復(fù)旦四門課件2014藥分8第八章雜環(huán)類

第八章

雜環(huán)類藥物的分析概

述定義：雜環(huán)類藥物是指：碳環(huán)中夾雜有非碳原子的環(huán)狀有機(jī)化合物，其中的非碳原子成為雜原子，一般為氧、硫、氮等。分類：按其所含的雜原子種類與數(shù)目，環(huán)的元數(shù)與環(huán)數(shù)的不同分為：吡啶類、喹啉類、托烷類、酚噻嗪類和苯并二氮卓類等。而各大類又可根據(jù)環(huán)上取代基的類型、數(shù)目、位置的不同衍生出眾多的同系列藥物。

共性:

(1)雜環(huán)類藥物是合成藥物中所占比例最多的一大類藥物.

(2)多為五元環(huán)或六元環(huán),單環(huán)或并合環(huán).

(3)雜環(huán)結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定,不易開環(huán),其性質(zhì)受雜原子種類、數(shù)目、位置影響.

(4)雜環(huán)上取代基性質(zhì)較活潑,常用于分析.

(5)含氮雜環(huán),其堿性的強(qiáng)弱往往用于分析.第一節(jié)吡啶類藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析1.

結(jié)構(gòu)：本類藥物均有吡啶環(huán)NaabbgCONHNH

2NNCONC2H5C2H5吡啶異煙肼尼可剎米2.性質(zhì)：堿性：吡啶環(huán)上氮原子具有叔胺性質(zhì)，pKb=8.8（水中），可非水滴定；母核能與金屬鹽反應(yīng)生成有色沉淀異煙肼：酰肼基有強(qiáng)還原性,且能與羰基縮合,氧化還原滴定；尼可剎米:酰胺基堿性下可水解,放出NH(C2H5)2↑，用于鑒別或凱氏定N直接蒸餾測(cè)定。二、鑒別：（一）吡啶環(huán)的開環(huán)反應(yīng)適用于a,a’未取代，b,γ烷基或羧基取代的。1.

戊烯二醛反應(yīng)（k?nig反應(yīng)）CONHNHNKMnO

4或Br

22

COONaNCNBr溴溴溴Br

CNCOOHNCHOHCHOCOOHArArNCH

NHCHCOOH2Ar-NH22、與2，4-二硝基氯苯反應(yīng)，加醇制氫氧化鉀紫紅色CONHNH2NNaOHCOONaNO

2NO

2NClNO

2NO

2COONaNCHOHNO

2NO

2COONaNNaOH紫紅色（二）、酰肼基團(tuán)的反應(yīng)CONHNH

2NCOOHN4e+ N

2常用的氧化劑：I2、Br2、KBrO3、AgNO31

還原反應(yīng)：CONHNH2+

AgNO3

+

H2ONNCOOAg+

NH2-NH2+

HNO3NH2-NH2+

4

AgNO34

Ag+

N2+

4HNO3取本品約10mg加水2ml溶解加氨制硝酸銀試液反應(yīng)現(xiàn)象：產(chǎn)生氣泡與黑色渾濁，并在試管壁上形成銀鏡2、縮合反應(yīng)：與芳醛縮合形成腙，

如香草醛、水楊醛、二甲氨基苯甲醛CONHNH

2N+OHCHONCONHNOHOCH

3CH黃色異煙腙λmax=380nm，在105℃干燥后，測(cè)定熔點(diǎn)，228~231℃OCH

3香草醛(四)形成沉淀的反應(yīng)（吡啶環(huán)）（1）與金屬離子反應(yīng)生成有色沉淀異煙肼,尼可剎米+HgCl2

→

白色沉淀↓異煙肼+CuSO4

→

紅棕色↓（Cu2O）尼可剎米+CuSO4+硫氰酸鉀

→

草綠色絮狀沉淀（五）分解產(chǎn)物的反應(yīng)Δfi尼可剎米

+

NaOH

二乙胺

?1.

