毛雞骨草體外對HBsAg和HBeAg的抑制作用

毛雞骨草體外對HBsAg和HBeAg的抑制作用【摘要】目的觀察毛雞骨草在體外對HBsAg和HBeAg的抑制作用。方法將毛雞骨草醇提取液與等容量、滴度為1∶64的HBsAg和HBeAg陽性血清混合,使混合后毛雞骨草的濃度分別為96，48，24，12和6g/L，用磷酸緩沖液與1∶64的HBsAg和HBeAg陽性血清混合作空白對照。每組6管，37℃水浴8h和16h后，采用ELISA法測定HBsAg和HBeAg的OD值，觀察其對HBsAg或HBeAg的抑制作用。結(jié)果毛雞骨草醇提取液對血清中HBsAg和HBeAg均具有抑制作用，可使HBsAg和HBeAg的濃度降低，呈現(xiàn)一個明顯的量效和時效反應(yīng)關(guān)系。其中毛雞骨草在作用16h，濃度為96，48g/L時對HBsAg，HBeAg抑制作用最為明顯。結(jié)論毛雞骨草在體外有較明顯的抗HBsAg和HBeAg作用。

【關(guān)鍵詞】毛雞骨草乙型肝炎表面抗原乙型肝炎E抗原抑制

雞骨草AbruscantoniensisHance和毛雞骨草AbrusmollisHance為豆科相思子屬植物,是常用的中藥材，亦是我國出口中草藥品種之一［1］。具有清熱解毒、利濕、活血化瘀、舒肝止痛等功效，臨床上多以復(fù)方入藥,可用于黃疸、脅肋不舒、胃脘脹痛、急慢性肝炎、乳腺炎等癥，特別是在肝膽疾病治療方面應(yīng)用廣泛，并取得較好的效果。中國的廣東、廣西等地有豐富的雞骨草資源，廣西玉林制藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)的保肝護(hù)膽良藥“雞骨草膠囊”就是以毛雞骨草為主要原料。為了更好地開發(fā)、利用廣西這一豐富的中草藥資源，進(jìn)一步明確毛雞骨草抗肝炎病毒的作用，為臨床治療病毒性肝炎提供更確切的理論依據(jù)，本文采用體外研究方法，以乙肝病人血清為研究對象，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)技術(shù)，觀察毛雞骨草在體外對HBsAg和HBeAg的抑制作用。

1材料與儀器1藥物與試劑毛雞骨草由廣西玉林制藥有限責(zé)任公司提供；HBsAg檢測試劑盒，批號：200706003；HBeAg檢測試劑盒，批號：200708008。HBsAg檢測試劑盒和HBeAg檢測試劑盒均為北京科衛(wèi)臨床診斷試劑生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒E抗原陽性血清6份，由廣西玉林市紅十字會醫(yī)院檢驗科提供。2儀器與設(shè)備RT—2100C型酶標(biāo)儀；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；FW100型高速萬能粉碎機(jī)(天津市泰斯特儀器有限公司)。

2方法

毛雞骨草醇提取液的制備將30g毛雞骨草粉末放于索氏提取器中，加300ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為的乙醇在90℃水浴中回流提取3h，取出提取液，再次用300ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為的乙醇在90℃水浴中回流提取3h，合并提取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將提取液濃縮至10ml，使樣品液濃度為3g/ml。

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附實驗)法定量檢測HBsAg和HBeAg參考文獻(xiàn)［2，3］。取乙型肝炎病人血清6份，用磷酸緩沖液按1∶2將血清作倍比稀釋，ELISA方法測定原血清及不同稀釋度血清樣品的HBsAg和HBeAg含量(吸光度：OD)，被測血清樣品OD值≥陰性血清對照OD值的倍時為陽性血清。選擇HBsAg和HBeAg滴度為1∶64的陽性血清各6份。將毛雞骨草醇提取液的pH值調(diào)至，用PBS將毛雞骨草醇提取液稀釋為不同濃度的藥液，將不同濃度的藥液分別與等容量、滴度為1∶64的陽性血清混合,使混合后的血清中毛雞骨草的濃度分別為96，48，24，12和6g/L，從而分為A組、B組、C組、D組、E組，用PBS與1∶64血清混合作空白對照組，每組6管，即時放置37℃水浴中，用ELISA法測定各血清樣品在8、16h的OD值。每份血清各測1次。

采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測，結(jié)果以抑制率表示。藥物對抗原的抑制率=［1-給藥組抗原OD值對照組抗原OD值］×100％

