微生物檢驗(yàn)第十章G需氧桿菌

微生物檢驗(yàn)第十章G需氧桿菌第1頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2

第一節(jié)炭疽芽胞桿菌

炭疽是人畜共患的急性傳染病主要是牛、羊等食草類動(dòng)物的傳染病，人可通過(guò)接觸或攝食病畜及畜產(chǎn)品而感染皮膚炭疽、腸炭疽、肺炭疽等，可并發(fā)敗血癥，甚至炭疽性腦膜炎第2頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3致病物質(zhì)莢膜：抗吞噬，有利于細(xì)菌在組織內(nèi)繁殖擴(kuò)散炭疽毒素：保護(hù)性抗原、致死因子、水腫因子第3頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4所致疾病

炭疽病：傳染源：患病食草動(dòng)物及其制品或被污染物傳播途徑：接觸——皮膚炭疽食用——腸炭疽吸入——肺炭疽可并發(fā)敗血癥，死亡率極高乙類傳染病(發(fā)生肺炭疽按甲類處理)病后可獲得持久免疫力第4頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5形態(tài)染色:致病菌中最大的G+桿菌，兩端平切、竹節(jié)狀有毒株可有明顯莢膜芽胞——橢圓形，小于菌體，位于菌體中央多在有氧條件下形成，25～30℃，在培養(yǎng)基中、土壤內(nèi)、動(dòng)物尸體解剖后暴露在空氣中，都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內(nèi)不形成芽胞，尸體嚴(yán)禁解剖二、微生物特性

革蘭染色×1000第5頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，生長(zhǎng)條件不嚴(yán)格，最適溫度30～35℃普通培養(yǎng)基—扁平、粗糙、不透明、灰白色、無(wú)光澤，邊緣不整齊的菌落，低倍鏡下菌落邊緣呈卷發(fā)狀BAP：12～15h不溶血，18～24h輕微溶血其他需氧芽胞桿菌大多溶血明顯而快速第6頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7肉湯—絮狀沉淀生長(zhǎng)明膠—37℃18～24h表面液化成漏斗狀，由于細(xì)菌沿穿刺線向四周擴(kuò)散形成倒松樹(shù)狀。NaHCO3BAP：

--有毒株—5%CO2、37℃24～48h、產(chǎn)生莢膜呈黏液型菌落，挑取時(shí)呈粘絲狀(鑒別要點(diǎn))--無(wú)毒株—粗糙型菌落第7頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月8生化反應(yīng)：分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、蕈糖，有些菌能遲緩發(fā)酵甘油和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解淀粉、還原硝酸鹽不產(chǎn)生吲哚和硫化氫、不利用檸檬酸鹽、不分解尿素在牛乳中生長(zhǎng)2～4天牛乳凝固→緩慢胨化觸酶（+）、卵磷脂酶弱（+）第8頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9菌體多糖抗原：與毒力無(wú)關(guān)，耐熱、耐腐敗，特異性不高。莢膜多肽抗原：與毒力有關(guān)，有抗吞噬作用，有利于細(xì)菌生長(zhǎng)和擴(kuò)散。莢膜腫脹試驗(yàn)，對(duì)本菌鑒定有意義芽胞抗原：血清學(xué)診斷價(jià)值炭疽毒素：保護(hù)性抗原（PA)、致死因子（LF）、水腫因子（EF）三個(gè)組分。單獨(dú)皆無(wú)致病性，與PA結(jié)合才顯示出致病性具有抗吞噬和免疫原性。

抗原構(gòu)造：第9頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月10抵抗力：--芽胞抵抗力很強(qiáng)，煮沸10min或干熱140℃3h才能殺滅--在干燥土壤中或皮毛中常溫下存活數(shù)十年致病力不減，牧場(chǎng)一旦污染，傳染性可持續(xù)數(shù)十年--生物武器第10頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月11--芽胞對(duì)化學(xué)消毒劑抵抗力不一，對(duì)碘和氧化劑較敏感，常用以下方法殺菌：

