免疫磁珠分離技術(shù)IMB及在食品生產(chǎn)中的應(yīng)用概要課件

提綱磁性微球磁性微球結(jié)構(gòu)、分類及特點磁性微球的制備磁性微球分離技術(shù)免疫磁株免疫磁珠結(jié)構(gòu)與性質(zhì)免疫磁株的特點免疫磁珠的分類免疫磁珠的制備免疫磁珠分離技術(shù)免疫磁珠技術(shù)的應(yīng)用免疫磁珠在食品安全檢測中的應(yīng)用免疫磁珠與其它檢測手段的聯(lián)用免疫磁珠技術(shù)在其他領(lǐng)域的應(yīng)用免疫磁珠技術(shù)的優(yōu)缺點及發(fā)展望一磁性微球是通過一定方法將磁性無機粒子與有機高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的體積在幾納米到幾十微米之間的復(fù)合微球。高分子磁性微球表面具有眾多表面功能基團，同時具有磁響應(yīng)性，在外加磁場作用下具有磁導(dǎo)向功能。目前已廣泛用于生物醫(yī)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和分離工程等領(lǐng)域。二磁性微球結(jié)構(gòu)、分類及特點磁性核材料多為Fe、Co、Pt、Ni等金屬及其氧化物。如Fe3O4、γ-Fe2O3、MeFe2O3（Me=Co、Mn、Ni）、BaFe12O19、鐵鈷合金（Fe-Co和Ni-Fe）。最常用的是Fe、Fe2O3、Fe3O4。其中Fe3O4應(yīng)用最多。構(gòu)成磁性微球的高分子材料有天然高分子和合成高分子物質(zhì)。天然高分子有明膠、球蛋白、牛血清白蛋白、聚賴氨酸、淀粉和多種聚糖如纖維素、葡聚糖、瓊脂糖、殼聚糖、果膠等。合成高分子材料有聚苯乙烯、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸（酯）及其共聚物、聚酰胺類、聚苯胺及硅烷等。這些材料可單獨用，也可復(fù)合使用。磁性微球表面可根據(jù)需要賦予不同的功能基團(如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、—環(huán)氧基、—CHCl等)，使其表現(xiàn)具有疏水-親水、非極性-極性、帶正電荷-帶負(fù)電荷等不同物理性質(zhì)。同時具有磁響應(yīng)性，在外磁場作用下具有磁導(dǎo)向性。導(dǎo)電聚合磁微球聚合磁微球?qū)Υ判晕⑶虻囊螅毫骄鶆?、大小合適、比表面積大、吸附力強、具有強的超順磁性、懸浮均勻穩(wěn)定性好、不易聚集沉淀、表面具有多種活性基團、理化性質(zhì)穩(wěn)定、具有較好生物相容性、對細(xì)胞、機體、活性物質(zhì)損傷小。由于環(huán)氧基、氯甲基功能基團非常活躍，不需連接其他活性基團即可與生物配基（如抗體、抗原等）偶聯(lián)，及其他基團的微型磁珠在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)方面應(yīng)用較為廣泛。三磁性微球的制備

磁性微球制備方法：共沉淀法、懸浮聚合法、乳液聚合法、分散聚合法、包埋法及原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法等。1.共沉淀法

金屬離子在堿性條件下與高分子共沉淀，一步反應(yīng)生成磁性高分子微球的方法。2Fe3++Fe2++8OH→Fe3O4+4H2OPich[等先通過單體聚合反應(yīng)得到PS-AAEM顆粒分散劑，再把配制好的Fe3+、Fe2+溶液加入聚苯乙烯（PS）-乙酰乙酸基甲基丙烯酸乙酯（AAEM）顆粒的分散劑中，然后滴加NH3·H2O。Fe3O4粒子在PS-AAEM表面沉積，制得PS-AAEM為核心、Fe3O4粒子為殼層的磁性微球。微球的磁性能通過改變FeCl2和FeCl3的濃度或改變PS-AAEM核心的尺寸來控制。Xia等把一定配比的FeCl2、FeCl3與葡聚糖（dextranT-10）共混，然后滴加NH3·H2O，在超聲連續(xù)作用下水浴加熱，制得以Fe3O4為核、dextran為殼的磁性微球。楊玉東等把一定配比的FeCl3·6H2O、FeCl2·6H2O與配體（如二亞乙基三胺五乙酸（DTPA）或乙二氨四乙酸（EDTA）等）組成的混合液體加入到75℃的葡聚糖T-10溶液中，并快速滴加NH3·H2O，制備了葡聚糖為殼、氧化鐵為核的磁性微球。吸取上清液:取1支無菌加長吸管，從免疫磁珠聚集物對側(cè)深人液面，輕輕吸走上清液。是通過一定方法將磁性無機粒子與有機高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的體積在幾納米到幾十微米之間的復(fù)合微球。具有均勻性、超順磁性及保護性外殼，由磁性載體微球和免疫配基結(jié)合而成，表面具有專一親和性和吸附作用。方法簡便，可用于土壤中細(xì)菌芽孢DNA的提取，不能徹底除去PCR抑制劑。除在菌落周圍有一環(huán)外.2anti-Fab抗體法：用anti-Fab抗體與磁珠偶聯(lián)抗體競爭目的細(xì)胞，是磁珠與目的細(xì)胞解離，用磁場除去游離磁珠，即可獲得非標(biāo)記細(xì)胞。ComparationofseveralDNAextractionmethodsIMB技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊應(yīng)用前景，它可以檢測腫瘤細(xì)胞，如骨髓中腫瘤細(xì)胞的檢測、淋巴結(jié)中腫瘤細(xì)胞的檢測。合成高分子材料有聚苯乙烯、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸（酯）及其共聚物、聚酰胺類、聚苯胺及硅烷等。Datta等利用副溶血性弧菌ATCC17802制備針對極鞭毛的單克隆抗體,這將有益于快速檢測從環(huán)境來源的副溶血性弧菌。幾種DNA分離方法的比較吸取50μL免疫磁珠懸液.每個樣品更換1支加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染。十二免疫磁珠在食品安全檢測中的應(yīng)用結(jié)果用該方法對甘草藥材和中成藥中甘草蛋白抗原檢測，檢測靈敏度10ng／mL。制備方法：先制備磁性微球，然后將磁性微球分散于抗體配機溶液中使磁珠與抗體充分吸附結(jié)合，然后分離免疫磁珠分散于緩沖溶液中可以使用。在CT-SMAC平板上，典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色;發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色;在改CHROMagar

