細胞化學染色

關于細胞化學染色第1頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章細胞化學染色

細胞化學染色是細胞學和化學相結合而形成的一門科學，是以細胞形態(tài)學為基礎，結合運用化學反應的原理對血細胞內的各種化學成分(如酶類、酯類、鐵、蛋白質、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。

定義：第一節(jié)概述

第2頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章細胞化學染色第一節(jié)概述

基本步驟

第三章細胞化學染色固定

顯示

復染

第3頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章細胞化學染色第一節(jié)概述

第三章細胞化學染色固定物理法

化學法

干燥固定

火焰固定

蒸汽固定

液體固定

第4頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第一節(jié)概述

偶氮偶聯(lián)法

雪夫反應

聯(lián)苯胺法

普魯士藍反應

金屬沉淀法

顯示

第三章細胞化學染色第5頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章細胞化學染色

復染的目的在于使各種細胞能顯示出來以便于觀察。選擇復染液的顏色應與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，即能使細胞結構顯示又能清楚地看出細胞化學染色結果。復染

第一節(jié)概述

第6頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三臨床應用

第一節(jié)概述

輔助判斷急性白血病的細胞類型

輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷

觀察疾病療效和預后探討發(fā)病機制

第三章細胞化學染色第7頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三過氧化物酶染色

酯酶染色

蘇丹黑染色第二節(jié)細胞化學染色

第三章細胞化學染色過碘酸-雪夫反應中性粒細胞堿性磷酸酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色

第8頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【原理】

POX的染色方法有多種，如復方聯(lián)苯胺法、二氨基聯(lián)苯胺法、四甲基聯(lián)苯胺、改良的pereira染色法等等。二氨基聯(lián)苯胺染色是臨床常用的方法。二氨基聯(lián)苯胺法：血細胞內的POX，能分解H2O2而釋放出新生氧，后者氧化二氨基聯(lián)苯胺，形成金黃色不溶性沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。

第9頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【正常血細胞的染色反應】

1.粒細胞系統(tǒng)分化差的早期原始粒細胞為陰性，分化好的晚期原始粒細胞至中性成熟粒細胞均呈陽性，且隨著細胞的成熟，陽性反應的程度逐漸增強；中性分葉核粒細胞呈強陽性，衰老的粒細胞陽性程度減弱甚至呈陰性；嗜酸性粒細胞陽性反應最強，嗜堿性粒細胞為陰性。第10頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【正常血細胞的染色反應】1.粒細胞系統(tǒng)

2.單核細胞系統(tǒng)原始單核細胞呈陰性，幼稚及成熟單核細胞多呈弱陽性，其顆粒細少稀疏，分布不均。

3.其他細胞淋巴細胞系統(tǒng)、紅細胞系統(tǒng)及巨核細胞系統(tǒng)的細胞均呈陰性，漿細胞、組織細胞也呈陰性，吞噬細胞有時呈陽性。第11頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三1.中性成熟粒細胞，呈強陽性；2.晚幼紅細胞，呈陰性；3.單核細胞，呈弱陽性；4.漿細胞，呈陰性第12頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色成熟中性粒細胞過氧化物酶活性的變化臨床意義是輔助判斷急性白血病細胞類型的首選、最重要的細胞化學染色幫助鑒別急性白血病的類型

第13頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【臨床意義】1.幫助鑒別急性白血病的類型（1）POX染色是鑒別急性淋巴細胞白血病和急性粒細胞白血病的重要指標。急性粒細胞白血病時，原始粒細胞可呈陽性。急性淋巴細胞白血病時，原始淋巴細胞和幼稚淋巴細胞均呈陰性。急性單核細胞白血病時，原始單核細胞、幼稚單核細胞多數呈陰性或弱陽性。第14頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性粒細胞白血?。∕2a)的POX染色原始粒細胞均呈陽性

第15頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性淋巴細胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細胞，呈強陽性；其他原始淋巴細胞均呈陰性

第16頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【臨床意義】

1.幫助鑒別急性白血病的類型（2）急性早幼粒細胞白血病有時需與急性單核細胞白血病鑒別，如果白血病細胞呈過氧化物酶強陽性，應確定為急性早幼粒細胞白血病。

第17頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性早幼粒細胞白血病的POX染色１.原始紅細胞，呈陰性；其他早幼粒細胞均呈強陽性