1：2500碘10min、

3%H2O21h、

4%高錳酸鉀15min、

0.5%過(guò)氧乙酸10min--對(duì)磺胺、青霉素、鏈霉素、四環(huán)素、紅霉素、氯酶素均敏感第11頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月12要求快速檢出、分離鑒定病原菌，以利早期確診、查清疫源、及時(shí)治療和采取預(yù)防對(duì)策三、微生物學(xué)檢驗(yàn)第12頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月13標(biāo)本的采集與處理皮膚炭疽：病灶深部標(biāo)本肺炭疽：痰和血液腸炭疽：糞、嘔吐物腦膜炭疽：CSF、血液死于敗血癥的動(dòng)物，嚴(yán)禁宰殺和解剖，可消毒皮膚后割取耳朵、舌尖采集少量血液，局限性病灶可取病變組織或附近淋巴結(jié)。第13頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月14無(wú)雜菌污染標(biāo)本：直接接種肉湯增菌或固體培養(yǎng)基污染雜菌固體標(biāo)本：加10倍量生理鹽水充分浸泡，振蕩10～15min、靜置10min，取懸液65℃水浴30min或

85℃5min殺死雜菌，保留芽胞活性，再增菌和培養(yǎng)污染雜菌液體標(biāo)本：離心，棄上清液后，加0.5%洗滌劑振蕩10～15min，離心取沉淀物增菌和分離培養(yǎng)第14頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月15生化反應(yīng)噬菌體裂解青霉素抑制毒力試驗(yàn)檢驗(yàn)程序皮毛、腐敗臟器等血液Ascoli試驗(yàn)以NG制成懸液經(jīng)加溫或飽和尿素處理肉湯增菌培養(yǎng)BAP或戊烷脒平板2%兔血清肉湯4-8hG染色鏡檢菌落特征動(dòng)力觀察串珠試驗(yàn)確定報(bào)告莢膜腫脹試驗(yàn)第15頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月16痰、嘔吐物、CSF及炎癥分泌物2%兔血清肉湯快速增菌37℃4h莢膜腫脹試驗(yàn)直接涂片莢膜染色G染色初步報(bào)告0.2ml注射小白鼠腹腔，8h后解剖涂片G染色、莢膜染色初步報(bào)告第16頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月17涂片染色：--G染色、莢膜染色、芽胞染色—初步報(bào)告--莢膜熒光抗體染色核酸檢測(cè)：核酸雜交分離培養(yǎng)：--BAP、戊烷脒多粘菌素B平板--2%兔血清肉湯增菌→分離培養(yǎng)第17頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月18鑒定試驗(yàn)：形態(tài)和菌落特征生化試驗(yàn):串珠試驗(yàn):--接種于含青霉素(0.05～0.5U/ml)的肉湯中，37℃6h，大而均勻成串的圓球狀菌體--與青霉素抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成有關(guān)--類炭疽無(wú)此現(xiàn)象第18頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月19青霉素抑制試驗(yàn)：接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板，37℃24h生長(zhǎng)受抑制不生長(zhǎng)串珠和青霉素抑制聯(lián)合試驗(yàn)：兔血瓊脂平板抑菌環(huán)青霉素紙片青霉素1U／片紙片貼于平板，37℃1—2h，低倍鏡下觀察，可見(jiàn)紙片周圍有一無(wú)菌生長(zhǎng)的抑菌環(huán)，其外周青霉素濃度低,菌體細(xì)胞壁受抑而成為串珠。第19頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月20

