含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)

本文介紹了在對(duì)含量及有關(guān)物質(zhì)測定所用的分析方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證時(shí)，各項(xiàng)指標(biāo)的可接受標(biāo)準(zhǔn)，以利于判斷該分析方法的可行性。內(nèi)容包括：準(zhǔn)確度、線性、精密度、專屬性、檢測限、定量限、耐用性和系統(tǒng)適應(yīng)性。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)1.準(zhǔn)確度含量：該指標(biāo)主要是通過回收率來反映。驗(yàn)證時(shí)一般要求分別配制濃度為80％、100％和120％的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)：

驗(yàn)證時(shí)一般要求根據(jù)有關(guān)物質(zhì)的定量限與質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中該雜質(zhì)的限度分別配制三個(gè)濃度的供試品溶液各三份（例如某雜質(zhì)的限度為0.2%，則可分別配制該雜質(zhì)濃度為％、％和％的雜質(zhì)溶液），分別測定其含量，將實(shí)測值與理論值比較，計(jì)算回收率，并計(jì)算9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的RSD。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：各濃度下的平均回收率均應(yīng)在80%-120%之間，如雜質(zhì)的濃度為定量限，則該濃度下的平均回收率可放寬至70%-130%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)確度2.線性含量：

線性一般通過線性回歸方程的形式來表示。具體的驗(yàn)證方法為：在80％至120％的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定其主峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：回歸線的相關(guān)系數(shù)（R）不得小于，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的2％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)線性有關(guān)物質(zhì)：在定量限至一定的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的供試液，分別測定該雜質(zhì)峰的面積，計(jì)算相應(yīng)的含量。以含量為橫坐標(biāo)（X），峰面積為縱坐標(biāo)（Y），進(jìn)行線性回歸分析?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：相關(guān)系數(shù)（R）不得小于，Y軸截距應(yīng)在100％響應(yīng)值的25％以內(nèi)，響應(yīng)因子的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于10%。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)線性3.精密度

含量：

1）重復(fù)性

配制6份相同濃度的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

2）中間精密度

配制6份相同濃度的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)：

1）重復(fù)性

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，由一個(gè)分析人員在盡可能相同的條件下進(jìn)行測試，所得6份供試液含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于15%。

2）中間精密度

配制6份雜質(zhì)濃度（一般為0.1%）相同的供試品溶液，分別由兩個(gè)分析人員使用不同的儀器與試劑進(jìn)行測試，所得12個(gè)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于20%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)精密度4.專屬性含量：

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，主成分與各有關(guān)物質(zhì)應(yīng)能完全分離，分離度不得小于。以二極管陣列檢測器進(jìn)行純度分析時(shí)，主峰的純度因子應(yīng)大于980。有關(guān)物質(zhì)：可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：空白對(duì)照應(yīng)無干擾，該雜質(zhì)峰與其它峰應(yīng)能完全分離，分離度不得小于。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)5.檢測限含量：主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。有關(guān)物質(zhì)：雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于3。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)6.定量限含量：

主峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液主峰的保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。有關(guān)物質(zhì)：雜質(zhì)峰與噪音峰信號(hào)的強(qiáng)度比應(yīng)不得小于10。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，所測6份溶液雜質(zhì)峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于5.0%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)7.耐用性含量：

分別考察流動(dòng)相比例變化±5％、流動(dòng)相pH值變化、柱溫變化±5℃、流速相對(duì)值變化±20％時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：主峰的拖尾因子不得大于，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)：

分別考察流動(dòng)相比例變化±5％、流動(dòng)相pH值變化、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對(duì)值變化±20％以及采用三根不同批號(hào)的色譜柱進(jìn)行測定時(shí)，儀器色譜行為的變化，每個(gè)條件下各測試兩次?？山邮艿臉?biāo)準(zhǔn)為：各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離；各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在％以內(nèi)。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)耐用性8.系統(tǒng)適用性含量：

