血液樣本的采集與處理方法

血液樣本的采集與處理方法一、血液樣品采集方法

(一)采血的物品準(zhǔn)備采樣箱、針頭、塑料試管、5ml或10ml注射器、離心管、離心管架、酒精棉球、干棉球、(豬嘴套)、不干膠標(biāo)簽、簽字筆、記號筆、采樣單、乳膠手套、防護服防護帽、一次性手套、一次性鞋套等物品。（二）、各種動物采血方法1、家禽血液采血方法：翼下靜脈采血、心臟采血、跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血、右側(cè)頸靜脈采血

采血方法的選擇，主要取決于采血的目的、所需血樣或血清的數(shù)量以及家禽的種類、年齡等。凡用血量較少的檢驗如血液涂片、雞白痢全血平板凝集驗等，可刺破冠、腳蹼皮下靜脈等組織，以吸管或毛細(xì)吸管直接取新鮮的血液；用中量血時可從頸、翅靜脈血管采集；當(dāng)需血量較多時可以從心臟采集。雛雞（1～30日齡）、水禽可采用跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血法，成雞（30日齡以上）可采用翅內(nèi)側(cè)翼下靜脈采血法。

（1）翼下靜脈采血法此法適宜于30日齡以上的家禽，尤其是成雞，不適用于雛禽和水禽。雛禽翼下靜脈較細(xì)，且水禽羽毛豐厚，采血時須拔去絨羽會造成皮下毛細(xì)血管血液滲出，不易看清靜脈位置，另外翅內(nèi)側(cè)皮膚松軟，血管位置不容易控制，采血時容易滾針，造成翅部瘀血，影響其活動及采食，也容易造成感染，影響經(jīng)濟效益。將被采雞只翅膀展開，露出腋窩，將羽毛拔去，即可見到明顯的翼根靜脈，翅靜脈是由翼根進入腋窩的一條較粗靜脈。用75%酒精消毒皮膚，抽血時用左手拇指、食指壓迫此靜脈向心端，血管即努張。右手拿注射器，針頭由翼根向翅膀方向沿靜脈平行刺入（約與皮膚呈15°角）血管內(nèi)，即可抽血?！锍轴槙r手要穩(wěn)，進針不宜過深，如刺穿血管，則很快引起皮下血腫，導(dǎo)致采血失敗。（2）跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血法優(yōu)點：①易于保定，血管位置明顯，血管不易滾動；②各個日齡的禽只均適用，尤其適用于水禽和雛禽。助手一手固定兩翼根部，另一手固定一腳，使禽側(cè)臥，禽腳朝向采血者。采血者左手固定另一腳，按住跖骨內(nèi)側(cè)的靜脈，使腿部靜脈突起，常規(guī)消毒后，右手持注射器與跖骨皮膚呈10°角順血管方向進針取血。跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血是向心方向采血，采血時要注意進針角度不能太大，回抽活塞的速度也不能過快。對日齡很小的雛禽，術(shù)者用左手中指及無名指夾住左腿，暴露跖骨內(nèi)側(cè)靜脈，方法同上。雛禽的血管細(xì)小，血流量很少，所以在抽血的過程中要特別緩慢?！糁红o脈采血：鴨、鵝仰臥保定，用手將兩腳固定，使趾部不動?！粝葘Ⅷ唫?cè)臥保定,抓住鴨的小腿,在最上一個腿趾,跗關(guān)節(jié)上方,有一小腿靜脈。（3）右側(cè)頸靜脈采血法左手以食指和中指夾住家禽頭部，并使頭偏向左側(cè)；常規(guī)消毒后，以拇指輕壓頸椎根部以使靜脈充血怒張。右手持注射器，挑破皮膚，傾斜30°左右角刺入靜脈取血液。右側(cè)頸靜脈較左側(cè)粗，故常采用右側(cè)。（4）心臟采血法心臟采血對心臟損傷較大，也易傷及其他臟器，造成內(nèi)臟出血，影響正常生長，甚至?xí)斐伤劳?