噬菌體裂解試驗(yàn)：AP631炭疽噬菌體

NaHCO3毒力試驗(yàn)：接種于含0.5%NaHCO3和10%馬血清的平板，

10%CO2、37℃、24～48h

有毒株形成莢膜—黏液型菌落無(wú)毒株不形成莢膜—粗糙型菌落動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠、家兔或豚鼠皮下接種第20頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月21植物凝集素試驗(yàn)：Ascoli熱沉淀試驗(yàn)：可作追溯性診斷第21頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月22第二節(jié)蠟樣芽胞桿菌食物中毒含菌量達(dá)105/g以上嘔吐型——耐熱腸毒素腹瀉型——不耐熱腸毒素全眼球炎（外傷后）心內(nèi)膜炎、敗血癥和腦膜炎第22頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月23夏、秋季多見(jiàn)食物有米飯、乳品、禽畜肉類、果汁飲料等，大多為加熱烹調(diào)過(guò)的熟食在米飯中極易繁殖，由米飯受污染引起的食物中毒在國(guó)內(nèi)、外均為常見(jiàn)中毒食物大多無(wú)腐敗、變質(zhì)現(xiàn)象，感官性狀正常，應(yīng)引起注意第23頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月24形態(tài)與染色：-G+大桿菌-生長(zhǎng)6h后即形成圓形芽胞、位于菌體中心或次末端、不突出菌體-菌體兩端平截，多數(shù)呈鏈狀排列-引起食物中毒的菌株多有周鞭毛、無(wú)莢膜二、微生物特性第24頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月25培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧營(yíng)養(yǎng)要求不高最適溫度30~35℃普通瓊脂平板：菌落較大，灰白色，表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有蠟樣光澤第25頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月26BAP—有β溶血卵黃平板—生長(zhǎng)迅速，培養(yǎng)3h后，雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷脂而形成白色的混濁環(huán)，稱乳光反應(yīng)或卵黃反應(yīng)第26頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月27生化反應(yīng)：能分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、水楊素、糊精，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣能胨化牛乳，液化明膠，VP（+）、卵磷脂酶（+）多次傳代后生化特性?？筛淖兊?7頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月28抵抗力：耐熱，肉湯中細(xì)菌需100℃20min才能殺死，食物中毒菌株的游離芽胞耐受100℃30min、干熱120℃60min才能殺死對(duì)氯霉素、紅霉素、慶大霉素敏感，對(duì)青霉素、磺胺、呋喃類耐藥第28頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月29三、微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集：可疑食物、糞便、嘔吐物，因食品暴露于空氣中，在一定程度都會(huì)受到本菌污染，所以不能分離出該菌就認(rèn)為是引起食物中毒的病原菌。第29頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月30確診由該菌引起的食物中毒必須：從食物中分離出菌數(shù)≥105CFU/g，提示本菌活躍生長(zhǎng)，構(gòu)成潛在危險(xiǎn)從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或)嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型第30頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月31檢驗(yàn)程序嘔吐物、殘留食物等活菌計(jì)數(shù)

接種普通瓊脂平板、BAP、卵黃平板37℃18-24h純培養(yǎng)動(dòng)物試驗(yàn)（腸毒素測(cè)定）生化反應(yīng)血清凝集（分型）報(bào)告結(jié)果直接涂片染色鏡檢第31頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月32檢驗(yàn)方法：直接鏡檢分離培養(yǎng)與活菌計(jì)數(shù)普通瓊脂平板、BAP、卵黃平板鑒定與分型：根據(jù)菌落特點(diǎn)、形態(tài)染色、生化反應(yīng)等初步鑒定生化分型、血清分型、噬菌體分型，腸毒素檢測(cè)第32頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月33產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌

（Listeriamonocytogenes

)

致病物質(zhì)：李斯特菌溶血素O(LLO)——主要毒力因子內(nèi)在素——表面蛋白（侵襲性蛋白）磷脂酶C第33頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月34所致疾病:健康帶菌者是主要的傳染源污染食物，糞-口途徑傳播，通過(guò)腸道擴(kuò)散全身胎盤和產(chǎn)道——感染新生兒接觸病畜及產(chǎn)品——眼和皮膚的局部感染第34頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月35（二）微生物特性形態(tài)與染色：