配制6份相同濃度的供試品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，主峰保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于，主峰與雜質(zhì)峰必須達(dá)到基線分離，主峰的理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)物質(zhì)：

配制6份相同濃度的雜質(zhì)溶液進(jìn)行分析，該雜質(zhì)峰峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于2.0%，保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)不大于1.0%。另外，雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于，理論塔板數(shù)應(yīng)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)適用性9.溶液穩(wěn)定性有關(guān)物質(zhì)：按照分析方法分別配置對(duì)照品溶液與供試品溶液，平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量，然后將上述溶液分別貯存在室溫與冰箱冷藏室（4℃）中，在1、2、3、5和7天時(shí)分別平行測定兩次主成分與雜質(zhì)的含量。

可接受的標(biāo)準(zhǔn)為：主成分的含量變化的絕對(duì)值應(yīng)不大于2.0%，雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在％以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報(bào)告限度的雜質(zhì)。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品溶出度方法研究文章來源：審評(píng)二部唐素芳含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品普通口服固體制劑溶出度方法驗(yàn)證易忽視的幾個(gè)問題文章來源：審評(píng)四部審評(píng)八室

鄭國鋼溶出度研究試驗(yàn)主要包括以下內(nèi)容：（1）溶出介質(zhì)的選擇（2）溶出介質(zhì)體積的選擇（3）溶出方法（轉(zhuǎn)籃法與槳法）的選擇（4）轉(zhuǎn)速的選擇（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證（6）溶出度均一性試驗(yàn)（批內(nèi)）（7）重現(xiàn)性試驗(yàn)（批間）含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)（1）溶出介質(zhì)的選擇

溶出介質(zhì)通常采用水、鹽酸溶液、緩沖液（pH值3～8為主）。對(duì)在上述溶出介質(zhì)中均不能完全溶解的難溶性藥物，可加入適量的表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（0.5%以下）等，應(yīng)有文獻(xiàn)依據(jù)，并盡量選用低濃度，必要時(shí)應(yīng)做生物利用度考察。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)（2）溶出介質(zhì)體積的選擇

溶出介質(zhì)的體積需使藥物符合漏槽條件，大杯法（第一、二法）常用體積為500、900和1000ml，小杯法（第三法）常用體積為100～250ml。部分品種為滿足在溶出量測定時(shí)藥物濃度的需要，可采用低于上述限度范圍的溶劑。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)

漏槽條件即做溶出的最佳條件，是指藥物所處釋放介質(zhì)的濃度遠(yuǎn)小于其飽和濃度，生理學(xué)解釋為藥物在體內(nèi)被迅速吸收，制劑的體外包括釋放度等測定需要模仿體內(nèi)生理?xiàng)l件的，滿足藥物溶解-吸收的過程，漏槽條件起到了修正作用，一般釋放介質(zhì)的體積為藥物飽和溶液所需介質(zhì)體積的3～5倍。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)溶出介質(zhì)體積的選擇（3）轉(zhuǎn)籃法與槳法的選擇

一般情況下，片劑多選擇槳法，轉(zhuǎn)籃法多用于膠囊劑或漂浮的制劑，研究資料應(yīng)進(jìn)行兩種方法的對(duì)比試驗(yàn)，以確定最佳方法。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)（4）轉(zhuǎn)速的選擇

目前，各國藥典中收載的溶出度測定方法中的轉(zhuǎn)速，大部分在50～100轉(zhuǎn)/分。轉(zhuǎn)籃法以100轉(zhuǎn)/分為主；槳法以50轉(zhuǎn)/分為主。一般認(rèn)為槳法50轉(zhuǎn)/分相當(dāng)于轉(zhuǎn)籃法100轉(zhuǎn)/分。轉(zhuǎn)速的設(shè)置與具體品種有關(guān)，通常，藥物制劑的溶出速度隨著轉(zhuǎn)速的增加而增大。轉(zhuǎn)速過快，可能會(huì)導(dǎo)致對(duì)不同制劑溶出行為的區(qū)分能力差，所以不推薦選擇過高轉(zhuǎn)速。轉(zhuǎn)速的選擇應(yīng)以能區(qū)分不同處方和生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品為宜，如確實(shí)需要選擇高轉(zhuǎn)速，應(yīng)進(jìn)行充分的驗(yàn)證。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)（5）溶出度測定方法的驗(yàn)證