，特別是雛雞，常因針頭刺破心臟和肝臟導(dǎo)致出血過多而死。心臟采血雖然較有難度，但是采血速度快、血量多、效率高，尤其適用于需要多量血液時采用。①4周齡以內(nèi)雛雞：先用手固定雞的翅膀，使雞胸骨脊朝上，用手指觸摸雞的心臟三角區(qū)，胸骨的前端，兩側(cè)鎖骨融合成“V”字形的地方（鴨、鵝兩鎖骨的聯(lián)合處較圓），能摸到心臟搏動最明顯的地方用酒精棉消毒后，以9-13號針頭（5ml注射器），呈45度角刺入2-3厘米至心臟，即可采得心血。★但要保持針尖指向胸腔中線，不宜偏斜（否則會刺傷肺組織），直至刺入心房，即可緩慢抽取血液。雞心臟采血應(yīng)在嗉囊空虛時進行，較為方便。②助手右手抓住雞雙腿，左手握住兩翅膀，使雞右側(cè)臥，左側(cè)面向上，放在小桌或小凳子上。術(shù)者自龍骨突起前緣引一直線到翅基，再由此線中點向髖關(guān)節(jié)引一直線，此線前1／3和中1／3的交界處有一凹陷，即是心臟采血進針的部位，食指觸摸該處可感覺心跳（15日齡內(nèi)雛雞更明顯）；或找出由胸骨走向肩胛部的皮下大靜脈，心臟約在該靜脈分支下側(cè)。局部拔毛，常規(guī)消毒，用7＃~9＃針頭的采血器從肋骨間隙垂直進針，一般刺入2～3cm如不回血可調(diào)整進針深度,直至回血為止。若調(diào)整幾次后仍不回血,可抽出針頭,在附近重新垂直刺入,切不可在雞胸腔內(nèi)任意調(diào)整針頭方向亂刺。若刺入心臟,可在1min內(nèi)采血3mL以上。2、豬采血方法豬血液樣品的采集方法采血位點豬的類型針頭規(guī)格采血量方法評價前腔靜脈≤45kg45-133kg成年豬20號（38mm）18號（65mm）16號（90mm）不限量可能損害迷走神經(jīng)；可用真空管頸靜脈所有年齡豬20號（38mm）不限量難采，可用真空管耳靜脈成年豬20號（25mm）或用刀片1-2ml易形成血腫，血樣易污染尾成年豬20號（25mm）5-10ml要有經(jīng)驗，可用真空管眼眶脈竇≤18kg18~54kg＞54kg至成年豬20號（25mm）16號（38mm）14號（38mm）5-10ml采樣慢；不雅觀；易造成采血后框內(nèi)出血而壓迫眼球股靜脈采血法因其容易污染形成靜脈炎而淘汰撓頭靜脈采血法隱靜脈采血法（1）、前腔靜脈采血①熟悉豬前腔靜脈的解剖學(xué)位置及解剖學(xué)特點要想做到準(zhǔn)確進針,首先就要了解豬前腔靜脈的解剖學(xué)構(gòu)造,充分掌握理論知識是進行該技術(shù)練習(xí)的第一步。位置：前腔靜脈是匯集頭、頸、前肢和部分胸壁血液的靜脈干。在胸前口處由左、右腋靜脈和左、右頸內(nèi)、外靜脈匯合而成，位于氣管和臂頭動脈總干的腹側(cè)，在心前縱隔內(nèi)向后延伸，注入右心房。采血部位就在一肋骨與胸骨柄結(jié)合處的前側(cè)方呈兩個明顯凹陷窩。根據(jù)解剖學(xué)位置判定,針頭刺入方向呈近似垂直并稍向中央及胸腔方向，刺入深度依豬體大小而定，一般在2.0一6.0厘米，依此而選用適宜的16—20號針頭。一般30kg以下豬宜用9#25mm(一次性注射器常配的針頭)，30kg以上豬宜用12#×38mm針頭。特點：豬前腔靜脈離頭部越近,則離皮膚越淺,靜脈越細(xì),越向胸部靜脈越粗,離皮膚越深。1周齡豬直徑約5mm,成年豬約1cm。采血時應(yīng)根據(jù)豬的大小、肥瘦程度選擇適當(dāng)?shù)倪M針部位。如小豬采血部位太靠前,則會由于血管太小很難扎中,因此,小豬采血部位應(yīng)略微靠后,而中大豬由于血管比較大,如果太往后,針頭就無去扎到血管,所以,大豬采血部位應(yīng)略微靠前。