蛋白質(zhì)樣品的制備教學(xué)課件

蛋白質(zhì)樣品的制備蛋白質(zhì)樣品的制備蛋白質(zhì)樣品的制備第二章蛋白質(zhì)樣品的制備蛋白質(zhì)樣品的制備是蛋白質(zhì)組分析的基礎(chǔ)蛋白質(zhì)樣品制備包含:蛋白質(zhì)分離、提取、純化蛋白質(zhì)樣品的制備是蛋白質(zhì)組研究的第步,無論后續(xù)采用怎樣的分離或鑒定手段,樣制備都是關(guān)鍵步驟。從蛋白質(zhì)組大規(guī)模研究的角度而言,要求樣品制備盡可能獲得所有的白質(zhì),但是由于蛋白質(zhì)種類多、豐度不一和物化特性多樣等,要達(dá)到真正的全息制備是具有難度的。本文圍繞“提高教育教學(xué)質(zhì)量，辦人民滿意的教育”這一主題，對(duì)目前影響新的課程改革進(jìn)程和教育教學(xué)質(zhì)量不高的因素，進(jìn)行了調(diào)查。調(diào)查中發(fā)現(xiàn)：新的教學(xué)理念、培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐能力和創(chuàng)新精神的方法等問題難以被廣大教師所掌握的主要原因是教師老齡化現(xiàn)象嚴(yán)重，特別是農(nóng)村小學(xué)教師老齡化問題尤為突出。農(nóng)村小學(xué)教師老齡化現(xiàn)象調(diào)查研究一、農(nóng)村小學(xué)教師老齡化問題令人憂膠南市農(nóng)村小學(xué)共有幾十個(gè)，師資的配備情況也大致相同。以筆者學(xué)校為例：現(xiàn)有21個(gè)教學(xué)班，學(xué)生982名，教師58名。通過查閱“教職工登記表”發(fā)現(xiàn)58名在崗教師中50歲以上的教師就有20名，45歲以上的教師共有46名，達(dá)到教師總?cè)藬?shù)的79.3%以上。這學(xué)期開始，學(xué)校有4名年近55歲的老教師除承擔(dān)著繁重的教學(xué)工作之外，還擔(dān)任著班主任工作，類似情況在其他學(xué)校也普遍存在。隨后，筆者在新學(xué)期對(duì)4名老教師進(jìn)行了聽課。課堂上，筆者固然學(xué)到了他們教學(xué)中的不少長處，但也發(fā)現(xiàn)這些老教師在新的課改中，新的教學(xué)理念難以接受，“輕負(fù)、省時(shí)、高效”的教學(xué)模式難以建立。“自主、合作、探究”的學(xué)習(xí)方式難以實(shí)現(xiàn)，他們無一使用多媒體教學(xué)手段，他們采取的教學(xué)方法仍是“滿堂灌，填鴨式”，他們的課堂氣氛死氣沉沉。學(xué)生的接受效果頗差，更談不上培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)踐能力和創(chuàng)新精神。查閱歷年來的統(tǒng)考科的教學(xué)成績，各學(xué)科平均分、優(yōu)秀率、及格率，倒數(shù)后幾名的教師，老教師占87%。針對(duì)這一現(xiàn)狀，筆者對(duì)班主任和擔(dān)任統(tǒng)考學(xué)科的老教師進(jìn)行了問卷調(diào)查，調(diào)查表設(shè)滿意、一般、不喜歡三欄，對(duì)4～6年級(jí)80名學(xué)生采取無記名投票的方法，結(jié)果有68名學(xué)生對(duì)老教師的課堂教學(xué)不滿意，占被調(diào)查總數(shù)的85%。筆者又專題對(duì)6名男女老教師進(jìn)行了座談。