尼可剎米

ChP（2000）【鑒別】（1）取本品10

滴，加氫氧化鈉試液3

ml

，加熱，即發(fā)生二乙胺的臭氣，能使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試

紙變藍(lán)色。（六）紫外與紅外吸收光譜特征三、雜質(zhì)檢查（一）異煙肼中游離肼的檢查雜質(zhì)來(lái)源

原料引入、降解產(chǎn)生1.

薄層色譜法（TLC）（1）

ChP（2000）

雜質(zhì)對(duì)照品法取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作為供試品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含

0.20mg（相當(dāng)于游離肼50μg的溶液，作為對(duì)照溶液。吸取供試品溶液10μl與對(duì)照溶液2μl分別點(diǎn)于同一硅膠薄層板（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）上，以異丙醇－丙酮（3∶2）為展開劑，展開后，晾干，噴以乙醇制對(duì)二甲氨基苯甲醛試液，15min后檢視，在供試品

主斑點(diǎn)前方與硫酸肼斑點(diǎn)相應(yīng)的位置上，不得顯黃色斑點(diǎn)。·100%

=

0.02%50

·10=50

·10-3

·

2供試品量L

=允許雜質(zhì)存在的最大量·100%（2）

BP（1998）游離肼

雜質(zhì)對(duì)照品法有關(guān)物質(zhì)

高低濃度對(duì)比法2.

比濁法

JP（13）檢查方法

靈敏度法反應(yīng)原理游離肼+水楊醛→水楊醛腙↓優(yōu)點(diǎn)：不用對(duì)照品，價(jià)廉、簡(jiǎn)單易行缺點(diǎn)：準(zhǔn)確度差（二）尼可剎米中有關(guān)物質(zhì)的檢查ChP（2005）TLC

高低濃度對(duì)比法配制兩種不同濃度的對(duì)照溶液第二節(jié)喹啉類藥物共性：含有吡啶與苯環(huán)稠合而成的喹啉雜環(huán)代表藥物：硫酸奎寧、硫酸奎尼丁NH3CO

NHHCH=CH2,H2SO4,2H2OHOHHCH=CH2

,H2SO4,2H2OHHHOH3CONN22硫酸奎寧硫酸奎尼丁NNOOHOFNHH,lCH,O2鹽酸環(huán)丙沙星主要化學(xué)性質(zhì)：1、堿性：喹啉環(huán)上的氮原子具有堿性，可與強(qiáng)酸形成穩(wěn)定的鹽。2、旋光性：硫酸奎寧為左旋體；硫酸奎尼丁為右旋體。3、熒光特性二、鑒別試驗(yàn)（一）綠奎寧反應(yīng)6－羥基喹啉，經(jīng)氯水的氯化反應(yīng)，再以氨水處理，生成綠色的二醌基吲胺的銨鹽。NNNNNOHOH2lClClC2lCHN34HNOOlCNO（二）光譜特征UV

Ch.P采用本法鑒別鹽酸環(huán)丙沙星。熒光光譜特征

硫酸奎寧和硫酸奎尼丁，在稀H2SO4中均顯藍(lán)色熒光，鹽酸環(huán)丙沙星則無(wú)熒光，可用于本類藥物的鑒別。IR

Ch.P中硫酸奎寧和鹽酸環(huán)丙沙星均采用紅外光譜的方法進(jìn)行鑒別，而硫酸奎尼丁未采用此法。（三）無(wú)機(jī)酸鹽硫酸奎寧硫酸奎尼丁酸性條件BaCl2白色沉淀鹽酸環(huán)丙沙星酸性條件AgNO3白色沉淀第三節(jié)托烷類（莨菪烷類）莨菪烷衍生的氨基醇和不同有機(jī)酸縮合成酯硫酸阿托品、氫溴酸東莨菪堿ON

CH3OHOHHOCH3N,H2SO4,H2O2OOHO,HBr,3H2O硫酸阿托品氫溴酸東莨菪堿主要化學(xué)性質(zhì)水解性

本類藥物分子結(jié)構(gòu)中具有酯的結(jié)構(gòu)，易水解。 以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。堿性

