微生物的實驗室培養(yǎng)原創(chuàng)

關(guān)于微生物的實驗室培養(yǎng)原創(chuàng)第1頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結(jié)構(gòu)真核細胞細菌、藍藻原核細胞第2頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三課題1微生物的實驗室培養(yǎng)第3頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一.培養(yǎng)基：1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)異養(yǎng)⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源對

不同需要，配置供生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)營養(yǎng)物質(zhì)“吃”什么？第4頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)2.特殊營養(yǎng)：生長因子（維生素、堿基等）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產(chǎn)細菌偏堿，真菌偏酸第5頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方(最廣泛)1000mlH2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g第6頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三5.配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當⑶適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研第7頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三1、關(guān)于微生物的營養(yǎng)，說法正確的是A、同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B、凡是碳源都能提供能量C、除水外的無機物僅提供無機鹽D、無機氮源也能提供能量答案：D2、自養(yǎng)微生物和異養(yǎng)微生物最常用的碳源分別是A、CO2和CO2B、CO2和碳酸鹽C、碳酸氫鈉和含碳有機物D、CO2和含碳有機物答案：D第8頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三一）內(nèi)容：1、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行2、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具、培養(yǎng)基進行3、為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在附近進行4、實驗操作時應避免二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染關(guān)鍵技術(shù)是什么？清潔和消毒滅菌酒精燈火焰已經(jīng)滅菌處理的材料和用具與周圍的物品接觸超凈工作臺第9頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法（日常）巴氏消毒法（如：牛奶）化學藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌（玻璃器皿）酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染.二）消毒與滅菌的區(qū)別：第10頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三芽孢在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。煮沸3小時才死。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.第11頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三孢子在生物體的一定部位產(chǎn)生一種特殊的生殖細胞叫孢子。孢子的特點是能直接長成新個體。第12頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三判斷是否需要消毒或滅菌,請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手思考高壓蒸汽干熱滅菌酒精擦拭第13頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細胞群體第14頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三S型：菌落表面光滑，不被免疫系統(tǒng)識別，有多糖莢膜，使人患肺炎或小鼠得敗血癥，有毒性。R型：菌落表面粗糙，被免疫系統(tǒng)識別，沒有莢膜，無毒性。肺炎雙球菌光滑的粗糙的第15頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細胞,形成單個菌落不斷攪拌第16頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基用手摸剛不燙手第17頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復實驗）（空白對照）外焰冷卻試管口通過火焰冷卻第18頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三問題討論1、為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一步劃線前灼燒目的：消滅接種環(huán)上可能存在的微生物每次劃線前灼燒目的：殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。結(jié)束時灼燒的目的：及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。第19頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。第20頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器第21頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三第22頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍注意：沾有酒精并灼燒第23頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三問題討論涂布平板的所有操作都應在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應如何進行無菌操作？

應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。第24頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三⑴平板劃線法：四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄第25頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三五、課題成果評價

培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達到要求，需要分析原因，再次練習。（三）是否進行了及時細致的觀察與記錄第26頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三六.菌種的保藏：1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃第27頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三3、關(guān)于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基制備錯誤的是A、操作順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌B、將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C、待培養(yǎng)基冷卻50℃至左右時進行倒平板D、待平板冷卻凝固約5-10min后將平板倒過來放置

4、無菌技術(shù)包括以下幾方面的敘述，其中錯誤的是A、對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行滅菌B、將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌C、未避免周圍環(huán)境微生物的污染，實驗室操作應在酒精燈火焰附近進行D、實驗操作時應避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸答案：A答案：A第28頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三5．下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是A.防止雜菌污染B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因為發(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤的，因為滅菌的目的是防止雜菌污染，但實際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因為與發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。答案：B第29頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：滴稀釋菌液不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍第30頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三第31頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三包器材第32頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三包器材第33頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三/v_show/id_XMTE2NTU5ODAw.html微生物培養(yǎng)教學視頻/v_show/id_XMjU4NTEwNjg4.html微生物介紹/v_show/id_XMTQ3ODE4MzY=.html微生物科學片/news/society/201105/edc502a8-cb2a-42b3-b8f1-29c31d3ca46a.shtml大腸桿菌第34頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三大腸桿菌大腸桿菌：是人和許多動物腸道中最主要且數(shù)量最多的一種細菌，周身鞭毛，能運動，無芽孢。分布：主要生活在大腸內(nèi)。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進入腸道，與人終身相伴，生命活動：其代謝活動能抑制腸道內(nèi)分解蛋白質(zhì)的微生物生長，減少蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物對人體的危害，還能合成維生素b和k，以及有殺菌作用的大腸桿菌素。

第35頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星期三1、分類：屬于原核生物；具有由肽聚糖組成的細胞壁，只含有核糖體簡單的細胞器，沒有細胞核有擬核；細胞質(zhì)中的質(zhì)粒常用作基因工程中的運載體。2、代謝類型：異養(yǎng)厭氧型3、與人的關(guān)系：在不致病的情況下（正常狀況下），可認為是互利共生（一般高中階段認為是這種關(guān)系）；在致病的情況下，可認為是寄生。第36頁，講稿共38頁，2023年5月2日，星