G+短小桿菌，形態(tài)與培養(yǎng)時(shí)間有關(guān)-37℃3～6h，菌體主要呈桿狀，隨后以球桿狀為主，3～5天常形成長(zhǎng)絲狀無(wú)芽胞，一般不形成莢膜，在含血清的葡萄糖蛋白胨水中能形成粘多糖莢膜第35頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3620～25℃形成周鞭毛，有動(dòng)力；37℃時(shí)鞭毛很少或無(wú)細(xì)菌接種半固體培養(yǎng)基，置室溫，由于動(dòng)力強(qiáng)，細(xì)菌自穿刺線向四周彌漫生長(zhǎng)，在離瓊脂表面數(shù)毫米處出現(xiàn)一個(gè)倒傘形的生長(zhǎng)，是本菌特征之一第36頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月37培養(yǎng)特性：兼性厭氧菌、生長(zhǎng)溫度范圍廣0.5～45℃均生長(zhǎng)（4℃冷增菌），最適30～37℃營(yíng)養(yǎng)要求不高，在含血液、血清、腹水的培養(yǎng)基生長(zhǎng)更好BAP—極小的露滴狀、側(cè)光微顯藍(lán)綠色→灰白色菌落。狹窄的β溶血環(huán)萘啶酸選擇性平板—細(xì)密濕潤(rùn)、邊緣整齊的蘭色圓形小菌落肉湯——均勻混濁，表面有菌膜第37頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月38生化反應(yīng)：37℃24h，發(fā)酵葡萄糖、果糖、蕈糖、麥芽糖和水楊素產(chǎn)酸不產(chǎn)氣觸酶（+）甲基紅（+）VP（+）水解七葉苷、水解精氨酸產(chǎn)氨CAMP（+）第38頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月39分型：根據(jù)O抗原和H抗原，分4個(gè)血清型，

1、3、4型可分若干亞型抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，與地理分布有聯(lián)系與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸桿菌等有共同抗原第39頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月40抵抗力：耐鹽、耐堿、不耐酸對(duì)熱、常用消毒劑敏感多種抗生素敏感，首選氨芐青霉素，青霉素、鏈霉素、紅霉素等也敏感對(duì)桿菌肽、多粘菌素耐藥第40頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月41（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集：血液、CSF、宮頸、陰道、鼻煙分泌物等直接涂片：

--在CSF標(biāo)本中成對(duì)排列，形如球菌，易誤認(rèn)為肺炎鏈球菌

--G染色過(guò)度脫色形似流感桿菌

--有時(shí)與類白喉?xiàng)U菌也極易混淆可用該菌1型和4型及多價(jià)熒光抗體染色，同時(shí)作動(dòng)力檢查第41頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月42分離培養(yǎng)：BAP、巧克力平板雜菌污染標(biāo)本可用20%NaCl心腦浸液肉湯2支

1支—10%CO2，37℃24～48h→分離培養(yǎng)（BAP、萘啶酸選擇性平板）

1支—4℃“冷增菌”→分離培養(yǎng)（每24h一次，共4次，以后每周一次，至少4周）第42頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月43鑒定：形態(tài)特征、菌落特點(diǎn)、動(dòng)力及生化反應(yīng)作出鑒定可疑菌落用已知李斯特菌1型、4型或多價(jià)抗血清做玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定與其他G+菌鑒別第43頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月44

觸酶動(dòng)力馬尿酸鹽水解產(chǎn)單核李斯++-B群鏈球菌--+本菌有耐堿耐鹽的特點(diǎn)，可用??試驗(yàn)與腸球菌鑒別第44頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月45二、紅斑丹毒絲菌毒力與其產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸酶有關(guān)，能使細(xì)菌粘附至靶細(xì)胞從事屠宰、經(jīng)營(yíng)魚(yú)類和皮革行業(yè)的人員及獸醫(yī)等感染機(jī)會(huì)較多通過(guò)破損皮膚侵入，引起局限性皮膚病灶，通常稱“魚(yú)毒”或“類丹毒”第45頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月46（二）微生物特性形態(tài)與染色：

G+桿菌，菌體細(xì)長(zhǎng)、直或稍彎，單個(gè)或短鏈狀，慢性期分離的菌落為粗糙型，常呈長(zhǎng)絲狀，而且有分支及斷裂，與放線菌近似.無(wú)莢膜、無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛

