移植前檢測(cè)HLA和ABO血型配型

第二十八章移植(yízhí)免疫及其免疫檢測(cè)第一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件移植（transplantation）:將健康細(xì)胞、組織或器官?gòu)钠湓课灰浦驳阶泽w或異體的一定部位、用以替代或補(bǔ)償機(jī)體所喪失的結(jié)構(gòu)和（或）功能(gōngnéng)的現(xiàn)代醫(yī)療手段。

移植物（graft）供體（donor）受體（recipient）或宿主（host）概述第二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件自體移植根據(jù)移植物來(lái)源同系移植同種異體移植異種(yìzhǒnɡ)移植原位移植根據(jù)移植部位異位移植器官移植移植物種類支架組織移植細(xì)胞移植移植(yízhí)的類型第三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件組織器官移植種類(zhǒnglèi)和命名

移植名稱

供者、受者關(guān)系 舉例

自體移植

同一個(gè)體

自體斷肢(duànzhī)再植，自體皮片移植

同系或同基因移植同系或同基因

人的單卵雙生子間的器官移植

的個(gè)體間同品系小鼠的皮片移植

同種異基因移植

同種不同基因人與人之間的腎移植

的個(gè)體間不同品系小鼠間的皮片移植

異種移植

異種動(dòng)物間 狗的器官移植給猩猩

豬的器官移植給狗

第四頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第一節(jié)引起(yǐnqǐ)排斥反應(yīng)的靶抗原第五頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件1主要組織相容性抗原(kàngyuán)人—HLA

鼠—H-2遺傳特征：

單倍型遺傳

高度多態(tài)性2次要組織相容性抗原

主要組織相容性抗原(kàngyuán)（MHC分子）第六頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件

父

母

HLA是人體多態(tài)性最豐富的基因(jīyīn)系統(tǒng)。據(jù)1999年的統(tǒng)計(jì)，HLA復(fù)合物等位基因(jīyīn)總數(shù)已達(dá)到1031個(gè)，其中HLA-B等位基因(jīyīn)有301個(gè)

A9Cw3B7A2Cw2B13A1Cw1B5A3Cw4B8HLA的遺傳(yíchuán)特征第七頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第二節(jié)排斥(páichì)反應(yīng)的種類及發(fā)生機(jī)制第八頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件移植排斥(páichì)反應(yīng)（transplantationrejection）針對(duì)移植抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致移植物功能喪失或受者機(jī)體損害(sǔnhài)的過(guò)程。分類：

超急性排斥反應(yīng)(fǎnyìng)急性排斥反應(yīng)慢性排斥反應(yīng)第九頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件機(jī)制：受者體內(nèi)存有抗供者移植物的預(yù)存抗體，與抗原結(jié)合，激活補(bǔ)體和凝血系統(tǒng),導(dǎo)致血管內(nèi)凝血。

預(yù)存抗體來(lái)源：1、供受者之間ABO血型不合；2、受者反復(fù)多次輸血、妊娠或既往作過(guò)移植(yízhí)。處理：重新移植預(yù)防：ABO血型配型、細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)1.超急性(jíxìng)排斥反應(yīng)第十頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件2.急性排斥(páichì)反應(yīng)