座談中發(fā)現(xiàn)：隨著農(nóng)村教育體制改革的深化，特別是新一輪課程改革全面推開后，由教師隊(duì)伍整體老齡化帶來的問題越來越多，具體表現(xiàn)在以下三個(gè)方面：1.年齡偏大的教師精力不濟(jì)，工作缺乏主動(dòng)性、積極性，教學(xué)改革中沒有進(jìn)取心，更談不上教學(xué)工作的科學(xué)化、規(guī)范化、精細(xì)化。2.年齡偏大教師普遍知識(shí)結(jié)構(gòu)老化，在新課改中舉步艱難，本領(lǐng)缺乏，被動(dòng)應(yīng)付。3.年齡偏大的教師后顧之憂較多，參與教育教學(xué)改革的積極性不高。這種狀況直接給農(nóng)村教育教學(xué)改革發(fā)展帶來影響，在很大程度上限制了農(nóng)村學(xué)生整體素質(zhì)的提高。二、產(chǎn)生農(nóng)村教師隊(duì)伍老齡化問題的原因面對(duì)農(nóng)村小學(xué)教師隊(duì)伍老齡化現(xiàn)象越來越嚴(yán)重的問題，筆者在初步調(diào)查的基礎(chǔ)上，做了深層次的調(diào)查研究，剖析了產(chǎn)生這些問題的原因，找出了造成這一問題的癥結(jié)之所在。1.由于農(nóng)村學(xué)校長期投入不足，辦學(xué)條件難以改善，教師工資普遍低下。大中專師范院校畢業(yè)生普遍不愿到農(nóng)村學(xué)校任教。筆者查過《教職工登記表》自1999年至今，他們這所有千名師生的學(xué)校無一新教師到校工作。2.年齡偏大教師大多是上世紀(jì)90年代轉(zhuǎn)正的民辦教師，他們的教育理念落后，知識(shí)結(jié)構(gòu)老化，教學(xué)能力、水平難以提高。仍沿用傳統(tǒng)的應(yīng)試教育教學(xué)模式。3.農(nóng)村教師緊缺，多數(shù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)便采用“先保初中，后顧小學(xué)”的策略，初中缺老師了，就從小學(xué)調(diào)，年復(fù)一年，小學(xué)的青年教師便基本被調(diào)光了。筆者的學(xué)校也是如此，自1999年開始，本校被市教體局調(diào)到縣城初中、鄉(xiāng)鎮(zhèn)初中任教的青年教師就有12名。三、解決農(nóng)村小學(xué)教師老齡化問題的辦法和措施當(dāng)前新一輪基礎(chǔ)教育課程改革已遍及全國，面對(duì)小學(xué)老教師比例過大的現(xiàn)象，這不僅是新課改之痛，更是農(nóng)村孩子全面發(fā)展之痛。筆者經(jīng)過深入細(xì)致的調(diào)查、分析，認(rèn)為應(yīng)從以下幾個(gè)方面解決這一急需解決的問題。1.各級(jí)政府要加大對(duì)農(nóng)村教育，特別是小學(xué)教育的投入，重新合理配置教育資源，改善農(nóng)村辦學(xué)條件，縮小城鄉(xiāng)教育差別，提高農(nóng)村教師的工資、福利待遇，使農(nóng)村青年教師安心從教，制止農(nóng)村青年教師外流。2.在縣鄉(xiāng)財(cái)政吃緊，對(duì)老教師不能實(shí)行退休或退養(yǎng)政策的前提下，加大對(duì)中青年教師的培訓(xùn)。要教育培訓(xùn)中老年教師認(rèn)識(shí)當(dāng)前形勢(shì)，積極參與新課改，把握現(xiàn)代教學(xué)理念，教學(xué)方法的緊迫感和責(zé)任感。