丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（ALT-SOP）

PAGE6-生物技術(shù)有限公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作程序StandardOperatingProcedures版本：V1：A0執(zhí)行日期：2007-05-02共6頁標(biāo)準(zhǔn)操作程序項目：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶方法：連速監(jiān)測法文件編號ELK-SH-SOP-07-003編寫者日期審核者日期批準(zhǔn)者日期頒發(fā)部門或個人接收部門或個人院長辦公司保管者院檔案室保管者醫(yī)務(wù)科保管者檢驗科主任臨床化學(xué)檢驗室發(fā)布日期：2007年4月2日實施日期：2007年4月3日前言為使臨床檢驗操作規(guī)范化，指導(dǎo)檢驗人員嚴(yán)格按規(guī)程進行正確的常規(guī)操作，保證檢驗質(zhì)量，特制定本操作規(guī)程。本規(guī)程的編寫遵循了ISO15189《醫(yī)學(xué)實驗室——關(guān)于質(zhì)量和能力的特殊要求》及WS/T227-2002《

臨床檢驗操作規(guī)程編寫要求》的有關(guān)規(guī)定并結(jié)合產(chǎn)品實際情況制訂，作為本產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。本規(guī)程從2007年5月2日起實施，每2年復(fù)審1次。本規(guī)程由浙江生物技術(shù)有限公司編制。本規(guī)程起草單位：生物技術(shù)有限公司技術(shù)部。本規(guī)程主要起草人：XXXXXXX、XXXXXXX、XXXXXXX。本規(guī)程首次起草。XXXXXXXX人民醫(yī)院檢驗科2007年4月2日目

錄1檢驗申請…………………32標(biāo)本采集與處理…………………………33試劑及成份…………………………44方法原理……….…………45儀器……….……………….…………46校準(zhǔn)液及校準(zhǔn)模式………………………47質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則…………………48標(biāo)本檢測步驟………….…………………59結(jié)果計算…………………510操作性能………………511試劑使用的注意事項……………...……512參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平………………………..……513檢驗結(jié)果的報告及范圍………………………..………514臨床意義……….….……615結(jié)果審核分析以及相關(guān)項目的聯(lián)系..……………………..……..……616威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定.…………………..…617有關(guān)引用程序與文件………………..….618參考文獻附錄AXXX型生化分析儀參數(shù)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.檢驗申請單獨檢驗項目申請：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AlanineAminotransferase,縮寫(ALT/GPT）測定；組合項目申請：肝功能測定項目組合。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2.標(biāo)本采集與處理2.1受檢者的準(zhǔn)備：病人空腹12h，不飲酒24h后。體檢對象抽血前應(yīng)有兩周的正常狀況記錄。注意有無應(yīng)用影響測試項目的藥物。此外，對于體檢者，采血的季節(jié)都應(yīng)做相關(guān)記錄，因為樣本中各項目的含量有季節(jié)性變動，為了前后比較應(yīng)在每年同一季節(jié)檢驗。應(yīng)囑體檢對象在抽血前24小時內(nèi)不做劇烈運動。2.2標(biāo)本采集2.2.1除非是臥床的病人，一般在采血時取坐位。體位影響水分在血管內(nèi)外的分布，會影響測試項目的濃度。在采血前至少應(yīng)靜坐5分鐘，一般從肘靜脈取血，使用止血帶的時間不超過1分鐘，穿刺成功后立即松開止血帶，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的黃色蓋子SST真空采血管，如為急診標(biāo)本，使用淺綠色蓋子PST試管。2.2.2檢驗申請單和血標(biāo)本試管上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.2.3標(biāo)本采集后，在檢驗申請單上填寫標(biāo)本采集時間，如為急診標(biāo)本，加上急查標(biāo)識。2.2.4標(biāo)本采集后與檢驗申請單一起及時運送至檢驗科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.2.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.2.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.2.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、黃疸和渾濁的標(biāo)本。