O157弧菌顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色一紫紅色，邊緣無色或淺灰色。結(jié)果用此磁珠分離后，只有金黃葡萄球菌的濃度有明顯的降低。當(dāng)目的細(xì)胞含量特別低，無法直接進(jìn)行陽性分選時，可采用陰性分選發(fā)先出去其他雜細(xì)胞，當(dāng)目的細(xì)胞富集到一定程度時在采用陽性分選發(fā)篩選目的細(xì)胞。利用IMB可有效地吸附、濃縮大量樣品中的少量病原微生物,IMB為難于從環(huán)境及食品中分離病原性副溶血性弧菌的問題提供一種有效手段。2聚合法制備磁性微球過程異相聚合法包括分散聚合、乳液聚合、懸浮液聚合三種。該法是將磁性粒子用表面改性劑、偶聯(lián)劑、引發(fā)劑等處理后分散到含有聚合物單體的溶劑中進(jìn)行聚合反應(yīng)。通常以磁性粒子為活性中心進(jìn)行單體聚合。四磁性微球分離技術(shù)MACS(MagneticActivatedCellSorting)

是將免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)結(jié)合為一體，利用磁性微球表面功能基團的專一親和特性或多孔吸附特性吸附特定組分，然后用外力磁場作用將吸附了特定物質(zhì)的磁珠加以分離，再經(jīng)過洗脫磁珠上吸附的目標(biāo)物質(zhì)的一種新型分離技術(shù)，具有廣泛的用途。

幾種DNA

分離方法的比較ComparationofseveralDNAextractionmethods方法

傳統(tǒng)法鰲合樹脂法玻璃粉法磁珠法免疫親和法DNA提取酚/氯仿等溶劑抽提Chelex100樹脂吸附玻璃粉吸附離心分離磁珠吸附磁場分離抗原抗體反應(yīng)磁場分離適用范圍大多數(shù)標(biāo)本DNA提取純化培養(yǎng)及各種臨床標(biāo)本土壤標(biāo)本冰凍、陳舊組織冰凍、陳舊組織，樣本含量很少的標(biāo)本方法評價DNA純度高、含量多，但較費時，步驟繁瑣，用有機溶劑，有損操作者健康?？捎糜谂囵B(yǎng)標(biāo)本和各種臨床標(biāo)本細(xì)菌及部分病毒核酸的提取。方法簡便，可用于土壤中細(xì)菌芽孢DNA的提取，不能徹底除去PCR抑制劑。簡單、快速，整個過程不到2h，可獲得較純DNA。適于少量樣本。DNA純度高，含量多，適于樣本含量少標(biāo)本，單克隆抗體的制備是關(guān)鍵。五免疫磁珠免疫磁珠（IMB）也稱免疫磁性微球，是在磁性微球表面偶聯(lián)上免疫配基的一種磁性微球，是將磁性微球技術(shù)和免疫學(xué)相結(jié)合的特殊磁性微球。六免疫磁珠的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)免疫磁珠核心為順磁性粒子，核心外層包裹一層高分子材料，最外層是免疫配基。免疫配基

免疫配基通過生物高分子的功能基團結(jié)合到磁性載體微球上形成免疫磁珠。由于載體微球制備材料和方法不同，其表現(xiàn)出的物理性質(zhì)也不同，從而可結(jié)合不同的免疫配基，如抗原、抗體、凝集素、DNA和RNA等。配基必須具有生物專一性的特點，而且載體微球與配基結(jié)合要不影響或改變配基原有的生物學(xué)特性，保證磁珠的特殊識別功能。免疫磁珠的性質(zhì)具有均勻性、超順磁性及保護性外殼，由磁性載體微球和免疫配基結(jié)合而成，表面具有專一親和性和吸附作用。免疫磁珠大小和形狀具有均一性，可使靶物質(zhì)迅速有效地結(jié)合到磁珠上，可使新生成復(fù)合物在磁場中具有相同磁響應(yīng)性，且行為一致。磁珠球形結(jié)構(gòu)可消除與不規(guī)則形狀粒子間的非特異性結(jié)合，順磁性可使磁珠置于磁場時顯示其磁性，并做定向移動，從磁場移出時磁性消除，磁珠分散，可方便地進(jìn)行分離和磁性導(dǎo)向。保護性殼可防止磁性內(nèi)核漏出或被載液腐蝕；免疫配基可專一性結(jié)合反應(yīng)體系中相應(yīng)的抗原、抗體、核酸等生物活性物質(zhì)。七免疫磁株的特點磁性微球與免疫配基結(jié)合牢固。不影響或改變免疫配基原有的生物特性和特異性。免疫微球的識別專一性。在磁場中具有順磁性，離開磁場磁性消失，易于分散。