使中老年教師充分認(rèn)識(shí)到：我們肩負(fù)的教育教學(xué)工作是關(guān)系到落實(shí)“三個(gè)代表”重要思想的大事，關(guān)系到建設(shè)社會(huì)主義小康社會(huì)、和諧社會(huì)的大事，更關(guān)系到偉大的社會(huì)主義祖國是否后繼有人的大事。要以現(xiàn)代教學(xué)方法、教學(xué)手段的培訓(xùn)為著力點(diǎn)，采取行之有效的培訓(xùn)方法。如：實(shí)行“學(xué)校業(yè)務(wù)干部包干制”、老年教師與青年教師“結(jié)對(duì)制”。即每位學(xué)校業(yè)務(wù)干部每學(xué)期負(fù)責(zé)1～2名老年教師的教學(xué)業(yè)務(wù)提高工作，青年教師與老年教師相互聽課，達(dá)到互相補(bǔ)充，互相學(xué)習(xí)之目的。除此之外，學(xué)校應(yīng)抓好集體備課、說課、研究課、示范課、公開課等業(yè)務(wù)活動(dòng)，使老年教師盡快以現(xiàn)代教學(xué)理念為指導(dǎo)，把握現(xiàn)代教育教學(xué)方法和手段，以培養(yǎng)學(xué)生的實(shí)踐創(chuàng)新能力。3.市鎮(zhèn)教育行政部門要樹立科學(xué)的教育發(fā)展觀和全局意識(shí)，徹底的去掉“丟卒保車”的思想，要認(rèn)識(shí)到教育事業(yè)的發(fā)展是一個(gè)系列工程，而小學(xué)教育又是整個(gè)工程的基礎(chǔ)，“基礎(chǔ)不牢，工程不穩(wěn)”。因此，小學(xué)教師的政治業(yè)務(wù)素質(zhì)不是可高可低，，更不能隨意抽調(diào)，試想，若干年后，農(nóng)村小學(xué)教師隊(duì)伍將出現(xiàn)老教師退休，大批青年教師被迫頂崗的青黃不接現(xiàn)象和中青年教師斷層的現(xiàn)象，教師隊(duì)伍的年齡知識(shí)結(jié)構(gòu)更加失調(diào)，那時(shí)對(duì)教育改革與發(fā)展的影響將更大了，其后果將不堪設(shè)想。4.政府和教育行政部門，為了教育事業(yè)的發(fā)展要制定相關(guān)政策，每年選拔一批師范類大中專畢業(yè)生到農(nóng)村小學(xué)支教，為農(nóng)村小學(xué)教師隊(duì)伍補(bǔ)充新鮮血液，為新的課程改革注入活力，為創(chuàng)新教育教學(xué)工作提供人才保障。教育行政部門要鼓勵(lì)城區(qū)優(yōu)秀青年教師到農(nóng)村小學(xué)支教，將城區(qū)先進(jìn)的教學(xué)經(jīng)驗(yàn)、優(yōu)秀的教學(xué)方法帶進(jìn)農(nóng)村小學(xué)。同時(shí)，農(nóng)村小學(xué)教師應(yīng)派部分中老青年教師到城區(qū)小學(xué)任教學(xué)習(xí)，盡快使中老年教師的教學(xué)業(yè)務(wù)素質(zhì)盡快提高，以適應(yīng)新的課程改革。各級(jí)政府部門要盡快改革教師內(nèi)退制度，將農(nóng)村教師的內(nèi)退年齡提前，動(dòng)員年齡偏大的教師提前退休，以便空出教學(xué)工作崗位，讓中青年教師任教。綜上所述，當(dāng)前農(nóng)村小學(xué)教師老齡化現(xiàn)象已成為制約或阻礙農(nóng)村教育事業(yè)發(fā)展的重要因素之一，筆者向各級(jí)政府、教育行政部門乃至全社會(huì)大聲疾呼：解決小學(xué)農(nóng)村教師老齡化問題已成為全社會(huì)的當(dāng)務(wù)之急。