核型多角體病課件

病毒學(xué)第一節(jié)核型多角體病第二節(jié)質(zhì)型多角體病第三節(jié)濃核病第四節(jié)病毒病的發(fā)病規(guī)律第五節(jié)病毒病的防治2020/11/41病毒的發(fā)現(xiàn)？19世紀(jì)末，錢伯倫創(chuàng)制細(xì)菌過濾器后，發(fā)現(xiàn)了許多毒素和過濾性因子。1892年，蘇聯(lián)學(xué)者伊萬諾夫斯基證明存在過濾性病毒（發(fā)現(xiàn)患花葉病的煙草葉汁通過過濾器后仍有侵染性）。19世紀(jì)末20世紀(jì)初，已經(jīng)找到許多過濾性病毒。1915年，Twort首先發(fā)現(xiàn)細(xì)菌病毒。1935年，美國生化學(xué)家W.M.Stanleg獲得了煙草花葉病毒結(jié)晶。（第一位）開始了對(duì)病毒本質(zhì)的認(rèn)識(shí)，促進(jìn)病毒學(xué)的發(fā)展，而且成為分子生物學(xué)發(fā)展的里程碑。2020/11/42超顯微的，可以通過細(xì)菌過濾器。病毒粒子只含一種核酸。病毒粒子不能生長，也不能二等分裂。無細(xì)胞結(jié)構(gòu)。病毒只能利用宿主細(xì)胞的核糖體進(jìn)行Pr合成。病毒的主要特征：2020/11/43家蠶病毒病的研究歷史1149年陳敷所著《農(nóng)書》中關(guān)于家蠶膿病病癥“高節(jié)”、“腳腫”的描述。1639年徐光啟的《農(nóng)政全書》中，有病蠶“游走而不安箔”的描述。1874年汪日楨《湖蠶述》記有病蠶“高節(jié)而足流白水”。1912年Acqua發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)昆蟲病毒BmNPV。迄今已發(fā)現(xiàn)12目1600余種昆蟲，可被16個(gè)科的病毒所感染。2020/11/44家蠶病毒病的種類1核型多角體病由桿狀病毒科的家蠶核型多角體病毒（BmNPV）寄生血細(xì)胞和體腔內(nèi)各種組織的細(xì)胞核，并形成多角體。2質(zhì)型多角體病由呼腸病毒科的家蠶質(zhì)型多角體病毒（BmCPV）寄生中腸圓筒形細(xì)胞，并在胞質(zhì)中形成多角體。復(fù)習(xí)內(nèi)容：家蠶幼蟲中腸上皮細(xì)胞的類型？2020/11/45家蠶病毒病的種類3濃核病由細(xì)小病毒科的家蠶濃核病病毒（BmDNV）寄生中腸圓筒形細(xì)胞的細(xì)胞核，不形成多角體。4病毒性軟化病由小RNA病毒科的家蠶軟化病病毒（BmFV）寄生中腸杯形細(xì)胞胞質(zhì)中，不形成多角體，但形成類似多角體的包涵體（封入體）。2020/11/46家蠶病毒病的危害情況病毒病是目前蠶繭生產(chǎn)中最為常見、危害最重的一類病害，給蠶繭生產(chǎn)造成的損失約占蠶病造成損失的80%。上述四種病毒病在我國都有不同程度的發(fā)生，其危害也因各個(gè)蠶區(qū)而不同。南方蠶區(qū)以中腸型膿病為主；而北方蠶區(qū)則以血液型膿病造成的損失最大。濃核病常與CPV并發(fā)；病毒性軟化病目前已很少發(fā)生。因此，本章重點(diǎn)講解NPV、CPV，并介紹DNV.2020/11/47第一節(jié)核型多角體病

