超氧化物歧化酶SOD的生產(chǎn)林志豪

超氧化物歧化酶（SOD）的生產(chǎn)生物技術(shù)林志豪目錄一.SOD的概況二.SOD的運(yùn)用三.SOD的生產(chǎn)四.SOD使用及生產(chǎn)時(shí)的注意事項(xiàng)五.注意事項(xiàng)一.SOD的概況1.超氧化物歧化酶是一種廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物中的金屬酶，是生物體內(nèi)抗氧化酶系中主要成員之一。SOD是機(jī)體內(nèi)天然存在的超氧自由基清除因子，它通過上述反應(yīng)可以把有害的超氧自由基轉(zhuǎn)化為過氧化氫。盡管過氧化氫仍是對(duì)機(jī)體有害的活性氧，但體內(nèi)6性極強(qiáng)的過氧化氫酶(CAT)和過氧化物酶(POD)會(huì)立即將其分解為完全無害的水。這樣，三種酶便組成了一個(gè)完整的防氧鏈條。2.SOD的分類按其結(jié)合的金屬離子可分為Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三種

3.SOD的理化性質(zhì)3.1SOD對(duì)氰化物和H2O2的敏感性3.2SOD的吸收光譜特性3.3SOD穩(wěn)定性及影響因素4.SOD的作用

1、抗氧化2、預(yù)防慢性病及其并發(fā)癥3、抗衰老4、抗疲勞5、化療副作用的消除劑6、避免手術(shù)的二次傷害7、化解婦女的氧化壓力危機(jī)

二.SOD的運(yùn)用1．藥物類，主要集中在炎癥病患者，尤其治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、慢性多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、心肌梗塞、心血管病、腫瘤患者以及放射性治療炎癥病患者；2．用于生化制藥，作為一種生化酶制劑，廣泛應(yīng)用于臨床和科研上，具有極強(qiáng)的抗衰老，抗腫瘤、調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)作用；3．用于化妝品類，可添加在化妝品中，具有抗氧化抗腐蝕的優(yōu)良性能。以SOD為主要成份的產(chǎn)品風(fēng)靡世界，引發(fā)了化妝品歷史上的一場(chǎng)革命，使人類永葆青春美麗夢(mèng)想成真；4.用作保健食品、飲料、如SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常暢銷!在飲料、糖果、糕點(diǎn)等食品中加入SOD既可利用其抗腐蝕性延長保質(zhì)期，又可調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌系統(tǒng)。

SOD被視為生命科技中最具神奇魔力的酶人體內(nèi)的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敵，是機(jī)體內(nèi)氧自由基的頭號(hào)殺手，是生命健康之本。全球118位科學(xué)家發(fā)表聯(lián)合聲明：自由基是百病之源，SOD是健康之本。體內(nèi)的SOD活性越高，壽命就越長。三.SOD的生產(chǎn)1.SOD酶的提取

稱取5克大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎細(xì)胞

后，加入pH7.8,0.05mol/L的磷酸緩沖液

（pH7.8）15ml，繼續(xù)研磨20min,使SOD酶充分

溶解到緩沖液中，然后6000r/min冰凍離心

15min，放棄沉淀，取上清液。

2.去除雜蛋白

上清液中加入0.25倍體積的氯仿——乙醇混合液

攪拌15min,6000r/min離心15min，放棄沉淀，

得到的上清液即是粗酶液

3.SOD酶的沉淀分離

粗酶液在攪拌下緩慢加入固體硫酸銨至飽和濃

度60%，持續(xù)攪拌15min，6000r/min離心

15min，得到SOD酶沉淀4.

將沉淀溶入pH7.8，0.05mol/L的磷酸緩沖液

5mL中，然后6000r/min離心15min，放棄沉

淀，取上清液，用凝膠sephacylS-200進(jìn)行純

化，然后超濾濃縮。5.

用紫外分光光度計(jì)測(cè)定濃液的蛋白含量6.

將濃縮冷凍干燥后即得成品。

四、超氧化物歧化酶（SOD）的測(cè)定原理

連苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放

出O2-,生成帶色的中間產(chǎn)物。在自氧化過程的初

始階段，黃色中間產(chǎn)物的積累在滯后30-45s后

就與時(shí)間呈現(xiàn)性關(guān)系。中間產(chǎn)物在325nm處有

強(qiáng)烈的光吸收，在有SOD存在時(shí)能催化生成O2

和H2O2，從而阻止了中間產(chǎn)物的積累，通過計(jì)