2.2.5.3對無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.2.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.3標(biāo)本處理2.3.1接收標(biāo)本在室溫放置30min～45min后離心分離血清或血漿。吸出血清或血漿,標(biāo)本應(yīng)立即測量。處理樣品時要將其當(dāng)成生物污染品。2.3.2標(biāo)本保存時間：20-25℃穩(wěn)定1天；4-8℃穩(wěn)定7天；-20℃穩(wěn)定1個月。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1d的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.3.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置2～8℃冰箱內(nèi)保存7d。2.4標(biāo)本的注意事項2.4.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。2.4.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素或EDTAK2（1mg/mL）作為抗凝劑。2.4.3應(yīng)該在4小時內(nèi)測定完畢，否則按要求保存標(biāo)本。血清不宜反復(fù)冷凍保存，以免影響酶的活性。2.4.4血清中含有酮酸能消耗NADH，使結(jié)果偏高；血清中谷氨酸脫氫酶增高時，在有氨存在的條件下，亦消耗NADH，使結(jié)果偏高2.4.5血清標(biāo)本出現(xiàn)溶血、脂血、黃疸或抗壞血酸的干擾情況參見抗干擾能力。3.試劑及成份3.1試劑本科使用的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶檢測試劑盒，由浙江生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),產(chǎn)品貨號為:XXX,試劑為液體試劑，其組份如下：組成R1:R2=2:1混合后溶液的濃度R1:Tris緩沖液:80mmol/LPH=7.8NADH0.18mmol/LLDH>1200U/LR2:起動液L-丙氨酸450mmol/La-酮戊二酸18mmol/L3.2試劑盒保存及效期未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定28d。開蓋后避免污染。當(dāng)試劑變混濁，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。新打開試劑不宜與已用過的試劑混合在一起,否則易造成試劑穩(wěn)定性下降。3.3試劑盒準(zhǔn)備液態(tài)試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.方法原理4.1測定方法：IFCC改良法。4.2原理：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶催化L-丙氨酸的氨基轉(zhuǎn)移，生成丙酮酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應(yīng)生成乳酸和NAD+。NADH在340nm處有特異吸收峰，其被氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在340nm處測定NADH下降速率，即可測出ALT活性。ALTL-丙氨酸+a-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸LDHNADH+丙酮酸+H+L-乳酸+NAD+5.儀器XXXX型號儀器。6.校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式6.1校準(zhǔn)品：使用XXXXX公司提供的復(fù)合校準(zhǔn)液或采用因數(shù)法。采用因數(shù)法時按照浙江生物技術(shù)有限公司提供的參數(shù)中樣本和試劑比例，理論因數(shù)=3376。實際因數(shù)可根據(jù)自行進行校準(zhǔn)。6.2標(biāo)準(zhǔn)類型和校準(zhǔn)點數(shù)目：線性模式，X個校準(zhǔn)點。6.3校準(zhǔn)周期：空白定標(biāo)：每日需做試劑空白定標(biāo)。全點定標(biāo)：①更換試劑批號或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；②儀器進行全面保養(yǎng)后；③儀器的重要零件更換后；均須需要全點定標(biāo)。6.4校準(zhǔn)液重建方法：XXXX復(fù)合校準(zhǔn)液用XXXX00ml蒸餾水溶解，輕輕混勻，20min后即可使用。7.質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則7.1質(zhì)控品采用XXX公司提供的PrecinormU（正常范圍質(zhì)控）和PrecipathU（病理范圍質(zhì)控）兩個水平的血清進行室內(nèi)質(zhì)控。產(chǎn)品號為10171778和10171743。7.2質(zhì)控液重建方法：用5.00ml蒸餾水溶解，輕輕混勻，20min后即可使用。7.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定至少兩個水平質(zhì)控血清各一次。7.