核桃青皮提取物抑制小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究

核桃青皮提取物抑制小鼠Lewis肺癌生長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的觀察核桃青皮提取物對(duì)C57BL/6小鼠體內(nèi)Lewis肺癌生長(zhǎng)的影響。方法復(fù)制C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型，隨機(jī)分組，分別給予生理鹽水、核桃青皮不同濃度的水提物和醇提物治療，觀察腫瘤生長(zhǎng)，最后進(jìn)行和分析。結(jié)果核桃青皮兩種方法所得提取物均對(duì)腫瘤有明顯的抑制作用，與生理鹽水組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義()，且抑制率與濃度呈正相關(guān)，濃度為400mg·ml-1時(shí)抑瘤率達(dá)%。結(jié)論核桃青皮提取物對(duì)鼠Lewis肺癌的生長(zhǎng)有明顯的抑制作用。

【關(guān)鍵詞】核桃青皮提取物；Lewis肺癌；腫瘤

腫瘤是威脅人類生命健康的最大殺手，尤其是近年來伴隨著帶來的惡化，使得全球惡性腫瘤患者的人數(shù)大大增加。全世界每年因各種腫瘤導(dǎo)致數(shù)百萬人死亡。由于化學(xué)藥物的毒副作用較大，限制了在上的廣泛。近年來，從植物中尋求更為環(huán)保和安全的藥物替代品越來越受到人們的重視。提取植物的有效成分開發(fā)藥品已成為當(dāng)前的研究之一。中藥對(duì)提高腫瘤患者的治療成功率及改善腫瘤病人的生存質(zhì)量、延長(zhǎng)生命方面都有顯著療效，它的抗腫瘤作用越來越得到國(guó)際的認(rèn)可。許多藥學(xué)者逐漸把目光轉(zhuǎn)向了植物藥的研究，而核桃屬植物也因其含有的成分和藥理作用而受到越來越多的關(guān)注。白桃湯劑為民間祖?zhèn)髅胤剑鵀椴簧俨∪私獬^病痛，臨床治愈率達(dá)76%，曾在民間廣為流傳。核桃青皮是白桃湯劑中的主要成分之一，對(duì)其提取和分離純化是吉林省重點(diǎn)課題之一，本研究旨在為該藥在臨床上的進(jìn)一步應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1材料

Lewis腫瘤細(xì)胞株(購(gòu)于中科院上海細(xì)胞庫(kù))。健康C57BL/6純系小鼠雌雄各半，體質(zhì)量(19±2)g，吉林省長(zhǎng)春市生物制品研究所提供。

核桃青皮2008-09采自吉林省磐石縣核桃產(chǎn)區(qū)，吉林醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院藥學(xué)教研室雷鈞濤副教授鑒定為胡桃科核桃屬植物核桃楸的外青果皮。自然晾干后，在45℃左右的烘箱中烘干，粉碎過20目篩，然后密封于塑料袋內(nèi)，置冰箱中備用。

2方法

造模將小鼠Lewis肺癌細(xì)胞置于含10%胎牛血清及DMEM的完全培養(yǎng)液中，在37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3d更換1次培養(yǎng)液，%胰蛋白酶消化傳代。細(xì)胞總數(shù)達(dá)到要求后，臺(tái)盼藍(lán)拒染法測(cè)定活細(xì)胞數(shù)＞95%，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5×106個(gè)細(xì)胞/ml-1的細(xì)胞懸液備用。

取40只小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量g，于腋后線第6肋間胸腔接種，每只接種ml，細(xì)胞計(jì)數(shù)為5×106個(gè)細(xì)胞/ml。建立小鼠腫瘤動(dòng)物模型。

核桃青皮提取液制備水提法制備核桃青皮提取液：稱取1kg核桃青皮粗粉，按料液比1∶4加入蒸餾水，浸泡3d后傾出上清液，再加入新的蒸餾水冷浸，如此處理4次，將4次所得浸提液抽濾、減壓濃縮得水提物浸膏g。

醇提法制備核桃青皮提取液：用95%乙醇代替蒸餾水，按照以上的步驟，得到醇提物浸膏g。

準(zhǔn)確稱取醇提浸膏5g用適當(dāng)氯仿溶解，定容于50ml容量瓶，配成100mg·ml-1的溶液。

準(zhǔn)確稱取水提浸膏5g用適當(dāng)氯仿溶解，定容于50ml容量瓶，配成100mg·ml-1的溶液，用相同的方法配成200mg·ml-1，300mg·ml-1，400mg·ml-1的溶液備用。