體液性排斥抗體激活補(bǔ)體，并有CD4+T細(xì)胞參與，導(dǎo)致急性血管炎細(xì)胞性排斥

CD8+CTL細(xì)胞的細(xì)胞毒作用、CD4+T和巨噬細(xì)胞的作用，導(dǎo)致急性間質(zhì)炎。處理使用(shǐyòng)免疫抑制劑第十一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件在急性(jíxìng)排斥反應(yīng)中的兩條抗原提呈途徑：①直接途徑（directpath）:殘留于供者移植物內(nèi)的抗原提呈細(xì)胞（過(guò)客細(xì)胞）對(duì)受者機(jī)體的免疫系統(tǒng)提供最初的抗原刺激。這種抗原性刺激，來(lái)自移植物中樹突狀細(xì)胞和單核細(xì)胞等表面富含的HLA-Ⅰ、-Ⅱ類分子②間接途徑（indirectpath）:通過(guò)受者體內(nèi)的抗原提呈細(xì)胞對(duì)具有同種異基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ類分子的移植物實(shí)質(zhì)細(xì)胞的識(shí)別。無(wú)論是供者還是受者，其抗原提呈細(xì)胞提供的IL-1、IL-6等刺激信號(hào)，有助于觸發(fā)淋巴細(xì)胞的活化

第十二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件同種移植排斥反應(yīng)(fǎnyìng)的發(fā)生機(jī)制第十三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件慢性排斥反應(yīng)的介導(dǎo)因素：T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等介導(dǎo)的遲發(fā)型超敏反應(yīng)等免疫損傷。B細(xì)胞產(chǎn)生的抗體活化補(bǔ)體或通過(guò)ADCC破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞。急性排斥反應(yīng)反復(fù)發(fā)作所導(dǎo)致的移植物組織退行性變，此與細(xì)胞和體液免疫均有關(guān)系。非免疫相關(guān)因素，諸如局部缺血、再灌注損傷、微生物感染等。受者患有高血壓或糖尿病也可促使慢性排斥反應(yīng)的發(fā)生臨床特征：對(duì)免疫抑制療法不敏感無(wú)特異性治療方法，最終需要重新(chóngxīn)進(jìn)行器官移植3.慢性排斥(páichì)反應(yīng)第十四頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件定義：在骨髓移植時(shí)，供者骨髓中的免疫細(xì)胞啟動(dòng)以受者細(xì)胞為靶抗原的免疫應(yīng)答反應(yīng)，引起攻擊(gōngjī)受者的移植物抗宿主反應(yīng)。GVHD也可見于脾、胸腺和小腸移植。發(fā)生機(jī)制：T細(xì)胞起主要作用IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等4.移植物抗宿主(sùzhǔ)反應(yīng)第十五頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第三(dìsān)節(jié)HLA分型方法第十六頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件血清學(xué)分型法應(yīng)用一系列已知抗HLA的特異性標(biāo)準(zhǔn)分型血清與待測(cè)淋巴細(xì)胞混合(hùnhé)，借助補(bǔ)體的生物學(xué)作用介導(dǎo)細(xì)胞裂解的細(xì)胞毒試驗(yàn)。

操作簡(jiǎn)便易行、節(jié)約試劑、結(jié)果(jiēguǒ)可靠、重復(fù)性好無(wú)需特殊設(shè)備

優(yōu)點(diǎn)(yōudiǎn)缺點(diǎn)耗時(shí)長(zhǎng)不同批號(hào)抗血清結(jié)果常有不同第十七頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件用于HLA分型的微量細(xì)胞毒試驗(yàn)(shìyàn)

第十八頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件血清學(xué)分型法死（著染）細(xì)胞（%）記分結(jié)果判斷0～101陰性11～202可疑陰性21～504弱陽(yáng)性51～806陽(yáng)性>808強(qiáng)陽(yáng)性0未試驗(yàn)或不能讀數(shù)第十九頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第二十頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件細(xì)胞學(xué)分型法

以混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixedlymphocyteculture,MLC）或稱混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（mixedlymphocytereaction,MLR）為基本技術(shù)的HLA分型法。能用本法測(cè)定(cèdìng)的抗原稱為L(zhǎng)D抗原（lymphocytedefinedantigen）,包括HLA-D、-DP。1.單向(dānxiànɡ)MLC原理：將已知HLA型別的分型細(xì)胞用絲裂霉素C或X線照射預(yù)處理，使其失去增殖能力僅作為(zuòwéi)刺激細(xì)胞；而以具有增殖能力的受檢者外周血單個(gè)核細(xì)胞為反應(yīng)細(xì)胞。兩者混合培養(yǎng)時(shí)，反應(yīng)細(xì)胞可對(duì)刺激細(xì)胞發(fā)生應(yīng)答而增殖，用3H-TdR摻入法測(cè)定細(xì)胞增殖強(qiáng)度，從而判斷受檢細(xì)胞的HLA型別。