阿托品和東莨菪堿的結(jié)構(gòu)中，五元脂環(huán)上含有叔胺氮原子,具有較強(qiáng)的堿性,易與酸成鹽。如阿托品的pKb1為4.35。旋光性

氫溴酸東莨菪堿結(jié)構(gòu)中含有不對(duì)稱碳原子，呈左 旋體，阿托品結(jié)構(gòu)中雖然有不對(duì)稱碳原子，但因外消旋化而為消旋，無(wú)旋光性。（一）托烷生物堿一般鑒別試驗(yàn)鑒別試驗(yàn)生物堿水解

莨菪酸

發(fā)煙硝酸D三硝基衍生物KOH（C2H5OH）固體KOH有色的醌型產(chǎn)物（二）氧化反應(yīng)本類藥物水解后，生成的莨菪酸，可與硫酸和重鉻酸鉀在加熱的條件下，發(fā)生氧化反應(yīng)，生成苯甲醛，而逸出類似苦杏仁的臭味。其反應(yīng)式為：COOHHOCOOHO2H-)4OS2H(2HCOHC2O2+2OC2+O2H(三)沉淀反應(yīng)本類藥物具有堿性，可與生物堿沉淀劑生成沉淀。黃色沉淀

白色沉淀如：阿托品+氯化汞醇試液

東莨菪堿+氯化汞醇試液（四）硫酸鹽與溴化物反應(yīng)硫酸阿托品+氯化鋇硫酸阿托品+醋酸鉛白色沉淀（不溶于鹽酸或硝酸）白色沉淀（溶于醋酸氨或氫氧化鈉溶液）氫溴酸東莨菪堿+硝酸銀黃色凝乳沉淀氨試液中微溶，硝酸中幾

乎不溶。加氯試液，再加氯仿，氯仿層顯黃色或紅棕色第四節(jié)吩噻嗪類藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析共同點(diǎn)：硫氮雜蒽母核；含兩個(gè)雜原子多環(huán)共軛體系，有UV吸收；S具還原性，可被氧化生成砜或亞砜；與金屬離子絡(luò)合，生成有色物，可比色測(cè)定NRR'1234S5678910SHClNCH2CHN(CH3)2CH3鹽酸異丙嗪NSClHClCH2CH2CH2N(CH3)2鹽酸氯丙嗪NSClCH2CH2CH2NN

CH2CH2OHN奮乃靜SCF3CH2CH2CH2

NN

(CH2)2OCO(CH2)8CH3癸氟奮乃靜二、性質(zhì)1.

紫外與紅外吸收光譜

本類藥物的紫外特征吸收，主要由母核三環(huán)的π系統(tǒng)所產(chǎn)生，一般具有三個(gè)峰值。即在

204～209nm（205nm附近）、250～

265nm（254nm附近）和300～325nm（300nm附近）。最強(qiáng)峰多在

250～265nm。2位上的取代基（R′）不同，會(huì)引起吸收峰發(fā)生位移。其結(jié)構(gòu)中的硫，易氧化，氧化產(chǎn)物砜及亞砜有四個(gè)吸收峰。易被氧化呈色硫氮雜蒽母核中的二價(jià)硫易氧化，遇不同氧化劑（硫酸，過(guò)氧化氫），其母核易被氧化成亞砜、砜等不同產(chǎn)物，隨取代基的不同呈現(xiàn)的顏色不同。易與金屬離子絡(luò)合呈色本類藥物分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫，可與金屬鈀離子形成配位化合物?！溲趸a(chǎn)物砜和亞砜無(wú)此反應(yīng)堿性二、鑒別試驗(yàn)（一）UV和IRUV：奮乃靜

ChP（2005）[鑒別]取本品，加無(wú)水乙醇制成每1ml

中含7mg

的溶液，照分光光度法（附錄ⅣA）測(cè)定，在

258nm

的波長(zhǎng)處有最大吸收，吸收度約為0.65。IR：本品的紅外吸收?qǐng)D譜應(yīng)與對(duì)照的圖譜一致（二）顯色反應(yīng)1.