統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗，結(jié)果以±s表示。

3結(jié)果

毛雞骨草在體外對HBsAg的抑制作用采用ELISA法，檢測毛雞骨草醇提取液在作用HBsAg滴度為1：64的肝炎血清8，16h后血清中HBsAg的含量。與空白對照組相比較，毛雞骨草醇提取液與肝炎血清作用8，16h后，毛雞骨草濃度為6，12，24，48，96g/L時均對乙型肝炎血清中HBsAg均具有抑制作用，可使乙型肝炎血清中HBsAg的濃度降低，且隨著藥物濃度和作用時間的增加，其抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)一個明顯的量效和時效反應(yīng)關(guān)系。其中毛雞骨草在作用16h后、濃度為96、48g/L對HBsAg具有較明顯的抑制作用，抑制率分別為%，%。結(jié)果見表1。

表1毛雞骨草在體外對HBsAg的抑制作用

與空白血清組比較,*；n=6

毛雞骨草在體外對HBeAg的抑制作用采用ELISA法，檢測毛雞骨草醇提取液在作用HBeAg滴度為1∶64的肝炎血清8,16h后血清中HBeAg的含量。與空白對照組相比較，毛雞骨草醇提取液與肝炎血清作用8,16h后，毛雞骨草在質(zhì)量濃度為6，12，24，48，96g/L時均對乙型肝炎血清中HBeAg具有抑制作用，可使乙型肝炎血清中HBeAg的濃度降低，且隨著藥物濃度和作用時間的增加，其抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)一個明顯的量效和時效反應(yīng)關(guān)系。其中毛雞骨草在作用16h，濃度為96，48g/L對HBeAg具有較明顯的抑制作用，抑制率分別為%，%。結(jié)果見表2。

表2毛雞骨草在體外對HBeAg的抑制作用

與空白血清組比較,*；n=6

4討論

乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞯囊环N傳染性疾病。血清中HBsAg陽性是HBV感染的標(biāo)志。HBeAg為HBV復(fù)制的重要指標(biāo)，存在于乙肝表面抗原陽性血液中，HBeAg陽性反映病毒復(fù)制活躍、傳染性強(qiáng)。目前，國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界治療乙型病毒性肝炎的抗病毒藥物主要有α干擾素和核苷類藥物兩大類，但其療效均不夠理想。尋找具有確切有效抗乙肝病毒藥物已成為國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點。我國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)博大精深，中醫(yī)中藥在治療病毒性肝炎方面積累了豐富的經(jīng)驗并取得了一定的效果。不少中藥、中藥提取物及中藥單體對乙肝病毒均有顯著的抑制效果。毛雞骨草就是目前研究比較多的一類。毛雞骨草目前已經(jīng)在臨床上廣泛使用，尤其在慢性病毒性肝病的應(yīng)用中十分普遍，多以復(fù)方入藥。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為毛雞骨草具有清熱解毒、利濕、活血化瘀、舒肝止痛等功效，現(xiàn)代藥理研究表明雞骨草有護(hù)肝、利膽、抗菌、抗炎、增強(qiáng)免疫作用。本研究以乙肝病人的血清為研究對象，觀察了毛雞骨草醇提取液在體外不同濃度和不同時間對HBsAg和HBeAg的抑制作用，結(jié)果表明，毛雞骨草醇提取液對肝炎血清中HBsAg和HBeAg均具有抑制作用，可使肝炎血清中HBsAg和HBeAg的濃度降低，且隨著藥物濃度和作用時間的增加，其抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈現(xiàn)一個明顯的量效和時效反應(yīng)關(guān)系。其中毛雞骨草在作用16h、質(zhì)量濃度為96，48g/L對HBsAg、HBeAg抑制作用最為明顯。

藥物抗病毒作用的研究方法有多種，本實驗直接采用乙肝病人陽性血清為研究對象，與臨床實際比較貼近。雖然體外實驗與體內(nèi)實驗的結(jié)果有一定的差異，體外實驗不能完全反映藥物體內(nèi)的真實效果，但此實驗，在一定程度上可以說明毛雞骨草對乙型肝炎病毒有直接的抑制作用。

本實驗只是從某個角度證明毛雞骨草抗肝炎病毒的作用，毛雞骨草對乙肝病毒的作用還有待于采取不同研究方法、多角度進(jìn)一步明確。

【參考文獻(xiàn)】

［1］白隆華,董青松,蒲瑞翎.中藥雞骨草研究概況［J］.廣西農(nóng)業(yè)科學(xué)