根據(jù)實踐經(jīng)驗,一般30kg以下的小豬進針部位應(yīng)在兩前肢與氣管交匯處,30kg以上的中大豬進針部位可選在頸部氣管兩側(cè)的低凹處。②方法:根據(jù)豬的大小確定站立提鼻法、手握前肢倒提法還是仰臥保定豬只。由助手將保定繩套于豬口腔上頜(在犬齒之后)行站立保定，將頭向上拉起約30。角，頭部偏向左側(cè)，采血部位為頸部下方最低凹處，即兩前肢腋窩與氣管交匯處(在頸下部沿中線伸延之間)。采血部位先用酒精棉球消毒，采血員手持注射器，進針前可先用拇指輕輕下壓以固定血管避免滑動，針頭偏向氣管約l5。角方向刺入血管，輕拉注射器活塞即見血液流入針管，抽取所需血量即可。★無論是前腔靜脈還是從頸靜脈采血均以選擇右側(cè)為宜。因為右側(cè)的迷走神經(jīng)分布到心臟和膈的分支較左側(cè)少。如果迷走神經(jīng)被意外刺中，豬會表現(xiàn)出呼吸困難、全身發(fā)紺和抽搐。實際上，操作熟練后，針頭有沒有扎中，憑手是可以感覺得到的，當(dāng)針頭扎破靜脈壁時，可以感覺得到輕微的“卜”的一聲。②、注意事項A做好保定按照豬體大小，采用不同保定方式。保定后要使豬體相對穩(wěn)定，不再左右搖動。（采用站立保定，使金屬環(huán)保定，要將頭部向前牽引，并稍稍抬高，使頭頸和體軀呈直線狀，這樣兩側(cè)胸前凹陷窩會充分暴露）。B找準(zhǔn)進針部位保定后，要選擇最佳采血點，即為豬兩側(cè)胸前凹陷窩。凹陷窩可用目測，也可用手指沿胸骨柄兩側(cè)觸摸（胸骨柄最高點至第一肋骨間Icm處有一凹陷的感覺），要掌握在左右兩側(cè)凹陷處進行，進針時要掌握好一定的方向、角度和深度。特別是對仔豬采血時，不能太猛、太深，以免刺傷心包或心臟。如針頭未扎入血管，可輕輕上下移動針頭，直至針筒流入血液為止。但須注意的是，進針后擺動不要過大或反復(fù)多次進針，以免損傷血管造成血腫或傷及氣管。（2）、耳靜脈采血：將豬站立或橫臥保定，耳靜脈局部按常規(guī)消毒處理。一人用手指捏壓耳根部靜脈處或用膠帶于耳根部結(jié)扎，使靜脈充盈、怒張（或用酒精棉反復(fù)于局部涂擦以引起其充血）；術(shù)者用左手把持豬耳，將其托平并使注射部位稍高；右手持連接針頭的注射器，沿耳靜脈使針頭與皮膚呈30～45o角，刺入皮膚及血管內(nèi)，輕輕抽活塞手柄如見回血即為以刺入血管，再將注射器放平并沿血管稍向前伸入；解除結(jié)扎膠帶或撤去壓迫靜脈的手指采血即可。★耳部有靜脈和動脈，動脈血清少，耳中部的血管是動脈，盡量不采此血管。（3）、腋(臂)靜脈采血保定方法:將豬側(cè)臥保定,由助手往后用力扳住豬身體上方的前肢,使之極度向后伸展,即可暴露術(shù)部。采血部位:在豬前肢極度向后伸展的情況下,腋部皮膚繃緊在腋窩前方隱約可見1條前后走向的血管(皮下脂肪薄的豬更明顯)術(shù)者一手按住向心端,一手持采血器成15°角進針,回抽采血器,如果回血即為刺入,可在1min內(nèi)采血3mL以上?！锎朔ǘ嘤糜诩茏迂i。3、牛、羊（1）采集少量血液，可容易地在耳背靜脈采取。穿刺部剪毛消毒，涂以少量的油脂，以使血液呈滴狀，便于采集。（2）牛、羊頸靜脈采血：將動物保定，稍抬頭頸，于頸靜脈溝上1/3處交界部剪毛消毒，一手拇指按壓采血部位下方頸靜脈溝血管，促使靜脈怒張，另一手執(zhí)針頭，垂直刺入，血液順器壁流入容器內(nèi)，防止氣泡產(chǎn)生，待血量達到要求后，拔下針頭，用消毒棉球按壓針眼，輕按止血。（3）牛尾靜脈采血：固定動物，使牛尾往上翹。