第18頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【臨床意義】

1.幫助鑒別急性白血病的類型（3）急性單核細胞白血病有時需與組織細胞白血病、惡性組織細胞病相鑒別，異常組織細胞的過氧化物酶呈陰性，而白血病性幼單核細胞和單核細胞呈弱陽性。

第19頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性單核細胞白血病的POX染色1.中性成熟粒細胞，呈強陽性；2.原始單核細胞，呈陽性；3.原始單核細胞，呈弱陽性；其他原幼單核細胞呈陰性第20頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色一、過氧化物酶（POX）染色【臨床意義】1.幫助鑒別急性白血病的類型

2.成熟中性粒細胞過氧化物酶活性的變化活性增高：見于再生障礙性貧血、感染、急性淋巴細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病。活性減低：見于急性粒細胞白血病、慢性粒細胞白血病、急性單核細胞白血病、骨髓增生異常綜合征、放射病及退化性中性粒細胞。第21頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色二、蘇丹黑（SB）染色

【原理】

蘇丹黑是一種脂溶性重氮染料，能溶解于細胞內的含脂結構（如中性脂肪、磷脂、糖脂和類固醇）中，使脂類物質呈棕黑色或深黑色而顯示出來。脂類物質在粒細胞中含量豐富，在單核細胞中也有少量。

第22頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色二、蘇丹黑（SB）染色

【正常血細胞的染色反應

】

結果與POX染色基本一致【臨床意義

】與POX染色基本相似第23頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三三、酯酶染色

根據酯酶特異性高低分為

:特異性酯酶(氯乙酸AS-D萘酚酯酶)非特異性酯酶

pH值不同

第三章第二節(jié)細胞化學染色酸性酯酶(酸性α-醋酸萘酚酯酶)堿性酯酶(α-丁酸萘酚酯酶)中性酯酶

α-醋酸萘酚酯酶醋酸AS-D萘酚酯酶

第24頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

血細胞內的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基質液中的氯乙酸AS-D萘酚，產生AS-D萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。本試驗常用的重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成的有色沉淀為紅色。

（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色第25頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色【正常血細胞的染色反應

】1.粒細胞系統(tǒng)分化差的原始粒細胞呈陰性，分化好的呈陽性，自早幼粒細胞至成熟中性粒細胞均呈陽性。嗜酸性粒細胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細胞呈陽性。2.單核細胞系統(tǒng)絕大多數為陰性。3.其他細胞如淋巴細胞、漿細胞、巨核細胞、有核紅細胞、血小板等均呈陰性；肥大細胞呈陽性。第26頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.急性粒細胞白血病原始粒細胞呈陽性或陰性。2.急性早幼粒細胞白血病早幼粒細胞呈強陽性。3.急性單核細胞白血病原始單核及幼稚單核細胞幾乎呈陰性。4.急性粒-單核細胞白血病原始粒細胞及早幼粒細胞呈陽性，原始單核及幼稚單核細胞呈陰性。5.急性淋巴細胞白血病和急性巨核細胞白血病白血病細胞均呈陰性。

（一）氯乙酸AS-D萘酚酯酶(NAS-DCE)染色第27頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性粒細胞白血?。∕2a）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色1.原始粒細胞，呈弱陽性；2.幼稚粒細胞，呈強陽性；3.中性桿狀核粒細胞，呈強陽性

第28頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

血細胞內的α-醋酸萘酚酯酶在pH中性的條件下，水解基質液中的α-醋酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。

（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色

第29頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】1.單核細胞系統(tǒng)分化差的原始單核細胞呈陰性，分化好的原始單核細胞呈陽性，幼稚單核及單核細胞也呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制。2.粒細胞系統(tǒng)各期粒細胞多數呈陰性，少數呈弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色

第30頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】3.淋巴細胞系統(tǒng)各期淋巴細胞多呈陰性，少數呈弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。4.其他細胞巨核細胞和血小板呈陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；少數有核紅細胞呈弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制；漿細胞呈陰性。（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色

第31頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.急性單核細胞白血病單核系細胞多呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制。2.急性粒細胞白血病原始粒細胞呈陰性或弱陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。3.急性早幼粒細胞白血病早幼粒細胞呈強陽性，陽性反應不能被氟化鈉抑制。（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色