紅斑丹毒絲菌革蘭染色1000×第46頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月47培養(yǎng)特性:厭氧或微需氧、初次分離需在厭氧環(huán)境，傳代后有氧環(huán)境也能生長(zhǎng)，最適溫度30-35℃。在含葡萄糖或血清培養(yǎng)基生長(zhǎng)旺盛BAP：35℃24h可形成兩種菌落光滑型：菌落細(xì)小、透明突起、發(fā)亮、邊緣整齊、質(zhì)軟易于懸于液體中，毒力較強(qiáng)粗糙型：菌落較大，顆粒狀、扁平、邊緣不齊可呈卷發(fā)狀，無(wú)毒力第47頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月48BAP上新分離的菌株有輕微的α溶血，培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)溶血現(xiàn)象明顯，傳代后溶血特性常消失含碲鹽的培養(yǎng)基——黑色菌落

第48頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月49

葡萄糖肉湯：培養(yǎng)24h后，呈輕微混濁，不形成菌膜，室溫靜置2~3天后，管底有少量灰色沉淀；粗糙型沉淀較多。

S-R變異同時(shí)毒力、抗原性也發(fā)生變異，但遺傳學(xué)上不穩(wěn)定，常出現(xiàn)互變。

第49頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月50（三）微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本：病灶邊緣組織碎片或皮膚病變抽出液直接涂片G染色鏡檢：G+細(xì)長(zhǎng)桿菌，有時(shí)長(zhǎng)絲形，單獨(dú)或呈短鏈狀。分離培養(yǎng)：1%葡萄糖肉湯，35℃5%CO2環(huán)境增菌，每日移種BAP，可出現(xiàn)二種菌落（S型和R型）第50頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月51鑒定依據(jù)：

G+、H2S+、無(wú)動(dòng)力、觸酶-、吲哚-、VP-與產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌鑒別（表11-2）新霉素敏感試驗(yàn)：紅斑丹毒絲菌—R

產(chǎn)單核李斯特菌—S動(dòng)物毒力試驗(yàn)：對(duì)小鼠、大鼠、兔、鴿均有致病性，0.2ml的2~4天培養(yǎng)物注入小鼠腹腔，4-5天后，敗血癥而死，心血培養(yǎng)（+）第51頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月52第四節(jié)

陰道加特納菌屬于加特納菌屬,此菌屬只有本菌一個(gè)種與非特異性陰道炎（細(xì)菌性陰道?。┯嘘P(guān)第52頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月53二、微生物特性形態(tài)與染色：

--G染色視菌株和菌齡不同而異，實(shí)驗(yàn)室保存菌株趨向G-，新鮮臨床標(biāo)本中分離的菌株趨向G+，生長(zhǎng)在高濃度的血清中呈G+

--具有多形性，兩端鈍圓，無(wú)芽胞、無(wú)莢膜、無(wú)鞭毛第53頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月54培養(yǎng)特性：

兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求較高，在含5%人血瓊脂平板上3%～5%CO2、35～37℃環(huán)境中培養(yǎng)48h后，可形成0.3～0.5mm大小、圓形、光滑不透明的菌落，在兔血平板上可出現(xiàn)β溶血，在羊血平板上不溶血。第54頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月55生化反應(yīng)：氧化酶-、觸酶-、尿素酶-發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等產(chǎn)酸不產(chǎn)氣水解馬尿酸鈉和淀粉，吲哚-、明膠液化-、甘露醇分解-抵抗力：對(duì)氨芐青霉素、羥氨芐青霉素、苯唑青霉素、青霉素、萬(wàn)古霉素、甲硝噠唑敏感，對(duì)萘啶酸、新霉素、多粘菌素和磺胺嘧啶耐藥。第55頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月56三、微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集：陰道和宮頸分泌物等直接濕片鏡檢：大量陰道上皮細(xì)胞，少量膿細(xì)胞及無(wú)數(shù)成簇的細(xì)小桿菌群集并吸附于上皮細(xì)胞表面，使細(xì)胞特別是邊緣不清，呈鋸齒形，即為線索細(xì)胞第56頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月57涂片染色鏡檢：觀察線索細(xì)胞，了解陰道菌群狀況，常見(jiàn)大量小的G-和染色不定的桿菌和球桿菌，而無(wú)大的G+桿菌（乳酸桿菌）pH測(cè)定：pH＞4.5，提示細(xì)菌性陰道病胺試驗(yàn)：滴加10%KOH即發(fā)出魚(yú)腥嗅為“+”第57頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月58分離培養(yǎng)：

