PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增

PCR技術原理及人SRY基因擴增

PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增DNA的結構PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增DNA的復制模板：基因組DNA原料：游離的核苷酸

A、G、C、T催化劑：DNA聚合酶需要的條件：活細胞內的微觀環(huán)境PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增DNA的復制PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增體內invivo體外invitroDNA的復制PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增PCR技術的發(fā)明KaryB.Mullis

CalifornianhighwayPCR技術原理講解及人的SRY基因擴增Khorana(1971)等提出在體外經DNA變性,與適當引物雜交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的設想。1983年,Mullis發(fā)明了PCR技術,使Khorana的設想得到實現(xiàn)。1988年Saiki等將耐熱DNA聚合酶（Taq）引入了PCR技術。1989年美國《Science》雜志列PCR為十余項重大科學發(fā)明之首,比喻1989年為PCR爆炸年,Mullis榮獲1993年度諾貝爾化學獎。PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增PCR技術的特點1）高度的靈敏性2）特異性3）操作簡便易行4）用途廣泛30輪循環(huán)擴增量達230個拷貝（109拷貝）PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增生命科學：DNA重組、轉基因生物醫(yī)學工程：基因疫苗、產前診斷疾病診斷：艾滋病、禽流感法醫(yī)學：血跡、精斑等痕跡DNA考古學：遠古人類、猛犸DNAPCR技術的應用PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增人的性別決定PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增人的性別決定FatherMother22pairs+XY22pairs+XX22+X22+Y22+Xspermegg22pairs+XX22pairs+XYGirlBoyPCR技術原理講解及人的SRY基因擴增

1959年生物學家發(fā)現(xiàn)Y染色體決定人（和老鼠）的男性特征;

1975年，Wachtel等提出Y染色體上有一個組織相容性抗原的基因H-Y和男性決定有關;

1987年,DavidPage認為Y染色體上一個特定的基因ZFY是決定男性的基因;

1988年,澳大利亞的Sinclair實驗室發(fā)現(xiàn)袋鼠類的ZFY基因不在Y染色體上，而是在常染色體上;

1990年，澳大利亞女科學家MarshallGraves和英國的Lovell-Badge兩個實驗室發(fā)現(xiàn)另外一個基因SRY。PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增人的性別決定————————YSRY男性PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增利用PCR技術檢測SRY基因男性，有SRY——陽性結果女性，無SRY——陰性結果應用：奧運會運動員的性別鑒定犯罪現(xiàn)場血痕、毛發(fā)的性別鑒定野生動物的性別鑒定······男女PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增

總體積25lBuffer緩沖液

dNTP原料

Primer引物

DNA分子模板

Taq酶DNA聚合酶

反應體系PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增移液器（pipette）槍頭（tips）反應管（tube）PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增95℃3min；94℃30s、52℃30s、72℃30s30個循環(huán)；72℃延伸5min.PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增核酸電泳1.根據欲分離DNA片段大小用凝膠緩沖液配制適宜濃度的瓊脂糖凝膠：準確稱量瓊脂糖干粉，加入到配膠用的三角燒瓶內，定量加入電泳緩沖液。PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增2.放入到微波爐內加熱熔化PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增3.冷卻片刻，加入一滴熒光染料，輕輕旋轉以充分混勻凝膠溶液，倒入電泳槽中，待其凝固。凝膠完全凝結，小心拔出梳子，將凝膠安放在電泳槽內PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增4.向電泳槽中倒入電泳緩沖液，其量以沒過膠面1mm為宜，如樣品孔內有氣泡，應設法除去。PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增5.在DNA樣品中加入10×體積的載樣緩沖液（loadingbuffer），混勻后，用槍將樣品混合液緩慢加入被浸沒的凝膠加樣孔內。PCR技術原理講解及人的SRY基因擴增6.接通電源，紅色為正極，黑色為負極，切記DNA樣品由負極往正極泳動(靠近加樣孔的一