根據(jù)選用的刺激細(xì)胞類型分為：1．陰性分型法

2．陽(yáng)性分型法

第二十一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件

遺傳型不同的兩個(gè)個(gè)體(gètǐ)淋巴細(xì)胞在體外混合培養(yǎng)時(shí)，由于兩者HLA不同，能相互刺激導(dǎo)致對(duì)方淋巴細(xì)胞增殖，故稱雙向MLC。在此試驗(yàn)中，各自的淋巴細(xì)胞既是刺激細(xì)胞，又是反應(yīng)細(xì)胞，反應(yīng)后形態(tài)上呈現(xiàn)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和分裂現(xiàn)象，可通過(guò)形態(tài)法計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)化細(xì)胞。2.雙向MLC第二十二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件分子生物學(xué)分型法限制性片斷長(zhǎng)度(chángdù)多態(tài)性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）分析：最早建立的研究HLA多態(tài)性的DNA分型技術(shù)

PCR-RFLP分型法：對(duì)DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增，然后再用限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切分析，可使限制性長(zhǎng)度分析的敏感度大大增加1.RFLP與PCR-RFLP分型法

第二十三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件

序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-sequencespecificoligonucleotide,PCR-SSO）是以PCR為基礎(chǔ)，將凝膠上擴(kuò)增的HLA基因DNA轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜或尼龍膜，進(jìn)而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物質(zhì)標(biāo)記的寡核苷酸探針與之進(jìn)行(jìnxíng)雜交，從而對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物作出HLA型別判斷。

分類：斑點(diǎn)或印漬法：用擴(kuò)增的待測(cè)DNA印漬或點(diǎn)至固相支持物，再與探針行雜交，利于大量標(biāo)本分型反向斑點(diǎn)或印漬法：將已知DNA印漬或點(diǎn)至固相支持物，然后與擴(kuò)增的待測(cè)DNA（預(yù)先標(biāo)記）雜交，用于少量標(biāo)本分型

PCR-SSO是Ⅱ類HLA分型應(yīng)用最廣泛的方法，能夠鑒定所有已知序列的HLA-DR、－DQ、－DP等位基因

2.PCR-SSO分型法

第二十四頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件基因芯片(genechip)是近年發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù),將其與PCR-SSO結(jié)合應(yīng)用于HLA分型，可使分型趨于規(guī)?；妥詣?dòng)化，尤其在HLA多態(tài)性和疾病遺傳背景分析等方面更具優(yōu)勢(shì)。HLA的基因芯片分型法，實(shí)際上是PCR-SSO反向斑點(diǎn)或印漬法的微型化。目前，基因芯片在HLA分型領(lǐng)域(lǐnɡyù)的應(yīng)用尚屬起步階段。2.PCR-SSO分型法第二十五頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件原理：應(yīng)用設(shè)計(jì)的一套HLA等位基因的序列特異性引物（sequencespecificprimer,SSP）,對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從而獲得(huòdé)HLA型別特異性的擴(kuò)增產(chǎn)物HLA基因擴(kuò)增的特異性包括：座位特異性（locus-specific），如HLA-A、－B、-DRB1等；組特異性（group-specific），如DRB1-01、DRB1-02等；等位基因特異性（allele-specific），如DRB1*0401、DRB1*0402等。3.PCR-SSP分型法

