細(xì)菌一般染色方法

關(guān)于細(xì)菌一般染色方法第1頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第2頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)菌染色意義由于細(xì)菌個(gè)體微小，基本上無(wú)色透明，故將其用適當(dāng)染料染色觀(guān)察，方能顯示它的形態(tài)、大小、構(gòu)造及染色特性等，在細(xì)菌鑒別上有重要意義。革蘭染色是細(xì)菌學(xué)中使用最廣泛的一種染色方法，籍此染色法，可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類(lèi)。第3頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)菌染色方法及原理

常采用美藍(lán)，結(jié)晶紫等堿性染料進(jìn)行染色。多數(shù)染料都是中性有機(jī)鹽。據(jù)著色基的不同可分為以下類(lèi)型：

堿性染料（basicdye）—帶正電染料。其陽(yáng)離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶負(fù)電的組分結(jié)合。酸性染料（Aciddye）—帶負(fù)電染料。其陰離子部分為發(fā)色基團(tuán)，可與細(xì)胞中帶正電的組分結(jié)合。第4頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三革蘭染色原理細(xì)菌的等電點(diǎn)較低，約在pH2～5之間，故在中性、堿性或弱堿性溶液中，菌體蛋白質(zhì)電離后帶負(fù)電荷，易與帶正電荷的堿性染料如龍膽紫及堿性復(fù)紅等結(jié)合，使細(xì)菌被染成紫色或紅色。第5頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三一、細(xì)菌染色標(biāo)本片的制備細(xì)菌染色檢查，首先要進(jìn)行細(xì)菌標(biāo)本制備。制備細(xì)菌標(biāo)本一般包括涂片、干燥、固定三步。第6頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三固定的目的和方法使細(xì)菌的細(xì)胞凝固，使菌體與玻片粘得更牢固可改變菌體對(duì)染料的通透性加熱固定可殺死細(xì)菌，比較安全固定的方法將制成的標(biāo)本勻速通過(guò)火焰三次第7頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三革蘭染色染色：初染（結(jié)晶紫）媒染

（碘液）脫色（酒精）

復(fù)染（復(fù)紅）濾紙吸干油鏡鏡檢safraninCrystalviolet第8頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三染色步驟結(jié)晶紫初染盧戈碘液媒染９５％乙醇脫色復(fù)紅復(fù)染（２）（３）（１）（４）１分鐘水洗１分鐘水洗３０秒水洗３０秒水洗吸干第9頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三Germisstainedvioletorred第10頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三結(jié)晶紫初染１分鐘水洗

第11頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三碘液媒染１分鐘

水洗第12頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三酒精脫色３０秒水洗第13頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三

復(fù)紅復(fù)染３０秒水洗第14頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三濾紙吸干油鏡鏡檢第15頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三抗酸染色法(acid-faststain)分枝桿菌屬的細(xì)菌（包括結(jié)核分枝桿菌、麻風(fēng)分枝桿菌等）為抗酸性細(xì)菌，一般染色法不易著色，須用抗酸染色法。注意事項(xiàng)涂片要略厚加溫染色或延長(zhǎng)染色時(shí)間，加溫時(shí)隨時(shí)補(bǔ)加染色液分枝桿菌呈紅色(+)其他細(xì)菌和背景為藍(lán)色(-)。第16頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三操作過(guò)程取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸復(fù)紅加溫染色8~10分鐘后→用3%的鹽酸酒精脫色約1~2分鐘，脫色時(shí)輕搖玻片，直到涂片顏色脫去為止水洗后，用堿性美藍(lán)復(fù)染1分鐘→水洗，印干→鏡檢第17頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三形態(tài)：細(xì)長(zhǎng)，略彎曲的桿菌，多聚集成團(tuán)。無(wú)鞭毛,芽胞。染色性：不易著色，抗酸染色陽(yáng)性。菌體呈紅色，背景中其他物質(zhì)藍(lán)色。結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)第18頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三細(xì)菌基本形態(tài)結(jié)構(gòu)觀(guān)察基本形態(tài)球菌桿菌弧菌特殊結(jié)構(gòu)芽孢枯草桿菌，破傷風(fēng)梭菌莢膜肺炎球菌鞭毛變形桿菌葡萄球菌鏈球菌肺炎球菌腦膜炎球菌革蘭陽(yáng)性革蘭陰性第19頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第20頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第21頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三肺炎（雙）球菌莢膜第22頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第23頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第24頁(yè)，講稿共28頁(yè)，2023年5月2日，星期三第25頁(yè)，講稿共28