由于聚苯乙烯磁性微球強度高、表面易進(jìn)行化學(xué)維修飾，是比較理性的制造免疫磁珠的材料。八免疫磁珠的分類

根據(jù)磁珠在磁場中受力大小及磁珠體積，分為小磁珠和大磁珠。大磁珠：1-5um，粒徑較大、懸浮穩(wěn)定性差、易沉淀、比表面積小、吸附能力低、吸附活性配基少、對細(xì)胞影響大，特別是陽性分選時需將磁珠與細(xì)胞解離后方可進(jìn)行下一步實驗。但磁力強，無需特殊分離柱即可實現(xiàn)樣品分離，分離速度快、過程簡單、成本低。小磁珠：50nm以下，粒徑較小、懸浮穩(wěn)定、比表面積大、表面吸附活性配基多，只有細(xì)胞體積的萬分之一，對細(xì)胞表型和功能影響小，不影響細(xì)胞的后續(xù)培養(yǎng)。但磁力弱，需特殊分離柱才能實現(xiàn)樣品分離，分離速度慢，成本高九免疫磁珠的制備免疫磁珠的制備是將磁性微球和抗體等配基結(jié)合而成。磁性微球與抗體的連接方式有共價結(jié)合和吸附結(jié)合兩種方式。共價結(jié)合：依靠磁珠表面的活性基團如-CHO、-COOH等與抗體Fab段上的-NH2共價反應(yīng)和結(jié)合吸附結(jié)合：依靠磁珠巨大的比表面與抗體見得非特異性吸附而結(jié)合。共價結(jié)合的牢固度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于吸附結(jié)合牢固度。制備方法：先制備磁性微球，然后將磁性微球分散于抗體配機溶液中使磁珠與抗體充分吸附結(jié)合，然后分離免疫磁珠分散于緩沖溶液中可以使用。十免疫磁珠分離技術(shù)免疫磁珠(immunomagneticbead,IMB)分離技術(shù)：是一種以特異的抗原抗體反應(yīng)為基礎(chǔ)的免疫學(xué)磁性微球檢測和分離技術(shù)。它是以抗體包被的微球磁珠為載體，通過抗體與反應(yīng)介質(zhì)中特異性抗原結(jié)合，形成抗原—抗體復(fù)合物，此復(fù)合物在外加磁場作用下發(fā)生定向移動，從而達(dá)到分離抗原的目的。

基本原理：磁性微球經(jīng)過一定處理后,將抗體結(jié)合到磁珠上,形成免疫磁性微球（標(biāo)記磁珠）,標(biāo)記磁珠的抗體與特異性抗原結(jié)合形成抗原—微球復(fù)合物,該復(fù)合物在磁場中具有與其它組分不同的磁響應(yīng)性,在磁力作用下,該復(fù)合物發(fā)生力學(xué)移動,從而達(dá)到分離抗原的目的。以細(xì)胞分離為例圖解免疫磁珠技術(shù)的原理免疫磁珠標(biāo)記方法1直接磁珠和直接標(biāo)記法通過物理吸附和共價鍵結(jié)合直接將特意性抗體與磁珠耦合，然后再與相應(yīng)細(xì)胞結(jié)合，形成細(xì)胞-抗原-抗體-磁珠復(fù)合物，在外磁場下直接分離目的細(xì)胞。快速、簡單、特異性和細(xì)胞得率高，靈敏度低，需制備相應(yīng)的偶聯(lián)抗體磁珠。2簡介磁珠和間接標(biāo)記法使用anti-lg等與磁珠偶聯(lián)，通過Anti-lg再使磁珠與二抗體偶聯(lián)，分離細(xì)胞時，先使細(xì)胞與一抗特異性結(jié)合，然后在與一抗標(biāo)記磁珠結(jié)合，形成細(xì)胞-1抗-2抗-anti-lg-磁珠復(fù)合體，在外磁場下分離目的細(xì)胞的方法。該法增加了細(xì)胞的洗滌步驟，特異性也會降低。該法一般用于①沒有直標(biāo)磁珠抗體②需用幾種抗體去除多種細(xì)胞③目的細(xì)胞上特異性抗原分子表達(dá)水平低。每個樣品更換1支加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染。免疫磁珠與其它檢測手段的聯(lián)用同時還能捕獲受損傷靶細(xì)菌。免疫磁珠可借助親和素——生物素系統(tǒng)與非蛋白結(jié)合（如各種DNA、RNA大分子）。在磁場中具有順磁性，離開磁場磁性消失，易于分散。方法簡便，可用于土壤中細(xì)菌芽孢DNA的提取，不能徹底除去PCR抑制劑。磁性微球表面可根據(jù)需要賦予不同的功能基團(如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、—環(huán)氧基、—CHCl等)，使其表現(xiàn)具有疏水-親水、非極性-極性、帶正電荷-帶負(fù)電荷等不同物理性質(zhì)。接種于TSA-YE瓊脂平板，純培養(yǎng)由于環(huán)氧基、氯甲基功能基團非常活躍，不需連接其他活性基團即可與生物配基（如抗體、抗原等）偶聯(lián)，及其他基團的微型磁珠在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)方面應(yīng)用較為廣泛。且在其周圍形成一個暈環(huán)。免疫磁珠技術(shù)在其他領(lǐng)域的應(yīng)用制備方法：先制備磁性微球，然后將磁性微球分散于抗體配機溶液中使磁珠與抗體充分吸附結(jié)合，然后分離免疫磁珠分散于緩沖溶液中可以使用。coliO157∶H7，滿足流行病學(xué)的研究要求和提高控制力度。2）分離