方法學(xué)驗(yàn)證內(nèi)容與含量測定基本相同。應(yīng)該注意的是，在方法學(xué)驗(yàn)證中，試驗(yàn)所用的溶媒應(yīng)為溶出介質(zhì)，即應(yīng)考查輔料、膠囊殼在溶出介質(zhì)中的干擾，藥物在溶出介質(zhì)中的線性、回收率及穩(wěn)定性等。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該注意的問題：1.對(duì)于溶出度，范圍規(guī)定為限度的±20％（回收率高、中、低常設(shè)為50％、限度濃度、100％）。

2.測定干擾2%以下可忽略不計(jì)，2～5%可考慮在限度上適當(dāng)提高，超過5%以上測定方法不可取，如是空膠囊產(chǎn)生的應(yīng)進(jìn)行囊殼的消除試驗(yàn)。如空膠囊干擾大于標(biāo)示量的25%，實(shí)驗(yàn)無效，如干擾不大于標(biāo)示量的2%,可忽略不計(jì)。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)溶出度測定方法的驗(yàn)證3.濾膜吸附的驗(yàn)證

一般認(rèn)為吸附量在2%以下時(shí)可忽略不計(jì)，超過2%時(shí)應(yīng)考慮選用其他濾過方法或更換適宜的溶出介質(zhì)。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)溶出度測定方法的驗(yàn)證（6）取樣點(diǎn)和限度的確定

通過溶出度均一性試驗(yàn)（考察同一批樣品的溶出曲線）和重現(xiàn)性試驗(yàn)（考察至少3批樣品的溶出曲線），確定合理的溶出度測定取樣點(diǎn)和限度。為避免多次取樣造成的誤差，測定溶出曲線時(shí)取樣點(diǎn)不宜過多，通常為5～6個(gè)點(diǎn)，小規(guī)格的制劑因采用100～250ml溶出介質(zhì)，所以溶出曲線一般可選3～4個(gè)時(shí)間點(diǎn)。限度應(yīng)綜合考慮溶出曲線拐點(diǎn)和一般性要求。

含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)及個(gè)人觀點(diǎn)：1.在進(jìn)行分析方法的驗(yàn)證時(shí)，首先還是要參考中國藥典和指導(dǎo)原則，文章中提到的試驗(yàn)方法和可接受標(biāo)準(zhǔn)也是專家的一些經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，我們在進(jìn)行研究時(shí)應(yīng)根據(jù)具體的項(xiàng)目分析參考。2.在耐用性試驗(yàn)時(shí)，文中要求每個(gè)條件下各測試兩次，且每次要平行測定6份樣品？含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)3.在進(jìn)行溶出度測定方法的選擇時(shí)，僅考慮不同條件下單點(diǎn)的溶出度是不合適的，應(yīng)結(jié)合溶出曲線的測定結(jié)果來確定。個(gè)人建議：（1）槳法和籃法均考查50、75和100rpm。（2）將溶出曲線測定放在溶出度測定方法驗(yàn)證之前進(jìn)行。含量與有關(guān)物質(zhì)分析方法驗(yàn)證可接受標(biāo)準(zhǔn)總結(jié)及個(gè)人觀點(diǎn)現(xiàn)場考核中的幾個(gè)問題：1.資料中溶液配比80：20應(yīng)改為比號(hào)80:20。2.線性試驗(yàn)中含量或有關(guān)物質(zhì)濃度的溶液應(yīng)設(shè)