第二十六頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件單鏈構(gòu)象(ɡòuxiànɡ)特異性－聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-singlestrandconformationpolymorphism,PCR-SSCP）是以對(duì)待測(cè)基因PCR擴(kuò)增為基礎(chǔ)，對(duì)擴(kuò)增的單鏈DNA（ssDNA）的HLA分型方法。原理：對(duì)ssDNA進(jìn)行無(wú)變性劑的聚丙烯酰凝膠電泳時(shí)，因其序列的差異可形成不同的空間構(gòu)象而導(dǎo)致電泳遷移率的差異，如此可分辨出單一堿基的差異和檢測(cè)出DNA多態(tài)性或點(diǎn)突變，有助于新的HLA等位基因或突變體的發(fā)現(xiàn)。特點(diǎn)：PCR-SSCP作為PCR-SSO的補(bǔ)充，在區(qū)分純合子和雜合子基因方面有其獨(dú)到之處，有利于排除SSO雜交的假性。4.PCR-SSCP分型法第二十七頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件基于序列的HLA分型法（sequence-basedHLAtyping,SBT），通過(guò)對(duì)擴(kuò)增后的HLA基因片段通過(guò)核酸序列測(cè)定來(lái)判斷HLA型別?；?jīběn)過(guò)程：分離待測(cè)細(xì)胞的DNA，應(yīng)用座位、組或等位基因特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物的純化和測(cè)序，測(cè)出的基因序列與HLA基因庫(kù)的DNA已知序列比較，判斷待測(cè)的HLA型別。

5.SBT分型法第二十八頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第四節(jié)常見(chánɡjiàn)的組織或器官移植第二十九頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件腎臟(shènzàng)移植腎臟(shènzàng)移植，創(chuàng)始于1950年，是臨床開展最早、應(yīng)用最多和效果最佳的一種器官移植。

1.組織(zǔzhī)配型在腎臟移植中的應(yīng)用組織配型是腎臟移植前選擇供者的重要手段ABO血型配型、HLA配型和交叉配型腎源選擇的原則以ABO血型完全相同者為好，至少能夠相容選擇最佳HLA配型的供者器官第三十頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件2.腎移植受者的療效(liáoxiào)檢測(cè)療效監(jiān)測(cè)：受者免疫狀態(tài)檢測(cè)臨床觀測(cè)項(xiàng)目:T細(xì)胞總數(shù)、CD4/CD8比值和IL-2及其受體的檢測(cè)，判斷排斥(páichì)反應(yīng)的發(fā)生和評(píng)估免疫抑制劑治療效果腎組織活檢，預(yù)測(cè)排斥反應(yīng)的發(fā)生CsA血藥濃度檢測(cè)，指導(dǎo)合理用藥，減少腎毒性

第三十一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件肝臟(gānzàng)移植特點(diǎn)：HLA是否匹配與肝臟移植效果無(wú)顯著差異機(jī)制：肝臟移植時(shí)，因HLA不配僅發(fā)生較弱的排斥(páichì)反應(yīng)，而免疫抑制劑的應(yīng)用有效控制了排斥(páichì)反應(yīng)的發(fā)生肝臟移植時(shí)仍應(yīng)盡可能進(jìn)行HLA配型1.組織(zǔzhī)配型在肝臟移植中的應(yīng)用

第三十二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件組織病理學(xué)特點(diǎn)：肝移植術(shù)后第2天，匯管區(qū)出現(xiàn)明顯的白細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)和肝竇的白細(xì)胞浸潤(rùn)第7天達(dá)高峰，涉及到T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性和中性粒細(xì)胞。在浸潤(rùn)的T細(xì)胞中CD8+細(xì)胞高于CD4+細(xì)胞，也見有IL-2R和CD25+的活化T細(xì)胞。排斥反應(yīng)發(fā)生(fāshēng)幾率：約2/3的肝移植患者出現(xiàn)過(guò)排斥反應(yīng)的病理學(xué)改變，也有8％的病例術(shù)后發(fā)生急、慢性排斥反應(yīng)，占肝移植致死原因的10%。2.肝移植受者的療效(liáoxiào)檢測(cè)