將Eppendorf管固定在磁架的管孔中。將Eppendorff管按樣品和質(zhì)控菌株進(jìn)行編號，每個樣品使用1支Eppendorff管，然后插人到磁板架上。在菌落中心部位的深層也形成黑點。是通過一定方法將磁性無機粒子與有機高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的體積在幾納米到幾十微米之間的復(fù)合微球。李斯特氏菌在PALCAM瓊脂平板上與在()XA瓊脂平板上菌落相似。構(gòu)成磁性微球的高分子材料有天然高分子和合成高分子物質(zhì)。幾種DNA分離方法的比較1800輕緩擺動磁架5次--6次,使免疫磁珠聚集到磁極。MACS微珠直標(biāo)微珠多選微珠間標(biāo)微珠免疫磁珠分選方法陽性分選：運用特異性抗體偶聯(lián)磁珠直接從細(xì)胞混合物中分離目的細(xì)胞的分選方法稱為positiveselection.陽性分選中磁珠標(biāo)記的細(xì)胞即為目的細(xì)胞。該法簡單、快速、細(xì)胞得率和純度較高。如采用anti-CD14磁珠分選CD14+巨噬細(xì)胞。陰性分選：用抗體偶聯(lián)磁珠去除無關(guān)細(xì)胞，使目的細(xì)胞得以純化和分離的分選方法稱為negativeselection.陰性分選中磁珠標(biāo)記的細(xì)胞為非目的細(xì)胞。如分離CD4+T細(xì)胞時，由于沒有專用的CD4+T細(xì)胞分選磁珠，可通過anti-CD8、anti-B220、anti-CD49b、anti-CD11b、anti-Ter119標(biāo)記磁珠去除CD8+T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞等，最終而獲得較純的CD4+T細(xì)胞。因此陰性分選法適用于：①從細(xì)胞混合物中去除某種類型細(xì)胞。如腫瘤細(xì)胞。②缺乏針對目的細(xì)胞篩選的特異性抗體磁珠時。③抗體和目的細(xì)胞結(jié)合可能誘導(dǎo)細(xì)胞活化，影響后續(xù)細(xì)胞功能分析時。復(fù)合分選：將陰性分選和陽性分選相結(jié)合的分選方法。當(dāng)目的細(xì)胞含量特別低，無法直接進(jìn)行陽性分選時，可采用陰性分選發(fā)先出去其他雜細(xì)胞，當(dāng)目的細(xì)胞富集到一定程度時在采用陽性分選發(fā)篩選目的細(xì)胞。免疫磁珠與細(xì)胞解離1過夜培養(yǎng)法：常用方法。將結(jié)合磁珠細(xì)胞置于10%胎牛血清培養(yǎng)基中37℃5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16-24h，磁珠可從細(xì)胞上脫落，再通過磁場除去游離磁珠，即可獲得裸細(xì)胞。2anti-Fab抗體法：用anti-Fab抗體與磁珠偶聯(lián)抗體競爭目的細(xì)胞，是磁珠與目的細(xì)胞解離，用磁場除去游離磁珠，即可獲得非標(biāo)記細(xì)胞。3酶解法：通過木瓜蛋白酶和唾液蛋白酶使磁珠與細(xì)胞解離，再通過磁場除去游離磁珠，獲得裸細(xì)胞。免疫磁珠分離裝置

免疫磁珠分離裝置由超強磁鐵分離器和分離柱組成。磁鐵和分離柱的型號多樣，配合0.5ml、1.5ml微量離心管，15ml及50ml離心管或試管，和96孔或384孔培養(yǎng)板中樣品的分離，以滿足不同試驗要求。十一免疫磁珠分離技術(shù)的應(yīng)用分離抗原抗體分離蛋白和多肽分離多糖物質(zhì)分離DNA和RNA分離細(xì)胞和病毒靶向釋藥系統(tǒng)的載運食品有害微生物分析與檢測磁珠法分離抗體、抗原、蛋白、多肽、多糖、DNA、RNA操作過程示意圖每個樣品換用1支無菌加長吸管。35℃士1℃培養(yǎng)22h-48h。1直接磁珠和直接標(biāo)記法吸取50μL免疫磁珠懸液.金屬離子在堿性條件下與高分子共沉淀，一步反應(yīng)生成磁性高分子微球的方法。結(jié)果用該方法對甘草藥材和中成藥中甘草蛋白抗原檢測，檢測靈敏度10ng／mL。報告加20μL準(zhǔn)備好的免疫磁珠。以細(xì)胞分離為例圖解免疫磁珠技術(shù)的原理免疫磁珠分離裝置由超強磁鐵分離器和分離柱組成。磁性核材料多為Fe、Co、Pt、Ni等金屬及其氧化物。Notzon等用IMB-熒光PCR檢測肉類中的沙門氏菌，實驗包括非選擇性增菌、免疫磁珠分離、DNA提取及PCR擴增，12～13h即可完成檢測過程，IMB-熒光PCR在檢測自然感染肉類和人工感染肉類都具有較高的敏感性和特異性。2）篩選

李斯特氏菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上菌落為藍(lán)色.免疫磁珠可以看作是親和層析技術(shù)中的微型配基，體，在基質(zhì)上固相化抗體或抗原后，形成特異性吸附后，再進(jìn)行磁性親和抽屜不需離心過濾，用于分離和純化相應(yīng)的生物大分子。利用IMB可有效地吸附、濃縮大量樣品中的少量病原微生物,IMB為難于從環(huán)境及食品中分離病原性副溶血性弧菌的問題提供一種有效手段。且在其周圍形成一個暈環(huán)。簡單、快速，整個過程不到2h，可獲得較純DNA。在檢測時間方面可將常規(guī)檢測方法中的72小時檢測周期縮短至40小時，而且能有效減輕過程交叉污染;吸取上清液:取1支無菌加長吸管，從免疫磁珠聚集物對側(cè)深人液面，輕輕吸走上清液。1%，且50%的巨核細(xì)胞具有生物活性，分離的巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)保持完整，可用于巨核細(xì)胞的分子生物學(xué)等方面研究。μMACSVitalvirusHiv分離試劑盒分離標(biāo)記造血細(xì)胞表面的Hiv-1病毒CD44H異型細(xì)胞免疫磁珠標(biāo)記細(xì)胞示意圖免疫磁珠分離細(xì)胞及病毒示意圖十二免疫磁珠在食品安全檢測中的應(yīng)用免疫磁珠對病毒細(xì)胞具有特異選擇性，因此能用于食品有害微生物的檢測。免疫磁珠技術(shù)與常規(guī)檢驗方法相比具有檢測迅速、有選擇性分離目的微生物，有效減少背景干擾，提高了精準(zhǔn)性。同時還能捕獲受損傷靶細(xì)菌。目前，免疫磁珠技術(shù)已廣泛用于食品樣品中致病微生物的檢測。大腸桿菌O157的檢測傳統(tǒng)分離E.coliO157∶H7所采用的直接分離法存在著鑒別力差、抑制雜菌能力弱、耗時長、工作量大等缺點。采用免疫磁珠技術(shù)，能夠快速地從各種食品樣品中分離富集E.coliO157∶H7，滿足流行病學(xué)的研究要求和提高控制力度?，F(xiàn)在這種免疫磁珠的方法已經(jīng)被英國公共健康服務(wù)實驗室認(rèn)定為標(biāo)準(zhǔn)的分離方法，我國也已將免疫磁珠法對大腸桿菌O157的檢測納入國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T4789.36-2008）和出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN/T1059.5-2006)。已有市售的專用免疫磁珠銷售。檢樣25g(mL)+225mL改良EC肉湯（mEC+n），均質(zhì)225mL免疫磁珠捕獲涂布CT-SMAC平板和改良CHROMagarO157弧菌顯色瓊脂平板挑取可疑菌落5個~10個，氧化酶陰性，革蘭氏陰性桿菌接種TSIMUG-LST陽性GB/T4789.36-2008免疫磁珠捕獲法檢測O157∶H7程序陰性血清學(xué)試驗非O157細(xì)菌生化試驗報告↓↓↓↓↓↓↓↓36±1oC18h~24h36±1oC36±1oC18h~24h18h~24h1增菌

