酶組織化學(xué)概論

酶組織化學(xué)概論酶是一種具有催化活性的特殊蛋白質(zhì)。人體的各種機(jī)能活動(dòng)都與酶的活性有密切關(guān)系。

國(guó)際生物化學(xué)酶學(xué)委員會(huì)已登記的酶有2200多種。但當(dāng)前組織化學(xué)技術(shù)所能顯示的酶僅200多種。酶組織化學(xué)是用組織化學(xué)的方法證明酶的存在，它的基礎(chǔ)是組織化學(xué)，目的在于闡明組織細(xì)胞內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)、功能及其生物學(xué)意義。一、酶的分類

1.氧化還原酶是催化氧化還原反應(yīng)的酶。包括脫氫酶、氧化酶、過氧化物酶和加單氧酶。如蘋果酸脫氫酶、黃嘌呤氧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶與羥化酶或混合功能氧化酶。2.轉(zhuǎn)移酶即催化功能基團(tuán)轉(zhuǎn)移的酶。此大類可根據(jù)底物中被轉(zhuǎn)移的基團(tuán)性質(zhì)分為8個(gè)亞類。其中第6亞類為轉(zhuǎn)移含氮基基團(tuán)的酶，如天門冬酸轉(zhuǎn)移酶。

3.水解酶即催化水解反應(yīng)的酶，稱為水解酶。水解酶又可根據(jù)其與水解反應(yīng)有關(guān)的鍵的類型進(jìn)一步分為亞酶類，如酯酶、糖酶和肽酶。4.裂解酶又稱裂合酶。促進(jìn)一種化合物分成兩種化合物，或由兩種化合物合成一種化合物的酶類。它可使底物移去基團(tuán)，如H20、C02，并出現(xiàn)雙鍵。此類酶的亞類比較多，一般表示分裂的基團(tuán)，如其中第1亞類為裂解C-C基團(tuán)的酶，如草酰乙酸脫羧酶；第2亞類是裂解C-O基團(tuán)的酶，如脫羧酶等。5.異構(gòu)酶催化同分異構(gòu)體的相互轉(zhuǎn)化。磷酸葡萄糖異構(gòu)酶，磷酸丙糖異構(gòu)酶等。

6.合成酶（又稱連接酶）系指能將兩種物質(zhì)合成為一種物質(zhì)，并必須與ATP分解相偶聯(lián)的酶。二、光鏡酶組織化學(xué)證明法

1．金屬-金屬鹽法

金屬鹽法一般是指金、銀、銅、鐵、鋁、鈷等金屬。金屬、金屬鹽及其化合物都具有顏色，容易發(fā)生呈色反應(yīng)。而且酶的分解產(chǎn)物和金屬多半可以結(jié)合。因此，捕捉酶反應(yīng)的分解產(chǎn)物，使其與金屬結(jié)合，利用其呈色反應(yīng)，再顯現(xiàn)出酶反應(yīng)的部位，就可以證明某種酶的存在。酶作用于底物后生成的分解產(chǎn)物與底物孵育液中的金屬離子相結(jié)合，直接沉著于酶的反應(yīng)局部，然后使其顯色。其反應(yīng)式如下：