初中作文失語癥原因?qū)Σ邞?yīng)試教育的大環(huán)境下，作文成為提高語文成績和升學(xué)的敲門磚，學(xué)生對(duì)于寫作的興趣不高，長期處于封閉的訓(xùn)練環(huán)境下，使得學(xué)生呈現(xiàn)出失語狀態(tài)。作文失語，不是學(xué)生在寫作的時(shí)候不能說話，而是學(xué)生作文中缺乏有深度和內(nèi)涵的語言、缺乏真實(shí)的感情、表達(dá)方式形式化和僵化、個(gè)性缺失等問題，這不僅影響學(xué)生寫作能力的提高，也對(duì)學(xué)生健全人格形成產(chǎn)生了不良影響。作文是語文教學(xué)的核心內(nèi)容，它主要是考查學(xué)生語文應(yīng)用能力，是學(xué)生語文水平的集中體現(xiàn)。當(dāng)前初中作文教學(xué)中，要提高學(xué)生寫作水平，打開學(xué)生的寫作視野，讓學(xué)生變得有話可說、有話敢說和有話會(huì)說，就需要深究初中生作文失語的原因，對(duì)癥下藥，找到相應(yīng)的解決對(duì)策，從而實(shí)現(xiàn)初中作文教學(xué)的重要目標(biāo)。一、積累素材，為學(xué)生創(chuàng)造寫作空間通過調(diào)查初中生作文失語癥發(fā)現(xiàn)，初中生作文失語的首要原因就是缺乏素材，“巧婦難為無米之炊”，缺乏素材使得學(xué)生無法找到寫作的切入口，在寫作中就會(huì)變得無話可說。在初中作文教學(xué)中，要解決學(xué)生作文失語的問題，就需要增強(qiáng)學(xué)生對(duì)于積累素材的重視，從生活出發(fā)，通過走進(jìn)生活、走進(jìn)社會(huì)、走進(jìn)大自然，積累大量的生活經(jīng)驗(yàn)，將其轉(zhuǎn)化為文字，就可以使作文表達(dá)的感情飽滿充實(shí)。網(wǎng)絡(luò)化環(huán)境下，學(xué)生積累素材還可以充分發(fā)揮網(wǎng)絡(luò)信息資源的優(yōu)勢(shì)，通過提煉網(wǎng)絡(luò)信息資源，不斷增加素材積累量，在寫作過程中，合理應(yīng)用這些素材，就可以提高寫作水平?，F(xiàn)以某學(xué)生“讓彩虹走進(jìn)心靈”為主題的寫作為例，學(xué)生在寫作中先借用了神話故事“神筆馬良”中的一句話“倘若我有一支七彩的筆，我會(huì)……”正文中用優(yōu)美的語言對(duì)七種顏色進(jìn)行了敘述，在結(jié)尾處用排比句式深化主題“捕捉春風(fēng)的姿影，那仿佛輕紗般柔滑的姿影；踩踏夏日的節(jié)拍，那好似擊鼓般整齊的節(jié)拍；品味秋雨的惆悵，那宛若丁香般幽怨的惆悵；追溯冬雪的足跡，那猶如宿命般延伸的足跡”，學(xué)生的語言非常優(yōu)美。學(xué)生表示：“這些語言都是我積累的寫作素材”將積累素材恰到好處的應(yīng)用到作文中，就可以發(fā)揮出意想不到的作用。由此可見，缺乏足夠的寫作素材，會(huì)讓學(xué)生在寫作中無話可說、有話不會(huì)說，出現(xiàn)失語癥狀。在初中作文教學(xué)中，增強(qiáng)學(xué)生對(duì)積累素材的重視，通過多種方式積累大量素材，在寫作中合理應(yīng)用這些素材，就會(huì)使作文內(nèi)容變得更加豐滿、語言更加優(yōu)美、感情更加充沛真實(shí)，這對(duì)于提高初中生寫作水平具有非常重要的作用。