動(dòng)物分組造模2d后隨機(jī)分組，每組8只。生理鹽水組(A組)：給生理鹽水ml腹腔注射，1次/d；其它各組分別用不同濃度的水提物和醇提物腹腔注射，1次/d。各組均連續(xù)給藥15d。第17天處死全部小鼠進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。

觀察項(xiàng)目瘤體積、瘤重：用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算瘤體積，瘤體積=(a長(zhǎng)徑,b短徑)繪制增殖曲線。腫瘤抑制率=(生理鹽水組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/生理鹽水組平均瘤重×100%。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13．0統(tǒng)計(jì)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。

3結(jié)果

核桃青皮兩種方法所得提取物均對(duì)腫瘤有明顯的抑制作用()結(jié)果見表1～2，且抑制率與濃度呈正相關(guān)，濃度為400mg·ml-1時(shí)抑制作用最強(qiáng)烈，雖抑瘤率因提取方法的差異而有區(qū)別，但不顯著。原因可能是由于提取方法的不同，各提取物有一點(diǎn)差異導(dǎo)致。表1不同濃度的水提物對(duì)小鼠體內(nèi)Lewis肺癌的影響表2不同濃度的醇提物對(duì)小鼠體內(nèi)Lewis肺癌的影響

4討論

Lewis肺癌是常用的篩選抗腫瘤藥物的動(dòng)物模型。本研究將核桃青皮兩種方法所得提取物均用實(shí)驗(yàn)治療Lewis肺癌小鼠，并探討核桃青皮提取物的免疫抑制作用。核桃青皮主要功效是益氣養(yǎng)陰、活血消淤，能夠殺傷癌細(xì)胞，抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。核桃青皮是白桃湯劑方中的主要成分之一，白桃湯劑在民間已取得了很好的療效。方中甘草、黃芪等補(bǔ)氣健脾藥物可調(diào)節(jié)腫瘤患者的免疫機(jī)能；白附子等清熱解毒藥有直接或間接抑制腫瘤細(xì)胞的作用，具有較強(qiáng)的抗癌活性，并有直接殺滅腫瘤細(xì)胞的作用；現(xiàn)有的免疫抑制劑，如順鉑的選擇性極差，通常在抑制免疫反應(yīng)的同時(shí)也抑制細(xì)胞吞噬功能，在有效劑量下同時(shí)也多有嚴(yán)重的毒副作用。白桃湯劑可選擇性地抑制細(xì)胞免疫而對(duì)體液免疫無影響，并具有一定的免疫調(diào)節(jié)作用［1］，同時(shí)還可增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能［2］，其機(jī)理在于誘導(dǎo)動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生細(xì)胞免疫反應(yīng)，對(duì)腫瘤細(xì)胞核酸代謝水平有抑制作用，這也是中藥對(duì)化療藥的優(yōu)勢(shì)所在。

水提法、醇提法兩種提取方法中，水提法與醇提法對(duì)腫瘤的抑制效果相似，但水提法提取得的浸膏相對(duì)比醇提法少，選用醇提法在取得的浸膏量上有優(yōu)勢(shì)，可能是一些成分不溶于水而溶解于醇的原因。

中藥單體及復(fù)方所含成分眾多，決定了中藥具有多靶點(diǎn)作用效應(yīng)。另外，由于使用劑量、機(jī)體的機(jī)能狀態(tài)、藥物不同成分、藥物配伍等因素的影響，在不同的條件下，針對(duì)不同的對(duì)象，許多中醫(yī)藥具有促進(jìn)或抑制機(jī)體免疫功能的“雙向作用”。這是中藥獨(dú)特而復(fù)雜的藥性決定的，也是中醫(yī)辨證論治觀點(diǎn)的具體體現(xiàn)［3］。本文對(duì)核桃青皮各提取物的具體抑瘤成分只是做了初步的探討，對(duì)其作用方式和作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

［1］蘭英，房金波，張維晶，等.核桃楸青果皮(GPJM)水提物誘生小鼠腫