5%人血瓊脂平板、35℃、5%CO2環(huán)境48h鑒定：菌落、涂片染色、氧化酶-、觸酶-、糖發(fā)酵及其他生化反應(yīng)第58頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月59分泌物（陰道、宮頸）新鮮濕片（找線索細(xì)胞）涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)（5%人血平板）β溶血菌落純培養(yǎng)（5%人血平板）觸酶（-）氧化酶（-）GV的主要鑒定試驗(yàn)初步報(bào)告最后報(bào)告第59頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)

棒狀桿菌屬

第60頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

棒狀桿菌屬是一群革蘭染色陽(yáng)性桿菌，菌體形態(tài)特征是在其一端或兩端常呈棒狀膨大，故名，歸屬放線菌科。

棒狀桿菌屬概述第61頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月棒狀桿菌屬種類繁多，主要有：白喉棒狀桿菌（C.diphtheriae）假白喉棒狀桿菌（C.pseudodiphtheriticum）干燥棒狀桿菌（C.xerosis）化膿棒狀桿菌（C.pyogenes）潰瘍棒狀桿菌（C.ulcerans）假結(jié)核棒狀桿菌（C.pseudotuberculosis）溶血棒狀桿菌（C.haemolyticum）J-K群棒狀桿菌（C.jeikeium-CDCgroupJK）第62頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月G+桿菌、一端或兩端膨大成棒狀染色不均勻，兩端濃染或有異染顆粒無(wú)鞭毛、無(wú)芽胞排列不規(guī)則，呈柵欄狀白喉棒狀桿菌——致病菌類白喉棒狀桿菌——條件致病菌第63頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月白喉棒狀桿菌

C.diphtheriae第64頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月致病物質(zhì)

(一)白喉外毒素毒力強(qiáng)，130ng/kg可使人死亡抗原性強(qiáng)編碼外毒素的tox基因——β-棒狀桿菌噬菌體一、臨床意義第65頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月作用機(jī)制：

A亞單位可使細(xì)胞延伸因子-2（EF-2）滅活，影響蛋白質(zhì)的合成作用特點(diǎn)：毒性作用大，1分子能殺一個(gè)細(xì)胞作用于多種細(xì)胞，心肌、神經(jīng)細(xì)胞均有毒素受體腫瘤細(xì)胞對(duì)此毒素敏感第66頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）索狀因子細(xì)菌表面的一種糖脂，能破壞細(xì)胞的線粒體，影響細(xì)胞的呼吸與磷酸化（三）K抗原--細(xì)胞壁外面的一種不耐熱糖蛋白--抗吞噬--有利于細(xì)菌在黏膜表面的定植第67頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月所致疾?。喊缀?-急性呼吸道傳染病傳染源：患者及帶菌者傳播途徑：飛沫或污染臨床表現(xiàn)細(xì)菌------上呼吸道粘膜，生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素細(xì)菌與毒素共同作用引起局部炎癥：炎性滲出，壞死，纖維蛋白→→假膜→→窒息毒素→→血液→→全身中毒癥狀外周N---N炎：膈肌麻痹---呼吸困難聲帶麻痹---聲音嘶啞軟頜麻痹---吞咽困難心肌---心肌炎第68頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

白喉假膜第69頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抗毒素免疫感染后機(jī)體可獲得牢固的免疫力機(jī)體還可通過(guò)其它方式獲得免疫力：六月以下嬰兒---------母親成人---------------------隱性感染、人工主動(dòng)免疫易感者：1~5歲兒童成人---也有可能免疫性：第70頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、生物學(xué)特性形態(tài)與染色:G+細(xì)長(zhǎng)微彎的桿菌一端或兩端膨大呈棒狀常排列呈V、L、X等文字形異染顆粒——形態(tài)上的鑒別特征無(wú)莢膜、無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛白喉棒狀桿菌異染顆粒1000×第71頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月培養(yǎng)特性：需氧或兼性厭氧，最適溫度35～37℃營(yíng)養(yǎng)要求高，在含血液、血清、雞蛋的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好呂氏（Loeffler)血清斜面或雞蛋斜面：生長(zhǎng)最快，6h即生長(zhǎng)，10～12h長(zhǎng)出灰白色、濕潤(rùn)、有光澤的光滑型菌苔/菌落，菌體形態(tài)典型、異染顆粒明顯，連續(xù)傳代可保持形態(tài)和產(chǎn)毒性能不變第72頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