所以，解決初中作文失語癥問題，應(yīng)該樹立學(xué)生積累寫作素材的良好習(xí)慣。二、重視閱讀，為學(xué)生寫作奠基初中作文教學(xué)中，教師應(yīng)該幫助學(xué)生樹立“欲寫作先閱讀”的觀念，增強(qiáng)學(xué)生對(duì)于閱讀的重視程度。寫作與閱讀兩者是相輔相成的，閱讀能夠?yàn)閷懽鞯於ɑA(chǔ)，而寫作是檢驗(yàn)閱讀的水平。將閱讀和寫作有效結(jié)合起來，讓學(xué)生愛上讀書，真正從讀書中獲益，借鑒別人的寫作方式，優(yōu)化自己的寫作方法，不斷拓展學(xué)生的寫作視野，充分滿足學(xué)生的閱讀需求和寫作需求，逐步提高初中生的寫作水平。所以，初中作文教學(xué)當(dāng)務(wù)之急的任務(wù)就是使學(xué)生養(yǎng)成良好的閱讀習(xí)慣?，F(xiàn)以“傷仲永”為例，在學(xué)習(xí)這篇文章之后，某教師先讓學(xué)生發(fā)表了自己對(duì)“傷仲永”的看法和有想法，學(xué)生普遍認(rèn)為“后天教育對(duì)一個(gè)人成才非常重要”，在學(xué)生對(duì)于課文中的人物感到惋惜的時(shí)候，教師推薦學(xué)生閱讀《哈佛女孩劉亦婷》的故事，并完成寫作任務(wù)。學(xué)生按照要求進(jìn)行閱讀，從閱讀中獲得新的感受，進(jìn)一步拓展了視野，對(duì)于成人成才也有了辯證的認(rèn)識(shí)。在寫作過程中，學(xué)生將這些認(rèn)識(shí)融入到作文中，抒發(fā)真情實(shí)感，就提高了寫作質(zhì)量。而學(xué)生利用文字表達(dá)出自己的真實(shí)想法，說出心中所想，在寫作中敢于說話，就可以解決學(xué)生失語癥的問題。由此可見，閱讀與寫作脫離開來，會(huì)出現(xiàn)學(xué)生寫作視野狹窄、寫作方式形式化和僵化的問題，對(duì)提高學(xué)生寫作水平形成不利影響。在初中作文教學(xué)中，解決學(xué)生作文失語的問題，教師必須采取科學(xué)、有效的方法增強(qiáng)學(xué)生對(duì)閱讀的重視程度，對(duì)閱讀產(chǎn)生濃厚的興趣，通過良好的閱讀，為寫作奠定堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。三、科學(xué)作文批改評(píng)價(jià)，激發(fā)學(xué)生的寫作興趣批改評(píng)價(jià)方式落后也是學(xué)生作文失語的重要原因之一，教師對(duì)學(xué)生的評(píng)改標(biāo)準(zhǔn)單一，評(píng)改不具參考性，評(píng)語幾乎都是一些無關(guān)痛癢的話，經(jīng)常會(huì)使學(xué)生看得不明所以，無法對(duì)學(xué)生形成指導(dǎo)作用，不利于學(xué)生寫作水平的提高。在初中作文教學(xué)中，解決學(xué)生作文失語癥的問題，教師應(yīng)該優(yōu)化作文評(píng)改方式，讓學(xué)生參與到作文評(píng)改環(huán)節(jié)，通過學(xué)生自改和互改作文的方式，豐富學(xué)生的寫作語言，激發(fā)出學(xué)生的寫作興趣。