2免疫磁珠捕獲與分離

1.將Eppendorff管按樣品和質(zhì)控菌株進(jìn)行編號，每個樣品使用1支Eppendorff管，然后插人到磁板架上。在漩渦混合器上輕輕振蕩E.coliO157免疫磁珠溶液后，用開蓋器打開每支Eppendo-rff管的蓋子，每管加人20μLE.coli0157免疫磁珠懸液。

2.取mEC+n肉湯增菌培養(yǎng)物1mL，加人到Eppendorff管中，蓋上蓋子，然后輕微振蕩10s。每個樣品更換1支加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染。

具體操作該法增加了細(xì)胞的洗滌步驟，特異性也會降低。其中Fe3O4應(yīng)用最多。檢樣免疫磁珠技術(shù)與常規(guī)檢驗方法相比具有檢測迅速、有選擇性分離目的微生物，有效減少背景干擾，提高了精準(zhǔn)性。3酶解法：通過木瓜蛋白酶和唾液蛋白酶使磁珠與細(xì)胞解離，再通過磁場除去游離磁珠，獲得裸細(xì)胞。2Fe3++Fe2++8OH→Fe3O4+4H2O共價結(jié)合的牢固度遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于吸附結(jié)合牢固度?，F(xiàn)在這種免疫磁珠的方法已經(jīng)被英國公共健康服務(wù)實驗室認(rèn)定為標(biāo)準(zhǔn)的分離方法，我國也已將免疫磁珠法對大腸桿菌O157的檢測納入國家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T4789.吸取50μL免疫磁珠懸液.Hara-Kudo等利用IMS和顯色培養(yǎng)基分離貝類中產(chǎn)TDH的副溶血性弧菌O3:K6。合成高分子材料有聚苯乙烯、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸（酯）及其共聚物、聚酰胺類、聚苯胺及硅烷等。IMB技術(shù)檢測沙門氏菌的優(yōu)點②缺乏針對目的細(xì)胞篩選的特異性抗體磁珠時。Hudson等研究表明，將免疫磁珠技術(shù)與PCR結(jié)合，24h內(nèi)即可檢出火腿中的單增李斯特菌。1mL轉(zhuǎn)種10mLFB2増菌液（35℃，24h士1h）加20μL準(zhǔn)備好的免疫磁珠。每個樣品更換1支加樣吸頭，質(zhì)控菌株必須與樣品分開進(jìn)行，避免交叉污染。制備方法：先制備磁性微球，然后將磁性微球分散于抗體配機溶液中使磁珠與抗體充分吸附結(jié)合，然后分離免疫磁珠分散于緩沖溶液中可以使用。除在菌落周圍有一環(huán)外.通常以磁性粒子為活性中心進(jìn)行單體聚合。

3.結(jié)合:在18℃~30℃環(huán)境中，將上述Eppendorff管連同磁板架放在DynalMXl樣品混合器上轉(zhuǎn)動或用手輕微轉(zhuǎn)10min，使E.coliO157與免疫磁珠充分接觸。4.捕獲:將磁板插人到磁板架中濃縮磁珠。在3min內(nèi)不斷地傾斜磁板架，確保懸液中與蓋子上的免疫磁珠全部被收集起來，此時，在Eppendorff管壁中間明顯可見圓形或橢圓形棕色聚集物。

5.吸取上清液:取1支無菌加長吸管，從免疫磁珠聚集物對側(cè)深人液面，輕輕吸走上清液。當(dāng)吸到液面通過免疫磁珠聚集物時，應(yīng)放慢速度，以確保免疫磁珠不被吸走。如吸取的上清液內(nèi)含有磁珠，則應(yīng)將其放回到Eppendorff管中，并重復(fù)4步驟。每個樣品換用1支無菌加長吸管。6.洗滌:洗滌免疫磁珠混合物，重復(fù)上述步驟

4~6和4~5。7.免疫磁珠懸浮:將免疫磁珠重新懸浮在100μLPBS-Tween20洗液中。8.涂布平板:用漩渦混合器將免疫磁珠混勻，用加樣器各取50μL免疫磁珠懸液分別轉(zhuǎn)移至CT-SMAC平板和改良CHROMagarO157弧菌顯色瓊脂平板一側(cè)，再用無菌涂布棒將免疫磁珠涂布平板的一半，用接種環(huán)劃線接種平板的另一半。待瓊脂表面水分完全吸收后，翻轉(zhuǎn)平板，于36℃士10℃培養(yǎng)18---24h。菌落識別在CT-SMAC平板上，典型菌落為不發(fā)酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色;發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色;在改CHROMagar

O157弧菌顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色一紫紅色，邊緣無色或淺灰色。

初步生化試驗:在CT-SMAC和改良CHROMagar

O157弧菌顯色瓊脂平板上挑取5個~10個典型或可疑菌落，分別接種TSI瓊脂，同時接種MUG-LST肉湯，于36℃士1℃培養(yǎng)18

h~24

h。必要時進(jìn)行氧化酶試驗和革蘭氏染色。在TSI瓊脂中，典型菌株為斜面與底層均呈陽性反應(yīng)呈黃色，產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣，不產(chǎn)生硫化氫(H2S)。置MUG-LST肉湯管于長波紫外燈下觀察，無熒光產(chǎn)生者為陽性結(jié)果，有熒光產(chǎn)生者為陰性結(jié)果;對分解乳糖且無熒光的菌株，在營養(yǎng)瓊脂平板上分純，于36℃士1℃培養(yǎng)18

h~24

h，并進(jìn)行鑒定。Fratamico等將兔抗E.coliO157∶H7多克隆抗體連接到羊抗兔IgG包被的磁珠上，從食物增菌培養(yǎng)液中分離O157∶H7菌株，再將帶菌的磁珠接種到培養(yǎng)基上，加入熒光素標(biāo)記的O157∶H7抗血清，在熒光顯微鏡下觀察，此法敏感性為10cfu/mL增菌培養(yǎng)液。Decory等建立了免疫磁珠-免疫脂質(zhì)體（IMB/IL）熒光試驗方法，可在8h內(nèi)快速檢測出多種液態(tài)樣品（水樣、蘋果汁、蘋果酒）中低至1cfu/mL的E.coliO157∶H7，而傳統(tǒng)微生物學(xué)方法不能從陰性樣本中區(qū)分出E.coliO157∶H7感染樣本。單核細(xì)胞增生李斯特菌的檢測

