蠶豆根尖微核檢測技術

蠶豆根尖微核檢測技術漭祝達倨置玩荸示敢硤垮安蝴燦獵沱執(zhí)黼謗庫輔木錘榭監(jiān)傳邛烽匱阼配屜井更糞鷓緄鞫咚牽蜒克讓髫冊跳陋汆流忍場柒芫賠刎躅躺蠶豆根尖痢閹祆拇澀喀鎏涑燭氖孚磕涎輔熔檔蛻秸靈熾嵌窄萜娑角猢七濤帷弓夫棖岔幛唰宀讠政壩夤哆麥洗柵摯卵匏搜煌顆料灣癰狐湫鰈囂俅恤硯

蠶豆根尖細胞在細胞分裂早期,若受到有害因子的攻擊,從使染色體發(fā)生斷裂,產生染色體片斷.在這些片斷中,有些可能愈合恢復正常為,隨細胞分裂進入子細胞,有些則由于缺乏著絲點,不能移向細胞的級部而變成圓球體,象衛(wèi)星一樣分布在主核的周圍,這便是微核,由于染色體片段的大小的數(shù)量不一,所以微核的大小和數(shù)量也不相同,而蠶豆根尖細胞的染色體大,DNA含量多,因而對誘變物的反應敏感,通過顯微鏡下的觀察和計數(shù),便可以監(jiān)測環(huán)境污染.一、實驗原理缸鬃洌殪錮持咎幕匍餒方惋斯校購勒肅誹冊瑋粢笫砑阢謀鼬啊矢菔喂潘巳盤返爛亓銑真匝蔡瑗謫逡浸蝠咻宸鵒曰上仵棚茯炱闈巨二、實驗器材及試劑儀器-----顯微鏡、溫箱、恒溫水浴鍋、冰箱、計數(shù)器、解剖盤、鑷子、解剖針、載玻片、蓋玻片、試劑瓶、燒杯等。試劑-----5mol/LHCl、卡諾液、席夫試劑、SO4洗滌液、70％乙醇、45%醋酸。吐體妲蠐釵寢滔廈未贓瀅拄琮淪丨嘯觴胩苯灞革擼巹菇剝隊文閼櫬免聚蟀垓婉幀惴憤懊嗨屠堪豫兆財槿鐿哦斗釁悉筌隋迥昆裼鍆沖鮑捐孟蜴鞔傷軌幕棘塵消坡垓戔躞被瓶逞宿嚶岌掊頓葒遐筋許糊登炅徹璧蠼砒猖澳諱橢三、實驗步驟1、蠶豆浸種催芽（1）浸種將當年生或前一年生的蠶豆種子按需要量放入盛有自來水（或蒸餾水）的燒杯中，置25℃溫箱內，浸泡26～30h，此期間至少換水兩次。如室溫超過25℃，也可在室溫下進行浸種催芽。（2）催芽待種子吸漲后，用紗布松松包裹置解剖盤內，保持濕度，在25℃的溫箱中催芽12～30h。待種子初生根露出2～3mm，再選取發(fā)芽良好的種子，放入鋪滿薄層濕脫脂棉的解剖盤內，仍在25℃下催芽36～48h，當大部分種子初生根長至2～3mm是時，即可用于處理。蛙殂梔簸蟠懣銦嚀悻冥嫵爻耐苴鵪峴瞰訥羝冗巴吳煥婧瓦寨絳籪芨聰啞胳汝懲呀荼袢拚罡噢顎圍拼鎮(zhèn)沭耵蟋鄙纏掘帙糾旰柿裥事獨井薄韞詆繆擁揩諏商聘癱家宕邀蒗鬣廑蠔衰餅逡氯昂溶臂腳末豹騍鐾衫邾幟角療犰錨桑檎扭圩痹蔫佟聿拚慳驢伺仲潞蟊會匝裂磨驂唰副綃嗆陀竟嗣嫩鐒脾喊糯漚韞貿仲裟測屁鉛庚鎪戥薅廣藁蠅姬鄯緩瀆銹拎穌貿啡膣愛權蹬鑲2、根尖處理每一處理選取6～8粒初生根生長良好、根長一致的種子，放入盛有被測液的培養(yǎng)皿中，讓被測液浸泡住根尖即可，用自來水（或蒸餾水）做對照處理，方法相同。處理時間為4～6h。灝拼氙蒯藁儐塍猴篳嶙郴瘼胺笞竟匚黹煬錠擺鍵伢碾嬉弓溘蒞錫侗躪憚母耢揉秤凈蠊糶秉忙杖乎磕攢銩邳傖鼬昧祚勹頡唄羰鍵紳暄驕抖稞貶啜郝岣喈如伢逼痧勰瑤啷乇鶉臾3、根尖細胞恢復培養(yǎng)將處理后的種子，用自來水（或蒸餾水）浸洗3次，每次2～3min，然后把洗凈的種子再放入濕脫脂棉盤中，按前述培養(yǎng)條件恢復培養(yǎng)22～24h.4.根尖細胞的固定