再以“讓彩虹走進(jìn)心靈”為主題的寫作為例，在學(xué)生完成寫作之后，教師要求學(xué)生先進(jìn)行了作文自改，自改過程中學(xué)生主要改正了作文中出現(xiàn)的錯(cuò)別字和語言邏輯錯(cuò)誤問題，對(duì)自己的作文形成了初步的評(píng)價(jià)，然后要求學(xué)生交換作文進(jìn)行互改互評(píng)，在自改的基礎(chǔ)上進(jìn)行互改，學(xué)生真正以一個(gè)讀者的身份閱讀品鑒文章，就可以發(fā)現(xiàn)更多寫作中出現(xiàn)的問題，如語言過于冗余、表達(dá)感情空洞等問題，最后由教師進(jìn)行總結(jié)性評(píng)改，教師以更加專業(yè)的角度審視學(xué)生的作文，找出學(xué)生寫作中存在的問題，并給予解決對(duì)策，如針對(duì)表達(dá)感情空洞，教師給出的解決對(duì)策是可以適當(dāng)引入例子。通過對(duì)學(xué)生作文的評(píng)價(jià)，使學(xué)生真正意識(shí)到寫作中存在的問題，對(duì)解決作文失語癥有非常大的幫助?！镜诙碌鞍踪|(zhì)樣品的制備蛋白質(zhì)樣品的制備是蛋白質(zhì)組分析的基礎(chǔ)蛋白質(zhì)樣品制備包含:蛋白質(zhì)分離、提取、純化蛋白質(zhì)樣品的制備是蛋白質(zhì)組研究的第步,無論后續(xù)采用怎樣的分離或鑒定手段,樣制備都是關(guān)鍵步驟。從蛋白質(zhì)組大規(guī)模研究的角度而言,要求樣品制備盡可能獲得所有的白質(zhì),但是由于蛋白質(zhì)種類多、豐度不一和物化特性多樣等,要達(dá)到真正的全息制備是具有難度的。第一節(jié)樣品制備總則為什么要進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品的制備1.要從某些組織樣品中尋找功能蛋白質(zhì),就要排除非蛋白質(zhì)的影響。2.目前實(shí)驗(yàn)條件下,雙向電泳能分辨到1000-5000個(gè)蛋自質(zhì)點(diǎn)(spot),而生物的蛋白種類多達(dá)10萬種以上,樣品中的蛋質(zhì)種類也可達(dá)到1萬種以上,但大部分蛋白質(zhì)的拷貝數(shù)都很少,因此通過樣品制備也可以起到濃縮蛋白質(zhì)的作用3消除各種細(xì)胞或組織混雜的影響樣品制備的原則1.盡可能采用簡(jiǎn)單的方法進(jìn)行樣品的處理2.盡可能的提高樣品的溶解度,使所有待分析的蛋白質(zhì)樣品全部處于溶解狀態(tài),且制備方法應(yīng)具有可重現(xiàn)性3.細(xì)胞和組織樣品的制備應(yīng)盡可能減少蛋白的降解,低溫和蛋白酶抑制劑以防止蛋白的降解。4樣品制備過程中,防止發(fā)生人為的蛋白質(zhì)樣品化學(xué)修飾.(加入尿素后加溫不要超過37℃,防止氨甲?；揎椀鞍?5.防止樣品在等電聚焦時(shí)發(fā)生蛋白質(zhì)的聚集和沉淀6,破壞蛋白質(zhì)與其他生物大分子之間的相互作用,以產(chǎn)生獨(dú)立的7有的研究中必須保持蛋白質(zhì)的活性。8.通過超速冷凍離心等方法清除所有的非蛋白雜質(zhì),對(duì)可能起干擾作用的高豐度或無關(guān)蛋白質(zhì)也應(yīng)去除9樣品裂解液應(yīng)該新鮮配置,并且分裝凍存于-80℃。勿反復(fù)凍融已制備好的樣品流程1.細(xì)胞或者組織、菌體的破碎2沉淀溶液樣品中的蛋白質(zhì)及清除雜質(zhì)3蛋白質(zhì)的純化(車泡漲溶液稀釋樣晶;三氯乙酸+冷令丙酮第二節(jié)樣品破碎與分離蛋白質(zhì)樣品的類型1整體樣品是生物個(gè)體小的物種(如微生物),可以整體取樣2組織樣品有一個(gè)采樣的過程,就是從整體部分或整批器官中抽取一定