第32頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】4.急性淋巴細胞白血病原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞呈陰性或陽性，陽性反應不被氟化鈉抑制。5.急性粒-單核細胞白血病原始粒細胞呈陰性至陽性，陽性反應不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細胞呈陽性，單核系陽性反應能被氟化鈉抑制。（二）α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)染色

第33頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三

A圖：急性單核細胞白血病α-NAE染色

原始、幼稚單核細胞多呈強陽性

B圖：急性單核細胞白血病

α-NAE氟化鈉抑制染色原始、幼稚單核細胞陽性反應被氟化鈉抑制（與A圖為同一標本）

A

B第34頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

血細胞內的α-NBE在pH堿性條件下，水解基質液中的α-丁酸萘酚，釋放出α-萘酚，進而與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色第35頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】1.粒細胞系統(tǒng)各階段粒細胞呈陰性。2.單核細胞系統(tǒng)分化差的原始單核細胞呈陰性，分化好的原始單核細胞呈陽性，幼稚單核及單核細胞呈陽性，陽性反應能被氟化鈉抑制。3.淋巴細胞系統(tǒng)T淋巴細胞、非T非B淋巴細胞可呈陽性，B淋巴細胞呈陰性。4.其他細胞巨核細胞、有核紅細胞、漿細胞呈陰性或弱陽性；組織細胞也可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色第36頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義】與α-NAE染色的臨床意義相同。

（三）α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）染色第37頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

血細胞中的酸性α-醋酸萘酚酯酶在pH弱酸性(pH5.8)條件下，可水解基質液中的α-醋酸萘酚，產生α-萘酚，進而與重氮鹽六偶氮付品紅形成不溶性紅色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色第38頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】1.單核細胞系統(tǒng)單核系細胞常呈彌散型強陽性，陽性反應可被氟化鈉抑制。2.淋巴細胞系統(tǒng)T淋巴細胞呈陽性，而B淋巴細胞多數呈陰性。3.其他細胞粒系細胞一般為陰性或弱陽性，但此反應不被氟化鈉抑制；紅系細胞、巨核系細胞含量較少。（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色第39頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.可粗略地鑒別T、B淋巴細胞2.鑒別其它急性白血病細胞類型同α-NAE染色。3.多發(fā)性骨髓瘤、多毛細胞白血病細胞多為陽性；惡性組織細胞病呈強陽性；霍奇金淋巴瘤網狀高鐵紅細胞(R-S細胞)呈陽性。（四）酸性α-醋酸萘酚酯酶（ANAE）染色第40頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

過碘酸是氧化劑，能使含有乙二醇基（-CHOH-CHOH）的多糖類物質（糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖酯等）氧化，形成雙醛基（-CHO-CHO），醛基與雪夫試劑中的無色品紅結合，使無色的品紅變成紫紅色化合物，定位于含有多糖類的細胞內。以前又稱為糖原染色。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第41頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】1.粒細胞系統(tǒng)分化差的原始粒細胞呈陰性，分化好的原始粒細胞至中性分葉核粒細胞均呈陽性，并隨著細胞的成熟而逐漸增強；嗜酸性粒細胞中顆粒之間的胞質呈紅色；嗜堿性粒細胞中的嗜堿性顆粒呈陽性。2.紅細胞系統(tǒng)有核紅細胞及紅細胞均呈陰性。3.單核細胞系統(tǒng)分化差的原始單核細胞呈陰性，其他為陽性。四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第42頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】4.淋巴細胞系統(tǒng)大多數呈陰性，少數呈陽性。5.巨核細胞系統(tǒng)巨核細胞和血小板呈陽性，陽性反應的程度隨細胞的發(fā)育成熟而增強。6.其他細胞漿細胞一般呈陰性，少數呈陽性，巨噬細胞可為陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第43頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三正常血細胞PAS染色1.原始粒細胞（-）2.早幼粒細胞（+）3.中性中幼粒細胞（++）4.中性晚幼粒細胞（+++）5.中性桿狀核粒細胞（++++）6.中性分葉核粒細胞（++++）