第三十三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件心臟移植與心肺(xīnfèi)聯(lián)合移植ABO血型匹配：避免急性排斥反應(yīng)的首要條件HLAI、Ⅱ類分子匹配：移植(yízhí)器官長(zhǎng)期存活的重要因素。

淋巴細(xì)胞毒交叉配合和群體反應(yīng)性抗體檢測(cè)1.組織(zǔzhī)配型在心臟和心肺聯(lián)合移植中的應(yīng)用

第三十四頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo)：外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)T、B細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力T細(xì)胞亞類百分?jǐn)?shù)及比值CTL細(xì)胞毒作用細(xì)胞因子及其受體表達(dá)或轉(zhuǎn)錄(zhuǎnlù)水平轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子

NK細(xì)胞數(shù)及其介導(dǎo)的自然殺傷或ADCC效應(yīng)粘附分子及其配體在各類細(xì)胞表達(dá)情況2.心臟及心肺聯(lián)合(liánhé)移植受者的療效檢測(cè)

第三十五頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件骨髓與其他來(lái)源(láiyuán)的干細(xì)胞移植特點(diǎn)：可同時(shí)發(fā)生HVGR和GVHR

分類：

自體骨髓移植、同基因(jīyīn)骨髓移植同種異基因骨髓移植（多見）

1.骨髓移植

病例(bìnglì)較少成功率高

骨髓移植實(shí)際上是造血干細(xì)胞移植，因此，骨髓中造血干細(xì)胞的質(zhì)和量對(duì)移植的成敗致關(guān)重要。

第三十六頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件2.外周血和臍血干細(xì)胞移植(yízhí)

方法：使用(shǐyòng)藥物動(dòng)員劑促使造血干細(xì)胞從骨髓釋放到外周血，從中獲取足量的干細(xì)胞用于移植，可獲得與骨髓移植同樣的治療目的特點(diǎn)：與骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢復(fù)快，GVHR發(fā)生率和嚴(yán)重程度不高等優(yōu)點(diǎn)。

移植前檢測(cè)：HLA和ABO血型配型、血常規(guī)與骨髓檢驗(yàn)、性染色體測(cè)定、造血干細(xì)胞鑒定和GVHR征象追蹤等腫瘤干細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，提示人們(rénmen)在進(jìn)行干細(xì)胞應(yīng)用時(shí)應(yīng)該注意生物安全性。第三十七頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件適應(yīng)(shìyìng)于同種異型或異基因骨髓移植的疾病包括：再生障礙性貧血、慢性髓樣白血病等血液系統(tǒng)疾病，以及脊髓發(fā)育不良、嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷病、Wiskott-Aldrich綜合征、慢性肉芽腫、X-性聯(lián)高IgM綜合征（CD40L缺陷）、骨骼石化癥等免疫缺陷性疾病。乳腺、卵巢、睪丸以及肺部等實(shí)體瘤，不宜行骨髓移植，多應(yīng)用自體末稍血干細(xì)胞移植治療，而自體末稍血干細(xì)胞移植對(duì)再生障礙性貧血、慢性髓樣白血病和免疫缺陷病無(wú)效。急性髓樣白血病、急性淋巴母細(xì)胞性白血病、多發(fā)性骨髓瘤、非何杰金淋巴瘤和何杰金病等，則既是同種異型或異基因骨髓移植的適應(yīng)癥，也可用自體末稍血干細(xì)胞移植進(jìn)行治療。

3.適于骨髓(ɡǔsuǐ)或末稍血干細(xì)胞移植的常見疾病

第三十八頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第五節(jié)排斥反應(yīng)(fǎnyìng)的預(yù)防與治療第三十九頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件組織(zǔzhī)配型HLA是引起同種異型移植排斥反應(yīng)的主要抗原供者與受者的HLA等位基因匹配程度決定了移植排斥反應(yīng)的強(qiáng)弱程度通過(guò)HLA組織配型(tissuetyping)，選擇合適(héshì)的供者，減輕排斥反應(yīng)