與氧化劑的顯色反應(yīng)藥物名稱

硫

酸

硝

酸過(guò)氧化氫鹽酸氯丙嗪鹽酸異丙嗪顯紅色,

漸變淡黃色

—顯櫻桃紅色,放置 生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深 溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜—

—顯深紅色;放置后紅色漸褪去——鹽酸氟奮乃靜 顯淡紅色,

溫?zé)岷笞兂杉t褐色鹽酸三氟拉嗪

—

生成微帶紅色的白色沉淀;

放

—置后,紅色變深,加熱后變黃色鹽酸硫利達(dá)嗪 顯藍(lán)色—

—2.

與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng)利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。SNNNOHC[8]2O3HCFC3+lCdP23FC3HCOHC[8]2ONNNS3HCOHC[8]2ONNSN3FC+2dP+lC2-2（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng)癸氟奮乃靜

ChP（2005）含氟藥物[鑒別]（1）取本品15～20mg，加碳酸鈉與碳酸鉀各約0.1g，混勻，在600℃熾灼15～20分鐘，放冷，加水2ml使溶解，加鹽酸溶液（1→2）酸化，濾過(guò)，濾液加茜素鋯試液0.5ml，應(yīng)顯黃色。溶液由紅色變?yōu)辄S色癸氟奮乃靜6酸性茜素鋯fi

[ZrF

]2-

+

茜素Na2CO3

+K

2CO3，600℃fi

F-三、有關(guān)物質(zhì)檢查癸氟奮乃靜及其注射液

TLC參比雜質(zhì)對(duì)照品法以鹽酸氟奮乃靜為對(duì)照品其他藥物TLC

高低濃度對(duì)比法第五節(jié)

苯并二氮雜卓類藥物的分析NN12345671,4-苯并二氮雜卓89NNNCH3OCl氯氮卓HNClH3CNO地西泮NNO2NOH硝西泮NNNNClH

3

C阿普唑侖一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)苯并二氮雜卓母核 弱堿性，UV結(jié)構(gòu)中的環(huán)一般比較穩(wěn)定，但在酸性溶液中可水解形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物。不同pH條件下離子狀態(tài)不同，UV不同橙紅色沉淀也生成橙紅色沉淀

放置后，沉淀顏色變深，鑒別試驗(yàn)白色沉淀，藥典中也用于鑒別。(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)1.沉淀反應(yīng)氯氮卓

阿普唑侖鹽酸氟西泮 ＋

KBiI4氯硝西泮因此可以相互區(qū)別。阿普唑侖+遇硅鎢酸氯氮卓

H+、H2Ofi

2

-

氨基

-

5

-

氯-

二苯甲酮（芳伯氨基）3HCHNONNlClClC2HNOO-N=NHOHOO2NaN++H2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)3.硫酸-熒光反應(yīng)本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：黃綠色黃色黃色紫色淡藍(lán)色地西泮氯氮卓艾司唑侖

+

H2SO4

亮綠色

+

稀硫酸

天藍(lán)色硝西泮奧沙西泮藍(lán)綠色淡黃綠色4.含鹵素C

-

X氧瓶燃燒法破壞fi

X-（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜（三）色譜法TLC法酸水解產(chǎn)物的TLC法一、非水溶液滴定法(一)基本原理：在水中堿性較弱，不能順利地進(jìn)行中和滴定。在酸性非水介質(zhì)中（如HAc中），則能顯示出較強(qiáng)的堿性，滴定突躍增大，可以順利地進(jìn)行中和滴定。含量測(cè)定BH+

A-+游離堿類鹽HClO4

BH+

ClO4

+

HA被置換出的弱酸當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量

完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。因此，要根據(jù)不同情況采用相應(yīng)測(cè)定條件。(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果高氯酸滴定液滴定以空白試驗(yàn)校正1.適用范圍主要用于Kb＜10-8的有機(jī)堿鹽的含量測(cè)定。對(duì)堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點(diǎn)指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。一般來(lái)說(shuō)：Kb為10-8～10-10時(shí)，宜選冰醋酸作為溶劑；藥物的