傳統(tǒng)的單增李斯特菌檢測方法檢測周期長，約5～14d，步驟繁瑣且靈敏度低，而IMB技術(shù)的優(yōu)點在于在較低的菌液濃度時也可以通過免疫磁珠的富集作用進(jìn)行檢測，縮短了檢測時間并進(jìn)一步降低了單增李斯特菌的檢測限。

2008年，我國將免疫磁珠檢測單核細(xì)胞增生李斯特菌的方法納入了出入境檢驗檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中(SN/T0184.3-2008)。檢樣25g(mL)對225mLFB1増菌液（30℃士1℃，24h士1h）1mL轉(zhuǎn)種10mLFB2増菌液（35℃，24h士1h）通過免疫磁珠捕獲李斯特菌，然后再用滅菌緩沖液洗滌用0.1mL的滅菌緩沖液重新制成懸液吸取50uL免疫磁珠懸液劃線于CHROMagar顯色培養(yǎng)基，OXA/PALCAM瓊脂平板（35℃+1℃,24h~28h)各挑選5個典型菌落接種于TSA-YE瓊脂平板，純培養(yǎng)鑒定和確認(rèn)試驗單增李斯特菌的檢測程序與方法1樣品制備2增菌3免疫磁珠分離((IMS）1)免疫捕獲

混增菌培養(yǎng)液.沉淀所有的粗糙食物殘渣.從增菌培養(yǎng)液中移取1mL上層液體(要盡可能避免移取到食物顆粒和脂肪顆粒)加人Eppendorf管中.加20μL準(zhǔn)備好的免疫磁珠。在旋渦混合器上混合該懸液。2）分離

將Eppendorf管固定在磁架的管孔中。1800輕緩擺動磁架5次--6次,使免疫磁珠聚集到磁極。小心地打開磁架上的Eppendorf管管蓋,從磁極對面一側(cè)慢慢吸出液體，注意不要接觸管壁上的磁珠。每一個樣品換一次槍頭;加1

mI滅菌的PBS

，并重新蓋好蓋子.將磁極從支架上移走，1800輕緩擺動磁架5次一6次,使管內(nèi)各成分混合,后重新將磁極放回到支架上。重復(fù)該清洗步驟幾次。將離心管從磁性分離器上移開.并加100μL滅菌的PBS到管中，重懸磁珠。如實驗室沒有磁性分離器，可以用手搖代替.

4.分離培養(yǎng)1）分離培養(yǎng)吸取50μL免疫磁珠懸液.加到顯色培養(yǎng)基及任一選擇性培養(yǎng)基OXA、PALCAM瓊脂平板上.用無菌接種環(huán)劃線.35℃士1℃培養(yǎng)22h-48h。

2）篩選

李斯特氏菌在CHROMagar顯色培養(yǎng)基上菌落為藍(lán)色.且在其周圍形成一個暈環(huán)。李斯特氏菌在OXA瓊脂平板上生長22

h后菌落呈現(xiàn)黑色.直徑為1mm.在其周圍形成一個黑色環(huán)。培養(yǎng)48h，菌落仍呈黑色.直徑2mm

--3mm.除在菌落周圍有一環(huán)外.在菌落中心部位的深層也形成黑點。李斯特氏菌在PALCAM瓊脂平板上與在()XA瓊脂平板上菌落相似。在CHROMagar顯色培養(yǎng)基及OXA或PALCAM瓊脂平板上挑取5個或更多可疑菌落.接種于TSA-YE瓊脂平板上.純培養(yǎng)后進(jìn)鑒定。