算就可以求出SOD的活力。儀器紫外卸分光魚光度挺計(jì)、坡pH涌計(jì),叫離心緩機(jī)試劑⑴0蓮.0吉5m蜜ol天/L圣連苯暗三酚撲溶液彎：稱絮取3蓬.1年5g炊連苯誼三酚寒用0.裙01洲mo線l/錯(cuò)L鹽傅酸溶奪液溶召解并細(xì)定容扛至5馬00催ml⑵p施H=鉗8.清3月Tr璃is熟-H類Cl共緩沖蛙溶液①0碌.1圓mo帳l/干L三貴羥甲撿基氨司基甲伐烷（普Tr桐is吃）溶勞液:NH賴2C緣瑞(C運(yùn)H2鈴OH窩)3勵(lì)12免1.姑14取1倍2.豪11暢4g稼,溶券解，得定容份至1幻玉00信ml②0嗚.1幻玉mo血l/惰L鹽判酸:沃取暫8.懲6(包9)稈ml兵濃鹽赤酸，柴稀釋窗至10疫00綁ml③5避0卡毫升廢0.腎1m憂ol伙/L鄙三羥咱甲基允氨基曠甲烷扯（T測(cè)ri思s）靜溶液19屈.9冷_毫浙升0耽.1晨mo奶l/射L鹽門酸混彎勻并忌稀釋支至1炒00毫升貸。(保羊存溫總度:遇常繡溫密偽封避排光保需存)測(cè)定朝步驟1、腔稱壁取6較g樣煩品，視加于衰現(xiàn)在攔冰箱愿中放夕置的弓緩沖揉液6德0m恢l(騰樣品敢的1委0倍逗，視烏情況炊定)富，在織冰浴撒中研液磨成諸勻漿近，四險(xiǎn)層紗倒布過刺濾，佳濾液謀經(jīng)4俱00件0r胞/m街in擠離蜜心2踢0m狹in嘉,取蓋上清相液用貢于酶糧活測(cè)腸定。2、唐連苯暖三酚躲自氧畝化速牧率的療測(cè)定取4狼.5迎ml烤緩沖貫液，棍在2罩5℃記水浴脹中保震溫1他5m漫in摧,加姥入1泳0哭連苯腸三酚告液，蘭迅速稱搖勻空白建：取伍4.侵5m暈l緩社沖液狡，在志25撿℃水以浴中怨保溫運(yùn)15獨(dú)mi養(yǎng)n,吐加仰入1壓0推緩沖液裝，迅聽速搖類勻倒入擱光徑金1c猾m的例比色質(zhì)杯中己，在叨32我5n逢m波秘長下荒于恒誓溫池蹲中每旦隔3磚0s箱測(cè)A騙值一鉛次計(jì)算吳線形品范圍召內(nèi)，青每1茄mi太nA駱的增美值，具此即屠連苯統(tǒng)三酚綁的自逆氧化章速率冊(cè)，要渾求自敘氧化歪速率嘩控制哭在0丘.0裙7O拖D/疫mi森n3.酶活則測(cè)定測(cè)定吵方法權(quán)與測(cè)炒連苯差三酚請(qǐng)自氧留化速態(tài)率相賴同，取1難.5穴ml仇緩沖尤液，菊在2魔5℃派水浴引中保櫻溫1楊5m腸in彈,加可入3感ml行酶液飄，加膽入1末0淋連苯且三酚刺液，駝迅速祝搖勻空白園：取壘1.萍5m偵l緩訴沖液貸，在收25爛℃水跳浴中僵保溫始15圾mi君n,蛾加座入3煙ml諒酶液踢，加心入1惱0香緩沖憑液，炮迅速射搖勻計(jì)算丙加酶蚊后連哭苯三槐酚自易氧化跳速率4.結(jié)果舉計(jì)算樣品搬酶活盡單位污表示梯，S剩OD健酶活震單位淹（U桑）/姻g鮮淘重樣品喬酶活妹單位牌=式中觸——它酶樣鈴品在蹦32片5n束m處塌每分約鐘光衡密度斃變化臨值V—喪—反晚應(yīng)液術(shù)體積n—孩—酶鏟液稀議釋倍冬數(shù)（探若酶溜液足獻(xiàn)夠多觀，可訓(xùn)不稀郊釋即祥n為衛(wèi)1）五.煩注意紋事項(xiàng)1.霉SO全D的忙安全載性大量血試驗(yàn)著和臨詳床應(yīng)粘用表夾明，感無檢論何梨種給把藥方目式，佳除罕涂見的顯超敏抵反應(yīng)次外，簽SO怒D對(duì)擔(dān)人體棉無毒竊性。假雖然朋SO工D是翅Mr仙在3本0從00太0以繪上的賤蛋白黃質(zhì)，壞但奇卻未斃發(fā)現(xiàn)跑具有疊抗原妻性，謙其傅原因遲也正牲在進(jìn)擺