Kb為10-10～10-12時(shí)，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液Kb＜10-12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測(cè)定結(jié)果。(三)問(wèn)題討論2.酸根的影響：無(wú)機(jī)酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點(diǎn)不明顯，結(jié)果偏低。2B·HX

+

Hg(Ac)2

→

2B·HAc

+

HgX2過(guò)量(1～3倍)不影響測(cè)定結(jié)果(四)應(yīng)用實(shí)例1.游離弱堿性藥物測(cè)定異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測(cè)定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測(cè)定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。藥物名稱取樣量(g)

溶

劑指示劑 終點(diǎn)顏色尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)色2.氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定當(dāng)這些藥物溶于冰醋酸時(shí)，由于氫鹵酸在冰醋酸中酸性較強(qiáng)，對(duì)測(cè)定有干擾，必須先加入過(guò)量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難以電離的鹵化汞，而氫鹵酸鹽藥物，則轉(zhuǎn)變成可測(cè)定的醋酸鹽。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可獲得滿意的結(jié)果。應(yīng)用示例如下：藥物名稱 取樣量(g)

溶

劑 加入醋酸汞試液(ml) 指示劑 終點(diǎn)顏色鹽酸氯丙嗪

0.2 醋酐10ml

5 橙黃Ⅳ 玫瑰紅色鹽酸異丙嗪0.3冰醋酸10ml4結(jié)晶紫藍(lán)色鹽酸氟奮乃靜0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫藍(lán)綠色鹽酸環(huán)丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黃Ⅳ粉紅色氫溴酸東莨菪堿

0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫 純藍(lán)色3.硫酸鹽類藥物測(cè)定硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)解離，生成SO4

，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4，2-即只供給一個(gè)H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。（1）硫酸阿托品測(cè)定：阿托品為堿性較強(qiáng)的一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以簡(jiǎn)寫為(BH+)2·SO42-，用高氯酸直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：(BH+)2·SO4

+

HClO4

→

(BH

)·ClO4

+

(BH

)·HSO42-

+

-

+

-可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計(jì)算其含量。（2）硫酸奎寧測(cè)定：奎寧為二元堿，其中喹核堿的堿性較強(qiáng)，可與硫酸生成鹽；而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽，而保持游離狀態(tài)。當(dāng)用高氯酸直接滴定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸。其反應(yīng)式如下：(C20H24N2·

H+)2SO4

+

3HClO4

→4(C20H24N2·

2H+)·2ClO

-+

(C20H24N2·

2H+)·HSO

-·ClO

-4

4Ch.P和USP(24)都采用此法測(cè)定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。NCH(OH)3CH

OCH

CH2NCH(OH)3CH

OCH

CH2N+

HN+

HSO42-.CH(OH)N3CH

OCH

CH2HNH+.ClO4.HSO4+--CH(OH)CH3OCH

CH2NH+H.ClO4+--.N

ClO4滴定反應(yīng)如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹寧時(shí)，摩爾比是1∶3硫酸奎寧片的測(cè)定首先經(jīng)過(guò)堿化處理，生成奎寧的游離堿，再用高氯酸直接滴定。摩爾比為1：4B2·H2SO4

＋

2NaOH

→

2B +

Na2SO4

+2H2OB

+

2HClO4

≒

B

·

2HClO44.硝酸鹽的測(cè)定硝酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性不強(qiáng)，滴定反應(yīng)可以進(jìn)行完全。但是硝酸具有氧化性可以破壞指示劑使其變色，使指示劑無(wú)法指示終點(diǎn)。因此采用非水溶液滴定法測(cè)定硝酸鹽時(shí)，一般不用指示劑法而用電位法指示終點(diǎn)。B HA

