放射免疫分析法原理及操作注意事項(xiàng)

放射免疫分析法原理及操作注意事項(xiàng)

【關(guān)鍵詞】帶狀皰疹；虹膜炎；放射免疫分析

［關(guān)鍵詞］帶狀皰疹；虹膜炎；放射免疫分析

放射免疫分析的原理［1］：就是利用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體，然后與被測(cè)的抗體或抗原結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物的原理來(lái)進(jìn)行分析的。它又分為兩種方法。

1競(jìng)爭(zhēng)性RIA，又稱傳統(tǒng)RIA

主要特點(diǎn)：標(biāo)記的是抗原。其原理：未知抗原Ag+標(biāo)記抗原Ag*+已知定量抗體Ab標(biāo)記抗原與抗體復(fù)合物Ag*Ab+未知抗原與抗體復(fù)合物AgAb+游離標(biāo)記抗原Ag*(去除)(未知抗原多，標(biāo)記抗原與定量抗體結(jié)合的復(fù)合物就少，表現(xiàn)為負(fù)相關(guān))。臨床上甲胎蛋白，β2微球蛋白，人絨毛膜促性腺激素β亞單位(HCGβ)等的檢測(cè)都是競(jìng)爭(zhēng)性RIA法原理。競(jìng)爭(zhēng)性RIA法，根據(jù)加樣順序與溫育次數(shù)的區(qū)別，反應(yīng)方式分三種：平衡法，將非標(biāo)記抗原(被測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)品)、抗體、標(biāo)記抗原依次加入反應(yīng)管，混勻后一次性溫育至反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡，再加分離劑分離B(復(fù)合物)與F(游離物)如：AFP，β2MG，F(xiàn)er；順序加樣法，先將非標(biāo)記抗原(被測(cè)物與標(biāo)準(zhǔn)品)，與抗體在反應(yīng)管內(nèi)作第一次溫育，待反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡后。加入標(biāo)記抗原，再作第二次溫育后，分離B與F如：CEA；急診檢測(cè)法：為臨床急需檢測(cè)結(jié)果而提出的反應(yīng)方式，不等RIA反應(yīng)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡就終止反應(yīng)；分離劑的選擇有，PEG(聚乙二醇)，第二抗體等?，F(xiàn)在一般采用的是：第二抗體與PEG合用的方法，稱為雙抗體PEG法。PEG原理：PEG濃度達(dá)到7%9%時(shí)能使抗原抗體復(fù)合物沉淀。優(yōu)點(diǎn)：經(jīng)濟(jì)，簡(jiǎn)便，通用。缺點(diǎn)：重復(fù)性差，非特異性結(jié)合率高。第二抗體：第一抗體是可與被測(cè)抗原進(jìn)行特異結(jié)合的抗體，來(lái)自家兔或豚鼠。用第一抗體為抗原，作用到羊，馬身上，產(chǎn)生的抗第一抗體的抗體稱第二抗體。第二抗體與第一抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合，生成分子量很大的免疫復(fù)合物(AgAb1×Ab2)，能自然沉淀。優(yōu)點(diǎn)：分離效果好。非特異性結(jié)合率低。缺點(diǎn)：增加經(jīng)費(fèi)投入。需要第二次溫育，延長(zhǎng)了時(shí)間。所以就產(chǎn)生了兩者合用的雙抗體PEG法,它結(jié)合了上述兩種方法的優(yōu)