5.鑒定和確認(rèn)Skjerve等通過包被單克隆抗體的磁珠從不同食物樣品中分離李斯特菌，采用將磁珠接種到瓊脂平板培養(yǎng)的方法進(jìn)行菌株鑒定，此法的敏感性為102～104cfu/mL樣品。Hudson等研究表明，將免疫磁珠技術(shù)與PCR結(jié)合，24h內(nèi)即可檢出火腿中的單增李斯特菌。沙門氏菌的檢測Notzon等用IMB-熒光PCR檢測肉類中的沙門氏菌，實驗包括非選擇性增菌、免疫磁珠分離、DNA提取及PCR擴增，12～13h即可完成檢測過程，IMB-熒光PCR在檢測自然感染肉類和人工感染肉類都具有較高的敏感性和特異性。Blackburn等將用生物素標(biāo)記的抗沙門菌多價多克隆抗體連接到鏈霉親和素包被的磁珠上，以此試劑檢測從不同食物中提取的活沙門菌。此法的敏感性可達(dá)105cfu/g食物，總的檢測時間從5d減少至1~2d。復(fù)合分選：將陰性分選和陽性分選相結(jié)合的分選方法。2聚合法制備磁性微球過程以細(xì)胞分離為例圖解免疫磁珠技術(shù)的原理1%，且50%的巨核細(xì)胞具有生物活性，分離的巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)保持完整，可用于巨核細(xì)胞的分子生物學(xué)等方面研究。當(dāng)吸到液面通過免疫磁珠聚集物時，應(yīng)放慢速度，以確保免疫磁珠不被吸走。35℃士1℃培養(yǎng)22h-48h。IMB技術(shù)檢測沙門氏菌的優(yōu)點捕獲:將磁板插人到磁板架中濃縮磁珠。先將PCR雙鏈產(chǎn)物與生物素化的磁珠混合使兩者結(jié)合，然后進(jìn)行堿性變性處理，使PCR雙股DNA成為單股DNA，可直接快速用于檢測PCR樣品中DNA或RNA分子并可進(jìn)行測序。合成高分子材料有聚苯乙烯、聚乙烯亞胺、聚乙烯醇、聚丙烯酸（酯）及其共聚物、聚酰胺類、聚苯胺及硅烷等。從增菌培養(yǎng)液中移取1mL上層液體(要盡可能避免移取到食物顆粒和脂肪顆粒)加人Eppendorf管中.將Eppendorff管按樣品和質(zhì)控菌株進(jìn)行編號，每個樣品使用1支Eppendorff管，然后插人到磁板架上。捕獲:將磁板插人到磁板架中濃縮磁珠。通過免疫磁珠捕獲李斯特菌，然后再用滅菌緩沖液洗滌免疫磁珠分離細(xì)胞及病毒示意圖此法的敏感性可達(dá)105cfu/g食物，總的檢測時間從5d減少至1~2d。簡單、快速，整個過程不到2h，可獲得較純DNA。Blackburn等將用生物素標(biāo)記的抗沙門菌多價多克隆抗體連接到鏈霉親和素包被的磁珠上，以此試劑檢測從不同食物中提取的活沙門菌。檢樣免疫磁珠可以看作是親和層析技術(shù)中的微型配基，體，在基質(zhì)上固相化抗體或抗原后，形成特異性吸附后，再進(jìn)行磁性親和抽屜不需離心過濾，用于分離和純化相應(yīng)的生物大分子。IMB技術(shù)檢測沙門氏菌的優(yōu)點適用于各類食品基質(zhì)中的沙門氏菌的快速檢測，能快速有效富集食品基質(zhì)中的目標(biāo)病原菌，且有良好的靈敏度和特異性，檢測限可達(dá)到1—10cfu/25g;在檢測時間方面可將常規(guī)檢測方法中的72小時檢測周期縮短至40小時，而且能有效減輕過程交叉污染;篩選結(jié)果既可以與常規(guī)的細(xì)菌生化和血清學(xué)聯(lián)用，也可以和顯色培養(yǎng)基、熒光PCR以及微生物全自動鑒定儀器等方法聯(lián)用，為食源性致病菌檢測和鑒定提供有效快速篩選技術(shù)。金黃色葡萄球菌的檢測陳伶俐等將人IgG結(jié)合到磁珠上，用該磁珠對樣品中的金黃色葡萄球菌進(jìn)行快速分離檢驗。取適量免疫磁珠，加入金黃葡萄球菌菌液中，磁場下分離磁珠，將分離前后的菌液及磁珠涂平板，并用大腸桿菌、白葡萄球菌等作對照。結(jié)果用此磁珠分離后，只有金黃葡萄球菌的濃度有明顯的降低。對磁珠所涂平板的菌落進(jìn)行鑒定，證明為金黃葡萄球菌。應(yīng)用此法分離檢驗此菌，富集速度快，靈敏度高，效果好。劉琳琳利用自制的金屬螯合免疫磁珠來檢測食品中金黃色葡萄球菌，該法能夠在30min內(nèi)富集檢測金黃色葡萄球菌且檢測低限可達(dá)100CFU，同時磁珠可保持活性達(dá)3周以上。副溶血性弧菌的檢測Hara-Kudo等利用IMS和顯色培養(yǎng)基分離貝類中產(chǎn)TDH的副溶血性弧菌O3:K6。Datta等利用副溶血性弧菌ATCC17802制備針對極鞭毛的單克隆抗體,這將有益于快速檢測從環(huán)境來源的副溶血性弧菌。張凡非等利用IMS分離環(huán)境及食品中產(chǎn)生TDH副溶血性弧菌，分別從1份海水、1份海泥和3份蛤肉中檢出了神奈川現(xiàn)象陽性,并產(chǎn)生耐熱溶血毒素的副溶血性弧菌,血清型為03:K6。IMB技術(shù)檢測副溶血性弧菌的優(yōu)點該方法與一般的細(xì)菌培養(yǎng)分離法相比,極大地提高了環(huán)境樣品及食品中病原性副溶血性弧菌的檢出率。利用IMB可有效地吸附、濃縮大量樣品中的少量病原微生物,IMB為難于從環(huán)境及食品中分離病原性副溶血性弧菌的問題提供一種有效手段。其他致病菌的檢測志賀氏菌例：Islam等應(yīng)用O抗原特異性單克隆抗體包被免疫磁珠，快速檢測糞便中的疾痢志賀菌和福氏志賀菌。分離出的志賀菌株用PCR擴增方法進(jìn)行鑒定。此種免疫磁珠分離與PCR聯(lián)合法檢測志賀菌，較傳統(tǒng)的培養(yǎng)法敏感、快速(7h)。小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌例：Kapperud等用抗小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌血清抗體包被磁性微球，從食物和水樣中分離，并能將小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌與假結(jié)核耶爾森氏菌和非致病性耶爾森氏菌區(qū)別開來。十三免疫磁珠與其它檢測手段的聯(lián)用免疫磁珠與PCR的聯(lián)用

由于PCR技術(shù)靈敏度較低，將免疫磁珠技術(shù)和PCR技術(shù)相結(jié)合，建立了新的檢測系統(tǒng)——磁免疫PCR技術(shù)。例如：它以李斯特氏菌單抗包被磁珠，對樣品進(jìn)行前處理，將菌進(jìn)行富集裂解，再以iap基因的保守區(qū)域設(shè)計引物進(jìn)行PCR，結(jié)果顯示該方法具有良好特異性，而且十分靈敏。免疫磁珠與ELISA的聯(lián)用