+

HClO4

fi

B

HClO4

+

HA（弱酸，不干擾滴定）5.磷酸鹽及有機(jī)酸鹽的測(cè)定磷酸、有機(jī)酸為弱酸，不干擾滴定。終點(diǎn)指示方法最常用的指示劑是結(jié)晶紫，少量電位法紫

藍(lán) 藍(lán)綠 黃綠

黃（堿性區(qū)）—————→（酸性區(qū)）終點(diǎn)的顏色應(yīng)用電位法校準(zhǔn)。（一）硝苯地平的測(cè)定基本原理

硝苯地平的測(cè)定原理，可用下列反應(yīng)式表示：終點(diǎn)時(shí):微過(guò)量的Ce4+將指示劑鄰二氮菲亞鐵中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無(wú)色，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。+OS(eC22)4O3HC3HCOC3H3HC2OC2ONHNN3HC2OC2ONOC3H3HC3HCO+

6HClO

4+

2Ce(ClO

4

)3

+

4H

2

SO

4二、鈰量法（二）吩噻嗪類藥物的測(cè)定藥物

Ce(SO4),

-e

紅色

Ce(SO4),

-2e紅色消退自身指示終點(diǎn)或電位法、永停法指示終點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：（1）賦形劑不干擾,復(fù)方制劑中咖啡因、苯丙胺、可待因、巴比妥類藥物等不干擾；反應(yīng)為一價(jià)還原（Ce4+→Ce3+）,對(duì)環(huán)上取代基無(wú)作用；用于原料藥，也可用于制劑分析。（二）溴酸鉀法異煙肼具有較強(qiáng)的還原性，在酸性溶液中可以用溴酸鉀滴定，異煙肼及其片劑均可用此法測(cè)定，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。取本品約0.2g，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋到刻度，搖勻，精密量取25ml，加水

50ml，鹽酸20ml與甲基橙指示劑1滴，用溴酸鉀滴定液（0.01667mol/L）緩緩滴定（溫度保持在18~25℃）至紅色消失。討論：1、甲基橙是不可逆氧化還原指示劑，為防止溶液中局部過(guò)濃的溴酸鉀破壞指示劑提前到達(dá)終點(diǎn)，應(yīng)在

18~25℃溫度下，于充分?jǐn)嚢璧臈l件下緩緩滴定。2、加水量的多少對(duì)指示劑的褪色影響較大。當(dāng)鹽酸用量20ml，加水25ml，顏色5分鐘未褪，加水30ml，褪色時(shí)間45秒，當(dāng)加水70ml以上，褪色時(shí)間在2秒以內(nèi)。三、比色法（一）酸性染料比色法原理:在適當(dāng)pH溶液中,有機(jī)堿（B）可以與氫離子成鹽,酸性染料（HIn）可解離成陰離子,陰離子可與有機(jī)堿鹽陽(yáng)離子定量地結(jié)合成有色離子對(duì)，而進(jìn)入到有機(jī)相。通過(guò)測(cè)定有機(jī)溶劑提取液的吸收度;或?qū)⒂袡C(jī)溶劑提取液酸化或堿化，使與有機(jī)堿結(jié)合的酸性染料釋放出來(lái)，測(cè)定染料的吸收度來(lái)測(cè)得有機(jī)堿的含量。有機(jī)相·(BH+

In-)水相·(BH+

In-)HIn

H+

+

In-B

+H+

BH+主要條件1、最主要條件是水相的pH要求：能使有機(jī)堿全部以鹽的形式存在，酸性染料能夠解離成離子，以便它們定量地結(jié)合成離子對(duì)而轉(zhuǎn)溶于有機(jī)相，且又能將剩余的染料完全保留在水相。B

