抗原與抗體反應(yīng)免疫檢測實(shí)驗(yàn)原理和方法

第三節(jié)抗原與抗體反應(yīng)-免疫檢測法

抗原與抗體結(jié)合后，只有出現(xiàn)可見的反應(yīng)，如凝集、溶血、沉淀實(shí)驗(yàn)等，或用熒光素、酶、放射性同位素等標(biāo)記方法提高可測性，才便于在免疫檢測中運(yùn)用?？梢娦苑磻?yīng)的出現(xiàn)，對(duì)抗原抗體分子合適比例的要求遠(yuǎn)比對(duì)彼此絕對(duì)量方面要高得多。這就是說，一方面在進(jìn)行免疫檢測時(shí)要注意抗原抗體的用量；另一方面只要提高可見度或可測性，便可大大提高免疫檢測方法的靈敏度。一、凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指顆粒抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見性現(xiàn)象。顆粒抗原如完整的細(xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。凝集反應(yīng)中抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。二、沉淀反應(yīng)

當(dāng)抗原是可溶性分子時(shí)，與抗體結(jié)合則形成沉淀。1、絮狀沉淀反應(yīng)一系列試管中加入等量的抗體和遞增量的抗原，在中性條件下37度保溫1-2h，便可見到絮狀的蛋白質(zhì)沉淀?？捎糜趯ふ铱乖贵w反應(yīng)的合適比例，檢測抗原抗體的分子比。2、環(huán)狀沉淀反應(yīng)在試管中加入抗體后，小心加入相應(yīng)抗原，使抗原抗體步混合，37度保溫10-20min，在二者界面上出現(xiàn)環(huán)狀沉淀。不能用于定量測定。3、雙向擴(kuò)散：又稱瓊脂擴(kuò)散，是利用瓊脂凝膠作介質(zhì)的一種沉淀反應(yīng)。瓊脂是多孔的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，可使大分子物質(zhì)通過，分子的擴(kuò)散作用使分別兩處的抗原抗體相遇，比例合適時(shí)形成沉淀。可觀測到沉淀弧。沉淀弧的特征與位置取決于抗原分子的大小、結(jié)構(gòu)、擴(kuò)散系數(shù)和濃度等。當(dāng)抗原、抗體存在多種體系時(shí)，會(huì)出現(xiàn)多條沉淀弧。雙向擴(kuò)散法的操作：生理鹽水配制1%-5%的瓊脂，取4mL倒在顯微鏡用的載玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗體用于測定抗體效價(jià)，中心孔滴入抗體，外周孔滴入抗原，用于檢測抗原的存在和定性抗原。

抗原抗體為單一體系時(shí)，抗原濃度不同，沉淀弧的特征不同：抗原抗體為多體系時(shí)，出現(xiàn)的沉淀弧有多條，彼此互不干擾。4、單向免疫擴(kuò)散：又稱單向瓊脂擴(kuò)散，是定量抗原的一種檢測方法。與雙向擴(kuò)散不同的是在瓊脂中含有一定量的抗體，孔內(nèi)加入未知量的相應(yīng)抗原。在37度保溫過程中，孔內(nèi)的抗原向周圍擴(kuò)散，與抗體形成沉淀圈。根據(jù)沉淀圈的大小確定抗原的含量

另外還有其他眾多的免疫檢測技術(shù)和手段，其機(jī)理都利用了抗原抗體的沉淀反應(yīng)。例如微量免疫電泳、對(duì)流免疫電泳、火箭電泳等。只不過其檢測的對(duì)象和檢測的目的各有不同。三、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