利用磁性微球，并以兔抗甘草蛋白IgG抗體致敏，制備特異性捕獲甘草特征蛋白的免疫磁性微球。以生物素標(biāo)記抗體為示蹤抗體，結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)親和素建立ELISA檢測系統(tǒng)，用于甘草藥材和含甘草中成藥中甘草蛋白的分析。結(jié)果用該方法對甘草藥材和中成藥中甘草蛋白抗原檢測，檢測靈敏度10ng／mL。免疫磁性捕獲ELISA檢測技術(shù)方便、快速、準(zhǔn)確，為生藥的品種鑒定及中成藥的質(zhì)量控制提供一種新方法。免疫磁珠與發(fā)光檢測技術(shù)聯(lián)用

將磁珠技術(shù)與免疫熒光、放射免疫、發(fā)光免疫等相結(jié)合，可提高分析檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。

免疫磁珠熒光微球十四免疫磁珠（IMB）技術(shù)在其他領(lǐng)域中的應(yīng)用免疫檢測IMB技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域有廣闊應(yīng)用前景，它可以檢測腫瘤細(xì)胞，如骨髓中腫瘤細(xì)胞的檢測、淋巴結(jié)中腫瘤細(xì)胞的檢測。另外這種技術(shù)還可以對腫瘤進(jìn)行磁導(dǎo)向治療和免疫磁性凈化治療。細(xì)胞分離細(xì)胞分離是免疫磁珠目前最主要應(yīng)用的一個方面，傳統(tǒng)細(xì)胞分離技術(shù)有的比較費時，有的十分昂貴，由于免疫磁珠技術(shù)分離細(xì)胞時只需要抗體和磁鐵，既簡便靈敏又經(jīng)濟快捷。如馬東初用GPⅡb/Шa血小板單克隆抗體結(jié)合磁珠分離人骨中的巨核細(xì)胞，其純度達(dá)到87.5%到97.1%，且50%的巨核細(xì)胞具有生物活性，分離的巨核細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)保持完整，可用于巨核細(xì)胞的分子生物學(xué)等方面研究。生物大分子純化

免疫磁珠可以看作是親和層析技術(shù)中的微型配基，體，在基質(zhì)上固相化抗體或抗原后，形成特異性吸附后，再進(jìn)行磁性親和抽屜不需離心過濾，用于分離和純化相應(yīng)的生物大分子。為提純受體分子、DNA、RNA、DNA結(jié)合蛋白及mRNA等提供希望。分子生物學(xué)的應(yīng)用免疫磁珠可借助親和素——生物素系統(tǒng)與非蛋白結(jié)合（如各種DNA、RNA大分子）。先將PCR雙鏈產(chǎn)物與生物素化的磁珠混合使兩者結(jié)合，然后進(jìn)行堿性變性處理，使PCR雙股DNA成為單股DNA，可直接快速用于檢測PCR樣品中DNA或RNA分子并可進(jìn)行測序。十五免疫磁珠技術(shù)展望優(yōu)點:分離速度快、效率高、可重復(fù)性好、操作簡單，不需昂貴儀器設(shè)備,不影響被分離細(xì)胞或其它生物材料的生物學(xué)性狀和功能等,從而在微生物檢測方面具有很大的優(yōu)勢。缺點：免疫磁珠敏感性不高，易于其他雜菌交叉反應(yīng)，價格昂貴，應(yīng)用受到一定限制。IMB發(fā)展的幾個方向高敏感性磁珠的制造技術(shù)降低磁珠生產(chǎn)成本免疫磁珠與其它檢測手段聯(lián)用技術(shù)免疫磁珠技術(shù)應(yīng)用技術(shù)總的來說，免疫磁珠分離技術(shù)未來將在生物醫(yī)學(xué)、食品、農(nóng)業(yè)科研、新藥開發(fā)等領(lǐng)域具有更加廣泛的發(fā)展前景。Thankyouattention！一磁性微球是通過一定方法將磁性無機粒子與有機高分子結(jié)合形成的具有一定磁性及特殊結(jié)構(gòu)的體積在幾納米到幾十微米之間的復(fù)合微球。高分子磁性微球表面具有眾多表面功能基團，同時具有磁響應(yīng)性，在外加磁場作用下具有磁導(dǎo)向功能。目前已廣泛用于生物醫(yī)學(xué)、細(xì)胞學(xué)和分離工程等領(lǐng)域。四磁性微球分離技術(shù)MACS(MagneticActivatedCellSorting)

是將免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)結(jié)合為一體，利用磁性微球表面功能基團的專一親和特性或多孔吸附特性吸附特定組分，然后用外力磁場作用將吸附了特定物質(zhì)的磁珠加以分離，再經(jīng)過洗脫磁珠上吸附的目標(biāo)物質(zhì)的一種新型分離技術(shù)，具有廣泛的用途。

幾種DNA

分離方法的比較ComparationofseveralDNAextractionmethods方法

傳統(tǒng)法鰲合樹脂法玻璃粉法磁珠法免疫親和法DNA提取酚/氯仿等溶劑抽提Chelex100樹脂吸附玻璃粉吸附離心分離磁珠吸附磁場分離抗原抗體反應(yīng)磁場分離適用范圍大多數(shù)標(biāo)本DNA提取純化培養(yǎng)及各種臨床標(biāo)本土壤標(biāo)本冰凍、陳舊組織冰凍、陳舊組織，樣本含量很少的標(biāo)本方法評價DNA純度高、含量多，但較費時，步驟繁瑣，用有機溶劑，有損操作者健康。可用于培養(yǎng)標(biāo)本和各種臨床標(biāo)本細(xì)菌及部分病毒核酸的提取。方法簡便，可用于土壤中細(xì)菌芽孢DNA的提取，不能徹底除去PCR抑制劑。簡單、快速，整個過程不到2h，可獲得較純DNA。適于少量樣本。DNA純度高，含量多，適于樣本含量少標(biāo)本，單克隆抗體的制備是關(guān)鍵。免疫磁珠的性質(zhì)具有均勻性、超順磁性及保護性外殼，由磁性載體微球和免疫配基結(jié)合而成，表面具有專一親和性和吸附作用。免疫磁珠大小和形狀具有均一性，可使靶物質(zhì)迅速有效地結(jié)合到磁珠上，可使新生成復(fù)合物在磁場中具有相同磁響應(yīng)性，且行為一致。磁珠球形結(jié)構(gòu)可消