Pb2+(NH4)2S

R-PO4Na2+H2O――→ROH+PbHPO4↓――→PbS

酶反應(yīng)顯色這種票方法關(guān)在底肯物溶綠液中熄的H+濃度誼為中危勝或閃弱酸蜂性，幅常常小可利芬用易耽獲得聯(lián)的硝則酸鉛嚷或醋泳酸鉛電。因漂此，吵本法厘常被襖應(yīng)用慮于酸莊性磷冰酸酶罵和在虜中性莊附近捐起作沸用的樣磷酸丙酯酶哲類。厭通常北稱本航法為替硫化卡鉛法盆。證明堤堿性校磷酸役酶時(shí)日，通構(gòu)過形固成可即見的估黑色肉硫化美鈷，鏡稱為猜硫化撤鈷法沿。Ca2+R-毒PO4Na2+利H2O竭――賀―→非R艙OH良+茂C寫aH箏PO4↓酶反虧應(yīng)Co2+（NH4)2S蟲―鞭――苦→肺Co第HP話O4――搬―→Co迫S金屬搶置換有顯匪色用這枝些金達(dá)屬鹽扯法能搏夠證丟明的輪酶多諷半是春水解肥酶。蚊其中違有堿登性磷外酸酶吼、酸令性磷產(chǎn)酸酶踐、脲棒酶、階酯酶最、硫密酸酶里、碳?xì)馑狒忻浮⒚衲憠A陪酯酶嶼等。帥此外斗，根夸據(jù)磷拼酸酶白的理沉論，深利用悲組織艦化學(xué)組的鑒深別法釀能證險(xiǎn)明的廳酶還梯有磷決酰胺扮酶、5’趙-核苷凡酸酶拾、AT圈P酶、籃葡萄鐘糖-6蝕-磷酸頸酶等國(guó)。2．偶在聯(lián)偶聾氮色厲素法相偶炮聯(lián)偶意氮色奔素法集，此絹法又油稱偶額氮色騰素法獎(jiǎng)，是崇指用難人工件合成威的酶紛底物土，在伴酶的躍作用灰下，幸產(chǎn)生禮分解叫產(chǎn)物萌，后歐者與吧重氮挨鹽結(jié)窄合，鍛引起誓偶聯(lián)插偶氮貿(mào)反應(yīng)報(bào)，使童其形牧成不銷溶性邪的偶栗氮色影素，沙以此童證明耽酶的識(shí)定位落。在這館種方遵法中飯，最腿常用獎(jiǎng)的分荒解產(chǎn)學(xué)物是晶茶酚絲式系列黃的化頌合物遷，如2-萘酚聲、1-萘酚知、萘房誠(chéng)酚AS、萘酚AS衍生晉物等次。但盤這些素化合光物本填身也相有一土定的語(yǔ)溶解排性，戲因而館其分妖解產(chǎn)掛物有養(yǎng)擴(kuò)散拒的缺餐點(diǎn)。?；谟谥亟堑}餓種類跡不同對(duì)，其畫偶氮嫂顏色袖也各賽有差謎異，胳可顯硬示出輪藍(lán)色淡、紫翅色、潛紅色途、褐音色、擦黑色規(guī)、棕呢色等括各種擴(kuò)顏色牛。根據(jù)矮偶聯(lián)洪的時(shí)刷間不諸同，計(jì)將偶停氮色冠素法漢分為漏兩種莊。1）同員時(shí)偶襖聯(lián)法拿同時(shí)允偶聯(lián)釘法是略在底領(lǐng)物混裹合液涉中，枕通過遇酶的信分解革作用葛所得罰到的雅沉著多物，椅立即低形成艙重氮豆化合形物和故偶氮怠色素貼。2）后灰偶聯(lián)腫法竊后雪偶聯(lián)藥法是禽為了巾防止室重氮緩鹽對(duì)廉酶的召抑制謀作用抱，先轟使酶挑在底鳥物內(nèi)盾發(fā)生惠作用驢，使鑒分解任產(chǎn)物廟沉著淹，然福后再天浸漬善于重讀氮鹽勉溶液司中，簡(jiǎn)使其促形成氧偶氮裙色素上。目前虛，可糊用這瀉種方輪法證訪明的魂酶有劣：堿累性磷仆酸酶遷、酸瞎性磷垃酸酶逗、酯身酶、β-葡苷紀(jì)酸酶濤、β-半乳袖糖苷桂酶、β-葡糖牲苷酶末、N-乙酰混基β-氨基驅(qū)葡糖清酶、襪氨基打肽酶百、硫伐酸酯滴酶等梅等。3.色素赴形成昂法（1）四磁唑鹽競(jìng)法選四頸唑鹽吵法是應(yīng)指含擠有四救唑鹽合或雙挪四唑愿鹽的蝕底物序混合糧液，潤(rùn)在脫批氫酶停的作拋用下倘，從肝底物解分離擇出來甜的氫給原子采與無背色的艱四唑帥鹽或免雙四旗唑鹽齒相結(jié)轎合，莫形成蘋紅色腦或藍(lán)硬色的充甲櫻（fo杰rm載az炸an）或二王甲血（di除fo陵rm戶az圖an）色素山。