1.HLA配型移植物存活與HLA配型的關(guān)系是：①供、受者HLA-A和HLA-B相配的位點(diǎn)數(shù)越多，移植物存活機(jī)率越高；②供、受者HLA-DR位點(diǎn)相配更重要，因?yàn)镠LA-DR和DQ基因有很強(qiáng)的連鎖不平衡，DR位點(diǎn)相配的個(gè)體，通常DQ位點(diǎn)也相配；③不同地區(qū)HLA匹配程度與移植結(jié)果的關(guān)系有著不同的預(yù)測(cè)價(jià)值，在歐洲(ōuzhōu)HLA匹配的程度對(duì)移植結(jié)果的預(yù)測(cè)性比美國(guó)高，因?yàn)闅W洲人群的近交程度較高，導(dǎo)致HLA位點(diǎn)連鎖不平衡性削弱。

第四十頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件交叉配型采用補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒試驗(yàn)

陽(yáng)性對(duì)照:陽(yáng)性對(duì)照血清可用淋巴細(xì)胞免疫家兔獲得陰性對(duì)照:陰性血清可采用無(wú)受血史的AB血型男性血清根據(jù)反應(yīng)時(shí)參與的細(xì)胞成分分類：

淋巴細(xì)胞交叉配型T細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型B細(xì)胞淋巴細(xì)胞毒性交叉配型流式細(xì)胞法交叉配型自身交叉配型結(jié)果判度:

交叉配型陽(yáng)性:表明受者預(yù)存有抗供體的抗體臨床意義:交叉配型陽(yáng)性:即使組織配型好，也不宜進(jìn)行(jìnxíng)移植，易發(fā)生超急性排斥反應(yīng)。在做受體選擇時(shí)，組織配型差，但交叉配型為陰性，仍可實(shí)施移植。交叉配型常用于腎臟移植2.HLA交叉配型與預(yù)存抗體(kàngtǐ)的檢測(cè)第四十一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件方法方法類型與參與成分需時(shí)應(yīng)用組織配型補(bǔ)體依賴的淋巴毒試驗(yàn)血清學(xué)法（HLA抗血清、補(bǔ)體、待測(cè)細(xì)胞）3hHLAⅠ、Ⅱ類抗原鑒定交叉配型PBL交叉配型血清學(xué)法（受著血清、供者細(xì)胞、補(bǔ)體、有/無(wú)AHG）3h檢測(cè)受者血清中已存在的抗供者抗體TB交叉配型血清學(xué)法（純化的供者T/B細(xì)胞、受者血清、AHG）3-6hT細(xì)胞：檢測(cè)抗HLAI類抗體；B細(xì)胞：檢測(cè)HLAI、II類抗體MLC試驗(yàn)細(xì)胞學(xué)法（供、受者細(xì)胞培養(yǎng)）6dHLAII類抗原相容性CML試驗(yàn)細(xì)胞學(xué)法（受者細(xì)胞、供者刺激細(xì)胞作為靶細(xì)胞）4h抗供者CTL檢測(cè)FCC血清學(xué)法（受者血清、供者細(xì)胞、熒光抗人Ig）3-4h檢測(cè)非常弱的和無(wú)細(xì)胞毒性的抗供者抗體自身交叉配型血清學(xué)法（受者PBL、T和B細(xì)胞以及血清）和FCC3-4h檢測(cè)非特異的淋巴細(xì)胞抗體（自身抗體）HLA抗體篩選HLAI類抗體的篩選血清學(xué)法（受者血清、相應(yīng)的HLA類型T細(xì)胞或PBL）3h×60細(xì)胞HLAI類抗體檢測(cè)，抗體特異性鑒定HLAII類抗體的篩選血清學(xué)法（吸附過(guò)的受者血清、用作HLA-DR/DQ分型的B細(xì)胞）4h×60細(xì)胞數(shù)加吸附時(shí)間HLAII類抗體檢測(cè)，抗體特異性鑒定CML：細(xì)胞介導(dǎo)的淋巴細(xì)胞溶解(róngjiě)試驗(yàn)第四十二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件群體反應(yīng)性抗體（panelreactiveantibody,PRA）：指用40-60人含已知HLA的T細(xì)胞或T、B混合細(xì)胞，檢測(cè)待移植受者血清所得到的抗體陽(yáng)性百分?jǐn)?shù)。檢測(cè)意義:用于判斷器官移植時(shí)受體的敏感程度高PRA血清:可針對(duì)多個(gè)(duōɡè)HLA抗原發(fā)生反應(yīng)，受體對(duì)所接受的移植器官或組織威脅大注意:應(yīng)考慮在不同HLA上可能出現(xiàn)的共同表位或稱公共抗原（publicantigens）與受體血清發(fā)生的交叉反應(yīng)3.群體反應(yīng)性抗體(kàngtǐ)的檢測(cè)第四十三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件1.移植物的預(yù)處理不同的組織器官的移植，其移植物的處理不盡相同首先(shǒuxiān)是從移植術(shù)的角度對(duì)離體組織器官進(jìn)行外科修整，然后根據(jù)不同器官的要求采取相應(yīng)的預(yù)處理移植物與受體的預(yù)處理第四十四頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件組織配型或交叉(jiāochā)配型移植前應(yīng)用一定劑量的免疫抑制劑，其用量視組織配型的結(jié)果而定術(shù)前輸血,視患者的需要進(jìn)行