+

H+B

H+H I

nH++ I

n—H+—O

HO

H—H+★pHfl（酸性）fi

BH+?，In－flfiBH+In-fl，有機(jī)溶劑提取的是HIn★pH?（堿性）fi

In-?，BH+flfiBH+In-fl，有機(jī)溶劑提取的是B2、酸性染料的選擇要求：常用酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠等。酸性染料濃度，對(duì)測(cè)定影響不大，有足夠量即可。（1）能與有機(jī)堿定量的結(jié)合（2）生成的絡(luò)合物（離子對(duì)）在有機(jī)相中溶解度大（3）染料自身在有機(jī)溶劑中不溶或很少溶解（4）在最大波長(zhǎng)處有較高的吸收度。有機(jī)溶劑的選擇有機(jī)堿藥物應(yīng)對(duì)離子對(duì)提取率高，不與水混溶，或能與離子對(duì)形成氫鍵的有機(jī)溶劑。常用的有機(jī)溶劑有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、四氯化碳等。水分的影響：嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中，水相中有色酸性染料，而影響測(cè)定結(jié)果；水分的混入使氯仿混濁，而影響比色測(cè)定。一般加入脫水劑，或?yàn)V紙過(guò)濾的方法，除去混入的水分。（二）鈀離子比色法：原理：吩噻嗪類藥物可與一些金屬離子（如Pd2+）在適當(dāng)pH值的溶液中形成有色的絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測(cè)定。SPd

2+

2Cl

-SSNR2PdClpH2R'在lmaxpH2–0.1fi

紅色絡(luò)合物lmax

～500nm處測(cè)定A，對(duì)照法定量吩噻嗪類藥物+Pd2+反應(yīng)在pH2±0.1

的緩沖液中進(jìn)行優(yōu)點(diǎn)：鈀離子比色法可選擇性地用于未被氧化的吩噻嗪類藥物的測(cè)定。（一）直接分光光度法供試品不需提取分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測(cè)定。1.奧沙西泮原料的測(cè)定

在229nm，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法測(cè)定。2.鹽酸異丙嗪片的測(cè)定

在249nm，采用E1cm1%＝910測(cè)定。3.鹽酸異丙嗪注射液的測(cè)定測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長(zhǎng)249nm處有吸收，干擾測(cè)定。因此選用299nm波長(zhǎng)測(cè)定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，維生素C在此波長(zhǎng)處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法（二）萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪鹽酸氯丙嗪為915

計(jì)算。以E1%1cm乙醚提取fi

乙醚層

鹽酸萃取fi氨水堿化fi

氯丙嗪lmax

254

–1nm測(cè)定A，（三）萃取—雙波長(zhǎng)分光光度法原理在待測(cè)組分（a）的最大吸收波長(zhǎng)（測(cè)定波長(zhǎng)，l1）處測(cè)定待測(cè)組分和干擾組分（b）吸收度的總和；另選一適當(dāng)波長(zhǎng)（參比波長(zhǎng)，l2）測(cè)定吸收度，并使干擾組分在測(cè)定波長(zhǎng)和參比波長(zhǎng)處的吸收度相等，而待測(cè)組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度的差值足夠大。必要條件①干擾組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相等②待測(cè)組分在兩個(gè)波長(zhǎng)處吸收度相差足夠大定量依據(jù) 樣品在二波長(zhǎng)下吸收度差值（DA）：aAb=

AbDA

=

Aa

+b

-

Aa

+bl2l1=

Aa

-

Aal1

l2=

(

Aa

+

Ab

)

-(

Aa

+

Ab

)l1

l1

l2

l2l1

l2=

(el

-el

)C

l1

2DA

Ca即，吸收度差值（DA）僅與待測(cè)組分的濃度有關(guān)，而與干擾組分無(wú)關(guān)，干擾組分的干擾被消除。（四）二階導(dǎo)數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液抗氧劑維生素C的二階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測(cè)定因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰

66nm～谷254nm距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量五、氣相色譜法一、托烷類藥物制劑的含量測(cè)定二、血漿中二氫吡啶類藥物的測(cè)定六．高效液相色譜法：1．特點(diǎn)：80~90%反相色譜分離，最常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）。硅膠表面僅有25~50%硅醇基可與硅烷化試劑作用，在分離極性化合物特別是堿性藥物和生物堿時(shí)，裸露的硅醇基和堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換作用，而使色譜峰拖尾，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，