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。7.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。8.標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進行校準(zhǔn)→進行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報告。9.結(jié)果計算ΔA/min×Vt×1000 樣品中ALT活性(U/L)==ΔA/min×Fe×Vs×d式中：ΔA/min——每分鐘吸光度變化率；e——NADH摩爾吸光系數(shù)6.22；Vt——反應(yīng)液總體積（ml）；d——比色杯光徑（cm）；1000——變化因數(shù)；Vs——標(biāo)本體積（ml）；10.操作性能10.1精密度：批內(nèi)CV2％，批間CV4％。10.2準(zhǔn)確度：測量結(jié)果在質(zhì)控血清靶值±2SD范圍內(nèi)。不同方法學(xué)試劑的質(zhì)控結(jié)果之間會存在差異，使用時請確保質(zhì)控選擇與試劑的方法學(xué)保持一致。10.3線性范圍：2～600/L（血清與試劑用量之比為1:12時）10.4方法的有限性及干擾因素：EDTA(2g/L)，檸檬酸鈉(116mmol/L)對本試驗有干擾。膽紅素1026μmol/L、甘油三酯11.4mmol/L無明顯干擾。磷酸吡哆醛能使血清中ALT顯示最大活性，使用不含有磷酸吡哆醛試劑測定ALT活性，某些疾病患者如腎臟病患者，可因血清中磷酸吡哆醛含量不足而致ALT活性低估。11.試劑使用的注意事項11.1本試劑僅應(yīng)用于體外診斷。11.2扔棄廢物應(yīng)符合當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)。11.3換算公式：U/l×0.0167=ukat/l12.參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶參考范圍（酶測定溫度37℃）男：3～50U/L；女：2～45U/L。13.檢驗結(jié)果的報告及范圍13.1結(jié)果的報告13.1.1結(jié)果經(jīng)審核確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。13.1.2報告單上標(biāo)明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。13.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。13.2報告范圍：血清與試劑用量之比為1:12時，測定上限為600U/L。超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，并經(jīng)上級主管技師審核后報告。14.臨床意義14.1ALT存在于各種組織細(xì)胞內(nèi)，以肝細(xì)胞中含量最多，正常時血清中ALT活性很低。14.2肝細(xì)胞因感染病毒而受損傷，尤其是處于急性期時，ALT從細(xì)胞內(nèi)逸出至血液中，血清中ALT活性可明顯升高，因此是各種肝炎患者檢查的一個重要指標(biāo)。14.3某些藥物對肝細(xì)胞有毒性副作用，過量或長期使用可致肝臟受損，亦可以ALT活性升高反映。14.4實質(zhì)性臟器有非感染性炎癥或損傷時，如脂肪肝、梗阻性高膽紅素癥、肝內(nèi)膽汁淤滯、膽管炎、膽囊炎、肝癌、急性心肌梗死、心肌炎、心力衰竭時的肝臟淤血等，均可成為血清ALT升高的原因。14.5ALT與AST聯(lián)合測定并計算其比值有助于對某些疾病的鑒別，正常情況下ALT/AST比值小于1，但在傳染性肝炎及其他原因引起的肝臟炎癥時，ALT/AST比值升高；肝硬化、肝癌、進行性肌營養(yǎng)不良、皮膚炎時，AST升高的幅度高于ALT。15.結(jié)果審核分析以及相關(guān)項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗結(jié)果的審核。15.2審核者認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，對發(fā)出報告結(jié)果的可靠性負(fù)責(zé)，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項目：審核與肝功能組合中其他項目、膽汁酸的關(guān)系，ALT/AST比值是否與疾病一致。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16.威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定16.1＞1000U/L為引起臨床重視的緊急值，可能有較嚴(yán)重的肝細(xì)胞壞死或受損的情況。16.2處理程序16.2.1檢測人員立即報告審核者。16.2.2審核者首先根據(jù)審核程序，分析質(zhì)控、定標(biāo)、試劑的情況是否正常，當(dāng)天其他已做標(biāo)本本項目的總體情況有無異常，確認(rèn)實驗有關(guān)的基礎(chǔ)是正常狀態(tài)中。16.2.3出現(xiàn)緊急值的標(biāo)本有無異常，該標(biāo)本其他相關(guān)項目有無異常，尤其是該患者其他肝功能指標(biāo)的情況。16.2.4對該標(biāo)本進行一次重復(fù)測定，確認(rèn)緊急值是否重現(xiàn)。16.2.5報告技術(shù)質(zhì)量主管及科主任