受體的準(zhǔn)備(zhǔnbèi)

第四十五頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件人工調(diào)節(jié)受者機(jī)體的免疫狀態(tài)是控制移植術(shù)后排斥反應(yīng)發(fā)生的主要途徑采取的措施有：使用免疫抑制劑:以此控制受者的免疫應(yīng)答，降低對(duì)移植物的排斥能力(nénglì)

誘導(dǎo)免疫耐受:誘導(dǎo)受者對(duì)移植抗原的特異性免疫耐受免疫抑制措施(cuòshī)第四十六頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件參與移植排斥反應(yīng)的免疫細(xì)胞以T細(xì)胞為主，T細(xì)胞功能(gōngnéng)抑制分類：

1.免疫(miǎnyì)抑制劑的應(yīng)用1、化學(xué)性免疫(miǎnyì)抑制劑

3、生物性免疫抑制劑

2、某些中草藥

環(huán)孢菌素A(cyclosporineA，CsA)糖皮質(zhì)激素，硫唑嘌呤，環(huán)磷酰胺，F(xiàn)K506又名他克莫司(tacrolimus)，霉酚酸酯(mycophendatemofetil,MMF)抗淋巴細(xì)胞球蛋白(ALG)或抗胸腺細(xì)胞球蛋白(ATG),

細(xì)胞性單克隆抗體，某些融合蛋白,反義寡核苷酸(antisenceoligonucleotide),

第四十七頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件常見免疫(miǎnyì)抑制劑作用位點(diǎn)

第四十八頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件新的研究思路：誘導(dǎo)同種抗原的特異性免疫耐受:通過(guò)將同種抗原置入子宮或注射給新生兒而誘導(dǎo)誘導(dǎo)免疫耐受:應(yīng)用大劑量天然可溶性或人工合成的供者HLA分子，封閉同種抗原特異性T細(xì)胞的TCR，以誘導(dǎo)受者特異性T細(xì)胞凋亡，產(chǎn)生免疫耐受誘導(dǎo)T細(xì)胞無(wú)能：使用可溶性CTLA-4以阻斷移植物細(xì)胞的B7與受者T細(xì)胞表面CD28的結(jié)合，干擾(gānrǎo)共刺激信號(hào)的形成。CTLA-4與IgFc段的融合蛋白也具有相似的作用阻礙T細(xì)胞活化：阻斷CD40-CD40L、CD2-LFA3等膜分子的相互作用誘導(dǎo)特異性耐受：借助基因工程技術(shù)，制備基因修飾的免疫細(xì)胞T細(xì)胞疫苗（Tcellvaccine,TCV）：誘導(dǎo)抗獨(dú)特型抗體的產(chǎn)生，破壞針對(duì)移植物的特異性T細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫耐受。