在離尾根10cm左右中點凹陷處(第4、5尾椎骨交界中點凹陷處)，先用酒精棉球消毒，然后將采血針頭垂直刺入（約1cm深）針頭觸及尾骨后再退出1mm進行抽血，采血結(jié)束，消毒并按壓止血。4、注意事項：1凡采血時,采血器針頭的斜面一定在進針時背對血管,即進針時針尖的斜面朝外,朝向術(shù)者。當(dāng)抽血時,可適當(dāng)調(diào)整針尖斜面方向。（進針時針尖斜面朝外容易刺進血管。抽血時,調(diào)整針尖斜面角度,可以避免針尖斜面貼緊血管內(nèi)壁而不出血液,從而誤導(dǎo)術(shù)者,誤以為刺穿血管或沒有刺入血管。）2當(dāng)回抽采血器太快,太猛時,針尖斜面最容易緊貼血管內(nèi)壁而抽不出血液。二、血清分離（一）動物血容量和允許采血量種類全血量（毫升/公斤體重）血量占體重百分比（%）一次性最大安全采血量（毫升/公斤體重）受檢血液量（毫升）雞95.5±24.08.80-10.09.901.00豬69.4±11.55.00-6.006.605.0-10.0山羊71.0±14.06.0-7.06.602.0-20.0綿羊58.0±8.506.00-7.006.605.0-20.0乳牛57.4±5.006.00-7.007.7010.0-20.0（二）、制備血清樣品的步驟一般如下：1．核對實驗室所需血清量，確定所需采血量。2．將采取的血液樣品試管呈最大斜面傾斜，并置室溫或37℃3．用光潔而干燥的竹簽將血凝塊從管壁徐徐剝離并繼續(xù)加溫，促使血清析出。4．待大部分血清析出后，中速(2000-2500轉(zhuǎn)/分)離心5min，分離血清。5．分離血清用頭子尖而細(xì)的玻璃吸管特血清吸移到另一清潔而干燥的試管里，貼上標(biāo)簽。6．檢查血清是否溶血，剔除溶血的血清樣品。★引起溶血的常見原因是：采血用的注射器或試管不干凈；用注射器抽血后未卸下針頭而將血液撼力注入試管中；強力搖動血液或血液離心速度過高；冷藏溫度過低；采血時壓迫靜脈過久等等?！锓乐谷苎姆椒ǎ翰裳玫淖⑸淦?、針頭、試管等器具必須清洗干凈；采血后卸下針頭再將血液沿管壁徐徐注入試管內(nèi)；不要過多過早剝動血凝塊；低溫能使紅細(xì)胞脆性增大，應(yīng)將血液放于37℃中預(yù)溫半小時后再用竹簽將血凝塊從管壁剝離，并繼續(xù)加溫，使血清析出，如果不能及時檢測，血液應(yīng)放于4℃保存。（三）、注意事項1、對制備血清的動物進行采血時間宜在早晨空腹時和午后進行。此間所采集的血液所析出的血清質(zhì)量好于其它時間所采集的血清質(zhì)量。2、采集的血液在36小時內(nèi)必須將血清析出。之后析出的血清將因血紅細(xì)胞溶血進入血清內(nèi)而使血清呈淡紅色。影響血清的質(zhì)量，進而影響對動物重大疫病的實驗室診斷的準(zhǔn)確性。3、盡量不采動脈血，不但不易出血清，且易混凝。4、因為材質(zhì)不同，塑料試管要比注射器針管析出的血清量多。5、一般情況下，在5d內(nèi)測定的血清樣品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存；樣品待檢時間超過1周的，需－156、血清從低溫冰箱取出后，最好經(jīng)4℃冰箱、室溫、37血清物理性狀血清混濁，呈灰或者淡黃色半透明狀，嚴(yán)重者呈蛋黃不透明；部分血液不凝集，表面析出膠凍樣物質(zhì)并凝結(jié)；高速離心后，表面附一層白色油乳狀物質(zhì)，-20℃凍存后呈現(xiàn)不溶或溶解后分層。推測發(fā)病原因主要有以下幾點：★使用高能低蛋白飼料及其育成期未合理限飼，碳水化合物會加速乙