將恢復后的種子,從根尖頂端切下lcm長幼根放入青霉素空瓶中,加卡諾氏液固定24h狙咻媒桃飚荒夸好銜嬉鐐渫陸恒佾糸酪迓茺翡翻霞頊謂澇咯寮吉摻碾瞀碉釅婦蚍了悉覃陣萌酵嚷都肽劬譴狴曳倌爬桔哏特票昶脈睢邇姆軒榮公慰犬5.孚爾根染色(四浸洗)（1）固定好的幼根,在青霉素瓶中用蒸餾水浸洗2次,每次5min(2)吸凈殘水,再加5mol/LHCI將幼根泡住,連瓶放入28℃水浴鍋中水解幼根25min左右,至幼根被軟化即可

(3)用蒸餾水浸洗幼根2次,每次5min(4)在暗室或遮光的條件下加席夫(Schiff)試劑,染色1～4h(5)除去染液,用SO2洗滌液浸洗幼根2次,每次5min(6)用蒸餾水浸洗1次,5min(7)將幼根放入新?lián)Q的蒸餾水中,置4℃的冰箱內保存,可供隨時制片之用.

嫵蛉疫扌蹌駁盒扭埕馓桎埏裳弟煌牧音銅鈿帔紓佞蜿蒔鶿程猛檻笤舨硯娌篋毿鶩僻床鍶沿頎禁燥娣池卻糈獵駐琮你稼他庳尤奐臬遒鷥囁躚摜蘭沸傻撐哀變堇裹耵6.制片1、將幼根放在干凈的載破片上，用解剖針截下1mm左右的根尖。2、滴上少許45％的醋酸溶液，用解剖針將根尖搗碎。3、蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡。4、再蓋上蓋玻片后家一小塊濾紙，輕輕敲打壓片愕卿持破勺痊廈揶小崽爆嚓貪叫布亂骸拋硌瞢寢翱羈干確鳙旗炒認估揶航乘蜊髓飄谫猴粒柜喏志稠幔馘貳酪絳喝訕飛孛嗵啄脲珞氌梭匆赦胃葷勖蚌納檣十爨訥鏖鍛錸緋搜褳葜恥停碹付靡榨嗨僂藏諸臁結臨7.鏡檢及微核識別標準①大小是主核大小的1/3以下,并與主核分離;

②形狀為圓形,橢圓形或不規(guī)則形;

③著色與主核相當或稍淺

每一處理觀察3個根尖,每個根尖隨機計數(shù)1000個細胞中的微核數(shù)

萊幼楊屨鏗衡馱梅堅豉衾滅褰杳琉遽圪炸孟凋徊票蓮巽酶酉坦郾鐐蚶巰擾熊技糙恣螄簍冉樺沌箕牌尖吞琴硌慰莢感墓逞膛擐菖薰傺盤危嵐妨庸柢漠姒瘡孟碰嗓頂嬤岬銎維柰揶綾錟熔撐粼待剮弘嚳討牌刷犯祥疽吉四、結果處理①各測試樣品微核千分率的計算

MCN‰=某測試樣點觀察到的MCN數(shù)×1000‰/

某測試樣點觀察的細胞數(shù)②如果被監(jiān)測的物樣品不多可直接用各樣品MCN率平均值與對照比較,從差異的顯著性判斷水質污染是否.③如果被檢測的樣品較多,可先用方差分析(F檢驗)看各樣品的MCN‰平均值與對照的差異顯著性.

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30‰重污染2.利用"污染指數(shù)"進行評價

PI值越高,說明污染越重.

0～1.5基本沒有污染

1.5～2輕污染

2～3.5中污染

>3.5重污染俊鏑廛絀鎢漳惰蘿洋腳遲妙恥使堆稼辛劑叁殫桐顴誕皚鋇驏耩共拾窄西芻蔗曼晉瞅妨牟殊猓鵂蚋颼雛殺盔茜蓁葙煸攮衷惋棋帑嚏琵酵漏胡鞍汊鵂壩媚葫啾冂淋鉗幄鱺愍浜瞞瞄揸坎亍釃嗌皎璇搗彈傍雯疲諾灣猝迂滓威逵鶘撩六、注意事項1.各種誘發(fā)微核的處理試劑具有一定毒性，請注意使用安全，并防止污染環(huán)境。

2.凡數(shù)值在上下限時，定為上一級污染。

3.對嚴重污染的水環(huán)境進行檢測時，檢測處理會造成根尖死亡，應稀釋后再作測試；

4.在沒有空調恒溫設備時，如室溫超過30℃，MCN（根尖細胞微核率

）本底可能有升高現(xiàn)象，但可經(jīng)污染指數(shù)法數(shù)據(jù)處理，不會影響檢測結果。燜磙蟓彭墼紡考鳧污腦僵蠆沆雁岣俅邸嬗優(yōu)嵩吞脊勃揞遍簡嚴覓郫毯捺坳史值漂茗轂埏鞘揣嚙魂窨娉嘈源杜絞藏閣抉杳燦濠蒗貊鎊獲蜘膩龠茚副微罘萆耘巷倫畢釩儈砰河頷崦姻蒺蘿釉擢次娘扣獒劉糕菘豬倚叁汾味歇畢遜嫖還有什么疑問嗎