7.嗜堿性粒細胞（+++）8.嗜酸性粒細胞（+++）9.單核細胞（±）

10.淋巴細胞（++++）第44頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.紅細胞系統(tǒng)疾病紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細胞呈陽性，有時有核紅細胞陽性反應強且陽性率高，甚至紅細胞也呈陽性。某些紅系良性疾病，如嚴重缺鐵性貧血、重型地中海貧血中的有核紅細胞也可呈陽性；巨幼細胞性貧血、再生障礙性貧血、其他溶血性貧血中的有核紅細胞常呈陰性，但有時個別有核紅細胞可呈陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第45頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】2.白細胞系統(tǒng)疾病急性淋巴細胞白血病時原始淋巴細胞及幼稚淋巴細胞的陽性率升高，陽性反應物質呈粗顆粒狀或塊狀；急性粒細胞白血病時原始粒細胞呈陰性或弱陽性；急性單核細胞白血病時原始單核及幼稚單核細胞可呈陽性；慢性淋巴細胞白血病時淋巴細胞的陽性率增加；惡性淋巴瘤時淋巴瘤細胞陽性率高、陽性強。四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第46頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.紅細胞系統(tǒng)疾病2.白細胞系統(tǒng)疾病3.其他細胞戈謝細胞呈強陽性，尼曼-皮克細胞呈陰性或弱陽性，故PAS染色有助于二者的鑒別；Reed-Sternberg（RS）細胞陰性或弱陽性；骨髓轉移性腺癌細胞呈強陽性。

四、過碘酸-雪夫（PAS）反應第47頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三急性淋巴細胞白血病PAS染色原始、幼稚淋巴細胞均陽性，呈粗顆粒狀陽性第48頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

偶氮偶聯(lián)法：成熟中性粒細胞堿性磷酸酶在pH9.6左右的堿性環(huán)境中，能水解基質液中的磷酸萘酚鈉底物，釋放出萘酚，萘酚與重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質酶活性所在之處。不同的底物與重氮鹽的組合不同，其陽性反應物質的顏色可有不同，但其化學反應過程基本相似。

五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第49頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】

1.NAP主要存在于中性成熟粒細胞(包括中性桿狀核粒細胞和中性分葉核粒細胞)，故中性成熟粒細胞呈陽性反應，其他細胞基本呈陰性。陽性反應表現在胞質中出現棕黑色或棕紅色顆粒。

五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第50頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】2.成熟中性粒細胞堿性磷酸酶積分值的計算血涂片經染色后，在油鏡下，連續(xù)觀察100個成熟中性粒細胞，記錄其陽性反應細胞所占百分率即為陽性率；并對所有陽性反應細胞逐個按其反應強度作出（+）～（++++）的分級，將各級所占的百分率乘以級數，然后相加，即為積分值。結果以陽性率和積分值來表示。

五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第51頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三中性粒細胞堿性磷酸酶染色1.中性成熟粒細胞（+）；2.中性成熟粒細胞（++）；3.中性成熟粒細胞（+++）；4.中性成熟粒細胞（++++）；5.淋巴細胞（-）第52頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【參考范圍】陽性率＜40％；NAP的積分值為30～130分。

(各單位應建立本實驗室參考值)五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第53頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.NAP積分增加見于細菌性感染、類白血病反應、再生障礙性貧血、某些骨髓增殖性疾病、慢性粒細胞白血病加速期或急變期、急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴細胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉移癌等。五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第54頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三真性紅細胞增多癥NAP染色1.中性成熟粒細胞（+++）；2.中性成熟粒細胞（++）；3.淋巴細胞（-）第55頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】1.NAP積分增加2.NAP積分下降見于慢性粒細胞白血病慢性期、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征、惡性組織細胞病等。

五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第56頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】3.疾病的鑒別（1）慢性粒細胞白血病與類白血病反應：前者明顯下降且常為零分，后者明顯增加。（2）慢性粒細胞白血病(慢性期)與慢性中性粒細胞白血?。呵罢呙黠@下降，后者明顯增加。（3）細菌性感染與病毒性感染：前者明顯增加，后者常無明顯變化。（4）再生障礙性貧血與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥：前者常增加，后者常下降。五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第57頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】3.疾病的鑒別（5）急性白血病類型的鑒別：急性粒細胞白血病常下降，急性淋巴細胞白血病常增加，急性單核細胞白血病一般正?；驕p低。（6）惡性淋巴瘤與惡性組織細胞?。呵罢叱Ｔ黾?，后者常下降。（7）惡性組織細胞病與反應性組織細胞增多癥：前者常下降，后者無明顯變化。（8）真性紅細胞增多癥與繼發(fā)性紅細胞增多癥：前者常增加，后者無明顯變化。（9）原發(fā)性血小板增多癥與繼發(fā)性血小板增多癥：前者常增加，后者無明顯變化。五、中性粒細胞堿性磷酸酶（NAP）染色