該棋法主孫要證換明各芝種脫名氫酶可。（2）靛曬酚藍(lán)槳法籮靛切酚藍(lán)贊法用誤于檢鑼測(cè)氧初化酶咸的方池法，靠把二江甲基-對(duì)-苯二頸胺和α-萘酚亡加入酬底物嘉混合逝液中象，由迎酶作木用而存釋放窯的氧齡與此科二者掙發(fā)生儀結(jié)合壺，形安成靛新酚藍(lán)幅，而君顯示熟出酶貧的定拳位。4.底物呼薄膜映法蹤蝶底物皮薄膜壞法是沾把酶嘩底物術(shù)在載識(shí)物片后上涂芒成膜對(duì)，然角后再論將含督酶的第組織凝切片怖貼附曾其上囑，給初以條喇件讓王酶發(fā)榴生反浩應(yīng)，洪使底薦物分犬解。摟接著菊剝離咸貼附失的切右片，鋒對(duì)膜房誠(chéng)進(jìn)行仁特殊慰染色范，只驗(yàn)有底臂物被庭分解吸的部循位不知著色有，而睛未被勤分解某的部功位被炸染色氧，故先未著緩色部涌位就顆是酶絕的定南位。三、鋤電鏡征酶組診織化敢學(xué)證鐮明法1．氧臂化還且原酶趕（1）四螞唑鹽童法鎖四絞唑鹽脖是水餡溶性脆的，塔在水哥溶液廢中幾胖乎無撿色，駐還原殃后則澇難溶厚于水當(dāng)和脂橋質(zhì)，渠變成豬有色鋤的高倆電子丑密度夠的甲炊?，F(xiàn)慣在最柳常用都的四蓋唑鹽有NB港T和TN藏BT等。（2）高盛鐵氰女化物討還原哄法糟本肌法是框金屬稍鹽法潑的一耳種，貝高鐵瓣氰化液物作米為人祖工受桃氫體且而被脆使用泉。高愁鐵氰桿化物伏接受截由酶疫作用聞而游災(zāi)離出株來的桂氫，冰從而籌變成摸亞鐵篩氰化嶺物，張此物撤質(zhì)不煙溶于晴水，罵并以泉電子策密度稅高的躺亞鐵甜氰化符銅的該形式肌在酶趣活性構(gòu)部位奮被捕柄捉而銀沉著填。琥珀荷酸――曲――殖――計(jì)→延胡鮮索酸琥珀窩酸脫箱氫酶Fe橋(C棵N)63-――衫――挨――→鑒Fe裂(C緣瑞N)64-高鐵艱氰化莫物叛亞鐵裹氰化志物Cu2+――務(wù)――→透Cu2Fe休(C饒N)6·XH2O亞鐵因氰化芬物（3）二吐氨基底聯(lián)苯緣瑞胺法二氨殼基聯(lián)嶺苯胺幻玉法（di費(fèi)am瓜in合ob闊en稼zi揉di者neme鐮th校od，DA瞧B）法主報(bào)要用戀在直久接證輛明細(xì)酒胞色廉素氧浪化酶譜、過狡氧化貢物酶怎（內(nèi)零源性菜）、菊過氧診化氫懇酶活主性檢掛測(cè)。DA撈B還用惡于形抱成嗜波鋨性陵多聚勞體。2.水解仆酶（1）膽猜堿酯寬酶活揀性檢深查法1）乙頸硫羧降酸法莖根據(jù)哥使用裁的捕支捉金捷屬種勵(lì)類的琴不同座可有揉鉛－跑乙硫紙羥酸領(lǐng)法等莫，在莖酶的縣作用慨下，糖游離初的硫堪化氫份與鉛表反應(yīng)漲，形椒成硫訪化鉛羞沉著肚于酶匪的活青性部用位。酯酶Pb功(N駕O3)2CH3CO活SH掩―羨―→駕C釋H3CO奔OH屈+另H2S縫――么→Pb臨S↓2）嗜鋨檢性硫脂酯法懷是以妻嗜鋨披性硫概酯作稻為底挖物，奸用堅(jiān)癢牢藍(lán)BB尿N做偶溪聯(lián)劑那的方帝法。四、禿對(duì)照它實(shí)驗(yàn)1.抑制吉?jiǎng)?duì)嚇照用酶貼活性孟的抑強(qiáng)制劑哭確認(rèn)撞酶活效性受物到抑某制。cA氏TP腺苷+播Pi望AT牌PPP嚷iAD掛P銜+響Pi環(huán)化猶酶AT類P酶四氧恥嘧啶磷酸沖二酯蜻酶茶堿特異貢性底禾物：5’持-腺苷賊酰-亞氨歌二磷智酸cA阿TP+迷PN分P（亞辰氨二滴磷酸耽）AT杠P-側(cè)PN釣P無水遞解作廣用環(huán)化景酶AT丟P酶2.去底中物對(duì)怪照屠用去辰底物飽的無紫底物假孵育痕液進(jìn)翅行反學(xué)應(yīng)，取確認(rèn)數(shù)反應(yīng)擾的消漿失或