BAP中菌落BAP：菌落灰白色、光滑型、直徑1～2mm、有狹窄

β溶血環(huán)（輕型）多次傳代后菌體變?yōu)榍蛐偷?3頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月亞碲酸鉀BAP：選擇鑒別培養(yǎng)基黑色菌落——鑒別依據(jù)不同菌型還原能力不同，呈現(xiàn)黑色或灰黑色菌落根據(jù)菌落特征及生化反應(yīng)特點(diǎn)可將本菌分為：重型、中間型、輕型白喉棒狀桿菌在亞碲酸鉀BAP中菌落第74頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月液體培養(yǎng)基：生長(zhǎng)較好，但菌型不同其生長(zhǎng)特點(diǎn)也不相同第75頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月生化反應(yīng)：分解葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、果糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、甘露糖，一般不分解蔗糖，吲哚（-）、硝酸鹽還原（+）、觸酶（+）、氧化酶（-）、明膠液化（-）尿素（-）重型能分解淀粉、糖原、糊精，遲緩分解蔗糖第76頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抵抗力：對(duì)干燥、寒冷和日光抵抗力較其他無(wú)芽胞細(xì)菌強(qiáng)，在干燥的假膜中可生存3個(gè)月對(duì)青霉素、紅霉素等敏感，對(duì)磺胺不敏感第77頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、微生物學(xué)檢驗(yàn)分離出白喉?xiàng)U菌，并證明其毒力1、標(biāo)本采集：分泌物取雙份如不能及時(shí)檢驗(yàn)，標(biāo)本浸于無(wú)菌生理鹽水或15%甘油生理鹽水保存第78頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、微生物學(xué)檢驗(yàn)2、標(biāo)本直接檢查，初步報(bào)告3、分離培養(yǎng)4、鑒定5、毒力試驗(yàn)第79頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月直接涂片染色鏡檢：--2～3張涂片→G染色、異染顆粒染色鏡檢——初報(bào)“直接涂片檢出形似白喉?xiàng)U菌”——早期診斷--用無(wú)菌棉拭子浸以動(dòng)物血清，采集標(biāo)本，37℃10h，涂片染色鏡檢——提高陽(yáng)性率第80頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月分離培養(yǎng)：呂氏血清斜面：

37℃、8～12h→→涂片染色鏡檢--檢出率要比直接涂片高，有助于快速診斷亞碲酸鉀BAP：

37℃、24～48h，黑色菌落BAP：

輕型有β溶血環(huán)，應(yīng)注意與溶血性鏈球菌鑒別第81頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鑒定：形態(tài)染色、菌落特點(diǎn)、生化反應(yīng)糖發(fā)酵試驗(yàn)、尿素酶、硝酸鹽還原

—鑒別棒狀桿菌屬不同的種白喉：葡萄糖（+）、麥芽糖（+）蔗糖（-）第82頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月毒力試驗(yàn)（鑒定致病菌株的重要依據(jù)）體外法：瓊脂平板毒力試驗(yàn)（Elek平板毒力測(cè)定）SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)對(duì)流電泳瓊脂平板毒力試驗(yàn)-Elek平板對(duì)流免疫電泳第83頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鑒定流程第84頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月防治原則：--人工主動(dòng)免疫——白喉類毒素DPT混合疫苗：白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類毒素--人工被動(dòng)免疫——白喉抗毒素+白喉類毒素--治療：抗毒素+抗生素早期足量注射白喉抗毒素，使毒素在與細(xì)胞結(jié)合以前被抗毒素中和第85頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

類白喉棒狀桿菌第86頁(yè)，課件共94頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

除白喉棒狀桿菌外，在鼻腔、咽喉部、外耳道、眼結(jié)膜、外陰和皮膚等處可見(jiàn)一些類似白喉棒狀桿菌的