2.對(duì)移植抗原(kàngyuán)特異性免疫耐受誘導(dǎo)第四十九頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件第六節(jié)排斥反應(yīng)(fǎnyìng)的免疫監(jiān)測(cè)第五十頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件體液免疫與細(xì)胞免疫水平(shuǐpíng)檢測(cè)的臨床意義特異性抗體水平的檢測(cè)

相關(guān)免疫指標(biāo)：ABO等血型和HLA抗體抗供者組織細(xì)胞抗體血管內(nèi)皮細(xì)胞抗體冷凝集素

測(cè)定方法:交叉配型、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(dúxìnɡ)試驗(yàn)

血清PRA水平:判斷器官移植時(shí)受體對(duì)移植物的敏感程度，基于細(xì)胞毒性試驗(yàn)的PRA測(cè)定，被作為心臟移植前的常規(guī)項(xiàng)目，若PRA超過(guò)5％，則應(yīng)進(jìn)行供者淋巴細(xì)胞與受者血清的交叉配型，1.體液(tǐyè)免疫水平檢測(cè)的臨床意義第五十一頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件補(bǔ)體水平的檢測(cè)補(bǔ)體活性與急性移植排斥反應(yīng)的發(fā)生有關(guān)(yǒuguān)當(dāng)移植物遭受排斥時(shí)，補(bǔ)體成分的消耗增加可采用溶血法或比濁法進(jìn)行檢測(cè)。補(bǔ)體活性的檢測(cè)補(bǔ)體的裂解產(chǎn)物，如C3a、C3b、C3d等的測(cè)定常用的檢測(cè)方法有免疫電泳、免疫標(biāo)記技術(shù)第五十二頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件2.細(xì)胞免疫水平(shuǐpíng)檢測(cè)的臨床意義外周血T細(xì)胞及其亞類的計(jì)數(shù)免疫熒光法或流式細(xì)胞儀測(cè)定T細(xì)胞及其亞群，在急性排斥反應(yīng)臨床癥狀出現(xiàn)前1～5天，T細(xì)胞總數(shù)和CD4/CD8比值升高，巨細(xì)胞病毒感染時(shí)此比值降低(jiàngdī)。CD4/CD8比值大于1.20時(shí):預(yù)示急性排斥即將發(fā)生，CD4/CD8比值小于1.08時(shí):發(fā)生感染的可能性很大。若進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)急性排斥反應(yīng)和感染具有鑒別診斷的意義NK細(xì)胞活性測(cè)定免疫抑制劑抑制了受者機(jī)體殺傷細(xì)胞的活性，但在急性排斥時(shí)明顯升高

混合淋巴細(xì)胞反應(yīng):刺激細(xì)胞:滅活的供者的淋巴細(xì)胞反應(yīng)細(xì)胞:受者淋巴細(xì)胞結(jié)果顯示的是CTL和NK細(xì)胞共同作用的結(jié)果。動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)NK細(xì)胞活性則意義更大第五十三頁(yè)，共五十八頁(yè)。整理課件血清(xuèqīng)細(xì)胞細(xì)胞因子測(cè)定

IL-1、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ等細(xì)胞因子的水平均可升高

個(gè)體間血清IL-2R的含量差別顯著粘附分子及其配體的檢測(cè)免疫細(xì)胞以及血管內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞膜表面粘附分子及其配體的表達(dá)，與急性排斥反應(yīng)的發(fā)生密切相關(guān)。諸如ELAM-1、VCAM、ICAM和HLA分