第58頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

偶氮偶聯(lián)法：血細胞內的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質液中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細胞質內酶所在的部位。六、酸性磷酸酶（ACP）染色

第59頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】Gomori硫化鉛法：血細胞內的酸性磷酸酶水解基質液中的β-甘油磷酸鈉，形成磷酸根，磷酸根與硝酸鉛作用生成磷酸鉛，定位于胞質中的磷酸鉛再與硫化銨反應生成棕黑色硫化鉛沉淀。六、酸性磷酸酶（ACP）染色

第60頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同方法制備兩份基質液，一份加入適量的L-酒石酸（左旋酒石酸）,另一份不加酒石酸。取兩張相同標本的涂片，分別用這兩種不同的基質液做酸性磷酸酶染色。如果血細胞內的酸性磷酸酶耐L-酒石酸，兩張涂片均呈陽性；如不耐L-酒石酸，不加L-酒石酸的涂片呈陽性反應，而加L-酒石酸呈陰性反應。

六、酸性磷酸酶（ACP）染色

第61頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】粒細胞、單核細胞、淋巴細胞、巨核細胞、血小板、漿細胞、巨噬細胞均呈陽性。六、酸性磷酸酶（ACP）染色

第62頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【臨床意義

】

臨床ACP染色應用較少，主要用于多毛細胞白血病的診斷及脂質代謝障礙性疾病的鑒別。1.診斷多毛細胞白血病多毛細胞呈陽性（常呈強陽性），陽性反應不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細胞白血病的淋巴細胞和惡性淋巴瘤細胞ACP染色也可呈陽性，但可被L-酒石酸抑制。2.鑒別戈謝細胞和尼曼-匹克細胞前者陽性，并具有抗酒石酸功能；后者陰性。六、酸性磷酸酶（ACP）染色

第63頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三多毛細胞白血病酸性磷酸酶染色多毛細胞呈陽性反應第64頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【原理】

正常人骨髓中的貯存鐵以鐵蛋白和含鐵血黃素的形式貯存，主要存在于骨髓小粒和幼紅細胞中。骨髓中的鐵在酸性環(huán)境下與亞鐵氰化鉀作用，形成普魯士藍色的亞鐵氰化鐵沉淀，定位于含鐵的部位。七、鐵染色第65頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】

骨髓中的貯存鐵分為細胞外鐵和細胞內鐵。細胞外鐵主要存在于骨髓小粒的巨噬細胞中，細胞內鐵是指存在于中幼紅細胞、晚幼紅細胞及紅細胞中的鐵（鐵粒幼紅細胞、鐵粒紅細胞）。

七、鐵染色第66頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】1.細胞外鐵觀察骨髓小粒中的鐵，陽性結果呈彌散性、顆粒狀、小珠狀或塊狀藍色。根據骨髓小粒中鐵的存在方式及量，將細胞外鐵分為（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）。七、鐵染色第67頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三A骨髓細胞外鐵染色A圖：細胞外鐵+；B圖：細胞外鐵++B第68頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三骨髓細胞外鐵染色C圖：細胞外鐵+++；D圖：細胞外鐵++++

CD第69頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【正常血細胞的染色反應

】2.細胞內鐵觀察100個中幼紅細胞和晚幼紅細胞，計算出鐵粒幼紅細胞的百分比。鐵粒幼紅細胞：指胞質中出現藍色鐵顆粒的幼紅細胞，根據藍色鐵顆粒的多少及粗細，分為：Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及環(huán)形鐵粒幼紅細胞。環(huán)形鐵粒幼紅細胞：指幼紅細胞胞質內含鐵粒6顆以上，并環(huán)繞細胞核排列超過核周徑2/3以上者。鐵粒紅細胞：指成熟紅細胞中出現鐵顆粒。

七、鐵染色第70頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三骨髓細胞內鐵染色1.環(huán)形鐵粒幼紅細胞；2.鐵粒幼紅細胞

第71頁，講稿共79頁，2023年5月2日，星期三第三章第二節(jié)細胞化學染色【參考范圍】1.細胞外鐵（+）～（++）。2.細胞內鐵鐵粒幼紅細胞陽性率在12％～44％。以