核型多角體病也稱血液型膿病，農(nóng)民常稱之為膿病或膿腫。一病原

家蠶核型多角體病毒（BombyxmoriNuclearPolyhedrosisVirusNPV）。存在形式有兩種：NPV與NPB（多角體）。（一）NPV屬桿狀病毒科，核型多角體病毒屬，病毒粒子桿狀，330×80nm；dsDNA;Tm為87.5℃；2020/11/48NPV病毒粒子的超微結(jié)構(gòu)NPV膜髓核（dsDNA）囊膜膠粘層衣殼核衣殼一個(gè)囊膜內(nèi)只含一個(gè)核衣殼一個(gè)囊膜內(nèi)包含兩個(gè)以上核衣殼模式圖單粒包埋型（SEV）與多粒包埋型（MEV）寄生部位血體壁氣管上皮腦脂肪卵巢皮膜絲腺精巢皮膜SEV（%）97~9872~8963MEV（%）2~311~2837環(huán)境溫度：25℃~28℃多形成SEV，33℃~35℃多形成MEV。2020/11/49（二）NPB（多角體）1構(gòu)成多角體多角體蛋白3%~5%病毒粒子核糖核酸聚合酶0.3%Si；微量Fe、Mg與宿主細(xì)胞Pr和病毒Pr均不同，分子量29000，由245個(gè)AA殘基組成。2理化特性多為整齊六角形十八面體（偶有四方、三角或不正形）；2~6μm（平均3.2）；光鏡下易觀察到；淡綠色，折光性強(qiáng)；比水重；不溶于水及有機(jī)溶劑；對(duì)濃酸不穩(wěn)定；易溶于堿性溶液；蘇丹Ⅲ不能使其著色。2020/11/410掃描電鏡照片NPB的形態(tài)光鏡照片N.bNPB2020/11/411NPB形態(tài)2020/11/412NPB形態(tài)受下列因素影響1寄生部位：血細(xì)胞、氣管上皮、體壁上皮、脂肪體中均六角形。而絲腺腺細(xì)胞中則巨型三角形。多角體且較其他組織大2倍左右。睪丸、精室內(nèi)膜上寄生則四方形。2宿主：BmNPV接種二化螟后：1代六角形，7代后四方形，再將四角形NPB反接種于B.m.，則：第一代少量六角形，第四代達(dá)70%~80%，第六代全部為六角形。2020/11/4133與環(huán)境（溫度）有關(guān)：BmNPV接種蛹體。接種后——28℃24hr后，再經(jīng)35℃則產(chǎn)生四角形NPB28℃下48~96hr后,再經(jīng)35℃則產(chǎn)生六角形。35℃下24~48hr后,再經(jīng)28℃則產(chǎn)生六角形。35℃下72~96hr后,再經(jīng)28℃則產(chǎn)生四角形。NPB形態(tài)受下列因素影響2020/11/4143NPB的穩(wěn)定性處理濃度溫度℃失活時(shí)間(min)日光4020h干熱10045

濕熱1003

甲醛2%2515漂白粉0.3%253石灰漿1%253石灰水清25>24h鹽酸比重1.0252532020/11/415二病癥1典型病癥（共同癥狀）2020/11/4162不同時(shí)期發(fā)病

不眠蠶：在蠶的催眠期間，蠶群體大部分快入眠時(shí)，NPV病蠶體壁緊張發(fā)亮，呈乳白色，行動(dòng)活潑，不能入眠，終于體皮破裂，流膿而死。

起節(jié)蠶：在起蠶時(shí)發(fā)病。病蠶生長停滯，體色乳白而不見轉(zhuǎn)青。體壁松弛多皺，體軀縮小。前節(jié)的節(jié)間膜向后套疊，終于出現(xiàn)典型的病征而死。

高節(jié)蠶：又稱“竹節(jié)蠶”。源于病蠶各環(huán)節(jié)節(jié)間膜或環(huán)節(jié)后半部（靠近節(jié)間膜處）隆起，就象竹節(jié)。多在4、5齡蠶盛食期發(fā)病。2020/11/4172不同時(shí)期發(fā)病