當(dāng)抗體與細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆?？乖Y(jié)合并形成抗原抗體復(fù)合物后，可結(jié)合補(bǔ)體引起溶菌、溶血效應(yīng)。用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)既可以測知患者血清中補(bǔ)體的總量，也可以檢測未知抗原或抗體的量。測定人血清補(bǔ)體總量的方法是以綿羊紅血球的溶血為指示。當(dāng)綿羊紅血球與抗綿羊紅血球結(jié)合后，加患者血清，觀測溶血程度。用于葡測定循未知瞇抗原/抗體銷時(shí)，喬采用兩兩套衫系統(tǒng)灑，一藍(lán)套是默待測潔的抗禍原抗何體系漆統(tǒng)，敞稱為紹檢測憂系統(tǒng)殘，一伶套是濕包括龜綿羊足紅血否球和樸抗綿抖羊紅仗血球救抗體貼的指踢示系謙統(tǒng)。清待測色系統(tǒng)瘡中有戀無待勒測得斯抗原/抗體能是利姓用指輩示系而統(tǒng)中沸是否涉出現(xiàn)識(shí)溶血朱來判布斷。反應(yīng)伸的過辟程是咱首先蠢加待狡測得申抗原/抗體胞，反太應(yīng)一拖段時(shí)詳間后葬加入匠補(bǔ)體刮，在兔反應(yīng)達(dá)一段景時(shí)間盤后加唇指示牛系統(tǒng)呀。有破待測翁抗原廁抗體芽結(jié)合錘時(shí)，賓必然捏結(jié)合禁補(bǔ)體至，不叛會(huì)出語現(xiàn)溶通血，透沒有早待測化物質(zhì)住時(shí)出健現(xiàn)溶恭血。四、吸熒光扣抗體拘技術(shù)免疫折熒光婦法是扮將熒拔光素漠與特庸異性禽血清訴抗體掉以化嚇學(xué)方發(fā)式結(jié)掛合起詳來，蛛然后泰將此旦熒光葛標(biāo)記叨了的飾抗體婆作為患一種匯試劑抬在特楚定條流件下預(yù)浸染讀標(biāo)本反，使雄與標(biāo)貼本中辭相應(yīng)仔的抗撈原產(chǎn)打生結(jié)見合反斜應(yīng)，膀再在喉熒光刷顯微跡鏡下表，以硬紫外們光為膠光源突進(jìn)行而觀察針。當(dāng)泡出現(xiàn)振熒光凍時(shí)，脾表明惑標(biāo)記嶺抗體街存在爭，相皮應(yīng)的齡抗原具也存賓在。免疫面熒光姓法有塑直接疾法和老間接招法兩蜓種。第四蘇節(jié)啟免國疫親撫和層芽析生物欲高分宅子具訂有能繩和某然種相王對(duì)應(yīng)駁的專木一分港子可末逆結(jié)晴合的誰特性壟，例款如酶母的活熱性中糾心或印別構(gòu)稅中心口能和裝專一晶的底環(huán)物、次抑制零劑、木輔助裕因子善效應(yīng)責(zé)劑通扣過某臣些次駐級(jí)鍵談相結(jié)著合，脂并在夫一定朵條件所下又賊可以朝解離駛?？谷倔w與問抗原監(jiān)，激坐素及循其受岔體，址核糖館核酸浮與其替互補(bǔ)亦的脫服氧核姥糖核期酸等魄體系歇，都暗具有觸類似喘的特莊性。雖這種唱高分銀子和遮配基幟之間籍形成潤專一夾的可句解離河的復(fù)章合物拜的能瓦力稱逝為親證和力筆。根笨據(jù)這摧種具月有親禍和力臟的生冬物分害子間味可逆櫻的結(jié)從合和母解離境的原聾理發(fā)吊展起社來的鈔層析幅就稱峰為親櫻和層脾析。親和肆層析甘法的遞基本達(dá)過程占：1、偶牧聯(lián)：骨將欲查分離雷的高箭分子意物質(zhì)焰的配央基在炎不影辱響其舊生物改功能單的情壘況下箱與水泊不相殃溶性嘆的載嶄體結(jié)抬合，氏制成摘親和所吸附守劑或她免疫蝦吸附令劑。2、裝雁柱：版在層源析柱往內(nèi)裝騙入固氏相化捆的配河基3、親懇和層貞析：蕉含有與高分嘴子物晴質(zhì)的線混合基液在卷有利睬于配冰基和菊高分復(fù)子之努間形且成復(fù)夠合物碧的條啞件下懲進(jìn)入芝裝有森親和思吸附壘劑的扔層析秋柱。映高分傻子物賓質(zhì)結(jié)墨合留半在柱興內(nèi)，給其他匙雜質(zhì)耕流出協(xié)。