萄球菌分成哪幾種？3.金黃色葡萄球菌的鑒定依據(jù)有哪些？4.根據(jù)鏈球菌在血平板上的溶血現(xiàn)象，將其分成哪些類(lèi)型？甲鏈和乙鏈有何區(qū)別？5.簡(jiǎn)述鏈球菌的檢驗(yàn)程序和檢驗(yàn)方法。6.腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌有哪些異同點(diǎn)？7.采集腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌的標(biāo)本(biāoběn)進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)應(yīng)該注意哪些問(wèn)題？為什么？

復(fù)習(xí)(fùxí)思考題第九十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件中等(zhōngděng)大，突起，有色素，S型菌落。葡萄球菌菌落形態(tài)（普通瓊脂(qióngzhī)平板）第九十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)表皮(biǎopí)葡萄球菌第一百頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件金黃色葡萄球菌(pútáoqiújūn)有透明溶血環(huán)。表皮葡萄球菌(pútáoqiújūn)無(wú)溶血環(huán)。第一百零一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件葡萄球菌A蛋白（SPA）的意義：（1）降低(jiàngdī)抗體的調(diào)理作用，抗吞噬（2）協(xié)同凝集試驗(yàn):輔助診斷疾病。第一百零二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件血漿(xuèjiāng)凝固酶試驗(yàn)［原理］致病性葡萄球菌能產(chǎn)生２種血漿凝固酶：

一種為結(jié)合(jiéhé)型凝固酶（凝聚因子）：細(xì)菌表面的纖維蛋白原受體與血漿中的纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致細(xì)菌凝集。另一種為游離型凝固酶，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子激活，成為凝血酶樣物質(zhì)，使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，從而使血漿凝固。

［檢測(cè)方法］結(jié)合(jiéhé)型凝固酶：玻片法游離型凝固酶：試管法第一百零三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件耐熱(nairè)核酸酶試驗(yàn)液體(yètǐ)培養(yǎng)物煮沸15min

37℃3h甲苯胺藍(lán)核酸(hésuān)瓊脂第一百零四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件腸毒素測(cè)定(cèdìng)病人嘔吐物、糞便(fènbiàn)、剩余食物高鹽肉湯37℃24h分離(fēnlí)培養(yǎng)肉湯煮沸30min，離心，取上清夜幼貓觀察癥狀（4h出現(xiàn)）第一百零五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件SPA的檢測(cè)(jiǎncè)致病性葡萄球菌(pútáoqiújūn)（SPA)兔抗羊紅細(xì)胞Ab（IgGFc）SRBC致敏羊紅細(xì)胞第一百零六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。編輯課件凝固(nínggù)酶陽(yáng)性葡萄球菌的鑒別

結(jié)合型游離型耐熱(nairè)核酸VP鳥(niǎo)氨酸脫血漿凝固酶血漿凝固酶酶試驗(yàn)試驗(yàn)羧