膿蠶：多發(fā)生于5齡后期至上簇前。環(huán)節(jié)腫脹拱起，呈算盤珠狀，體壁緊張發(fā)亮，體色乳白，病重時(shí)，爬行緩慢，終因腹足失去把持力，從蠶匾或蔟中墜下，流膿而死。發(fā)病遲者死于蔟中或結(jié)薄皮繭而死亡，生產(chǎn)上比較常見。

斑蠶：在生產(chǎn)上較少見，與蠶品種有關(guān)，現(xiàn)行品種少發(fā)生。發(fā)生時(shí)出現(xiàn)對(duì)稱性的病斑，如黑褐色的焦腳、黑色氣門及大的斑塊等。

蛹期病癥：在5齡后期、熟蠶、初蛹期感染可造成蛹期發(fā)病。病蛹體色暗褐或乳白，體壁易破，一經(jīng)震動(dòng)即流出濃汁而死，造成繭層污染，即內(nèi)印繭或死蘢繭。2020/11/4182不同時(shí)期發(fā)病高節(jié)狂躁爬行2020/11/4192不同時(shí)期發(fā)病腹足基部乳白氣門周圍水漬狀病斑2020/11/4202不同時(shí)期發(fā)病2020/11/4212不同時(shí)期發(fā)病2020/11/4222不同時(shí)期發(fā)病2020/11/423三病變NPV及其包涵體是在寄主細(xì)胞核內(nèi)增殖和形成的，因而受感染的細(xì)胞核便發(fā)生一系列的病變過程。隨著多角體的不斷增多，使細(xì)胞核逐漸膨脹，隨后細(xì)胞亦膨大破裂，這樣多角體、病毒及細(xì)胞碎片就游離于血液中。

血細(xì)胞、氣管上皮、脂肪組織及真皮細(xì)胞易形成多角體。在生殖腺和神經(jīng)細(xì)胞中只能形成少量多角體，而蛻皮脫、唾腺和馬氏管等則很難形成，在絲腺中除前部絲腺不能形成多角體，中、后部絲腺細(xì)胞核均能形成大量多角體。目前已發(fā)現(xiàn)NPV可在中腸圓筒形細(xì)胞中增殖,但不能形成多角體.2020/11/424病變2020/11/425病變2020/11/426四致病機(jī)理1感染入侵NPB蠶食下放出NPV污染桑葉堿液溶解腸腔滅活排出RFP圍食膜中腸上皮細(xì)胞復(fù)制胞核定位血液NPV創(chuàng)傷NPV細(xì)胞間隙血細(xì)胞核定位2020/11/4272病毒復(fù)制dsDNAdsDNAStRNArRNA病毒Pr衣殼PrNPBPrssDNAmRNA胞質(zhì)NPVNPB細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)E3裝配4釋放2020/11/4285病毒增殖NPV的增殖曲線隱潛期緩慢增殖期高速增殖期穩(wěn)定增殖期2020/11/429五發(fā)病特點(diǎn)1本病以食下傳染為主（NPB），也可經(jīng)傷口感染（NPV）。2主要傳染源為病蠶血液（膿汁）。3本病主要發(fā)生在3齡~老熟（蛹期），尤以5齡中期~老熟前后最為嚴(yán)重。4本病屬于亞急性傳染病，小蠶感染后經(jīng)3~4天發(fā)病死亡，大蠶經(jīng)4~6天發(fā)??；外溫高時(shí)，病程加快。2020/11/4305病蠶體壁破裂流膿之前，蠶座二次感染的可能性較小。6由于NPB對(duì)自然環(huán)境有強(qiáng)的抵抗力，故該病除具有水平傳播外，尚具有較強(qiáng)的垂直傳播能力。7惡劣的環(huán)境條件及一些理化因素刺激可誘發(fā)本病。8不同蠶品種對(duì)本病抗性不同。2020/11/431六診斷1肉眼鑒別2020/11/4322顯微鏡檢查此病在發(fā)病初期，外觀病癥往往不明顯，但發(fā)育遲緩，有時(shí)遲眠。取可疑蠶剪斷尾角或腹足，滴一滴血液于載玻片上，加蓋片與400~600倍顯微鏡下觀察。如有折光性較