TSPOT-TB-不含醫(yī)院名稱課件

結(jié)核感染細(xì)胞斑點(diǎn)檢測(cè)試劑盒（免疫斑點(diǎn)法）上海復(fù)星一、背景公司成立于年，依托牛津大學(xué)科研技術(shù)開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品基于細(xì)胞檢測(cè)的技術(shù)平臺(tái)最先獲得認(rèn)可產(chǎn)品：?在歐洲、美國(guó)、加拿大和其它地區(qū)正式上市公司簡(jiǎn)介Above:UKheadquartersAbingdon,OxonBelow:USheadquarters,Marlborough,MA結(jié)核病——全球關(guān)注的問(wèn)題全球億人口感染結(jié)核新增活動(dòng)性結(jié)核病人約萬(wàn)年每年萬(wàn)患者死亡中國(guó)萬(wàn)活動(dòng)性結(jié)核病人新增活動(dòng)性結(jié)核病人約萬(wàn)年死亡人數(shù)約萬(wàn)年試劑盒研制臨床背景活動(dòng)性結(jié)核與潛伏感染接觸活動(dòng)性結(jié)核病患者暴露程度不足，結(jié)核桿菌被機(jī)體免疫力清除沒(méi)有癥狀,結(jié)核桿菌仍舊存在而不能被偵測(cè)光掃描顯示正常沒(méi)有抗體應(yīng)答診斷困難傳統(tǒng)的結(jié)核感染檢測(cè)只有（）機(jī)體被感染受機(jī)體免疫力抑制沒(méi)有臨床癥狀終身處于感染狀態(tài)潛伏感染有臨床癥狀具有傳染性結(jié)核桿菌可以通過(guò)涂片、培養(yǎng)檢測(cè)出胸部的光或掃描顯示異常

肺外結(jié)核難以診斷(特別是兒童)活動(dòng)性結(jié)核再次激活控制結(jié)核的關(guān)鍵早發(fā)現(xiàn)早治療二、方法原理γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（，）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（，）結(jié)核桿菌特異抗原早期抗原靶（，）培養(yǎng)濾液蛋白（，）試劑盒研制技術(shù)背景γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（）TB抗原多肽T細(xì)胞活化T細(xì)胞γ干擾素γ干擾素檢測(cè)陰性γ干擾素檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)淋巴細(xì)胞，效應(yīng)淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子（γ）。因此，檢測(cè)效應(yīng)淋巴細(xì)胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應(yīng)細(xì)胞存活時(shí)間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床癥狀?；谠淼漠a(chǎn)品目前已被美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、意大利、瑞士、法國(guó)、荷蘭、日本等國(guó)家寫入本國(guó)的結(jié)核診療指南中γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（）年，在南北兩個(gè)半球地理位置相距遙遠(yuǎn)的兩個(gè)研究小組幾乎同時(shí)、獨(dú)立地創(chuàng)立了這項(xiàng)技術(shù)。一個(gè)研究小組位于澳大利亞西部的柏斯，牽頭人是當(dāng)時(shí)正在當(dāng)?shù)嘏踽t(yī)院兒童醫(yī)學(xué)研究所攻讀博士學(xué)位的.（..,）。另一個(gè)研究小組位于北歐瑞典城市哥德堡，帶頭人是哥德堡大學(xué)醫(yī)學(xué)微生物系的學(xué)者.（..,）。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（）近二十多年來(lái)，隨著抗體制備、膜材料等技術(shù)改良，分析技術(shù)已經(jīng)是當(dāng)世公認(rèn)的最靈敏的抗原特定細(xì)胞的體外檢測(cè)技術(shù)結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況，靈敏度高。其技術(shù)原理，可一句話概括為：用抗體捕獲培養(yǎng)中細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色方式將其表現(xiàn)出來(lái)（）。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)（）由結(jié)核桿菌基因組區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（）均丟失該基因序列絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在區(qū)結(jié)核桿菌特異抗原與抗原采用γ干擾素釋放實(shí)驗(yàn)原理，依靠結(jié)核特異抗原保證效應(yīng)淋巴細(xì)胞的特異性結(jié)合酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)的特性，提高檢測(cè)靈敏度三、試劑及檢測(cè)過(guò)程試劑盒主要原材料研究試劑盒主要組成成分結(jié)核桿菌特異抗原（、）植物血凝素（）對(duì)照抗原預(yù)包被的培養(yǎng)板、標(biāo)記二抗、底物顯色液國(guó)外上市情況年英國(guó)認(rèn)證和歐盟認(rèn)證（）年加拿大上市許可年韓國(guó)上市許可年美國(guó)的認(rèn)證年中國(guó)、新加坡和俄羅斯的產(chǎn)品注冊(cè)

試劑盒國(guó)外上市及應(yīng)用情況采集樣本（外周抗凝全血）密度梯度離心分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（）洗滌檢測(cè)過(guò)程把與結(jié)核特異抗原一同加入到預(yù)包被抗γ干擾素抗體的培養(yǎng)孔中℃二氧化碳孵育小時(shí)檢測(cè)過(guò)程洗滌培養(yǎng)孔加標(biāo)記二抗孵育小時(shí)檢測(cè)過(guò)程洗滌培養(yǎng)孔加顯色液用蒸餾水終止反應(yīng)檢測(cè)過(guò)程個(gè)斑點(diǎn)個(gè)效應(yīng)細(xì)胞檢測(cè)過(guò)程陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果空白對(duì)照抗原抗原陽(yáng)性對(duì)照（）實(shí)際效果圖四、比較結(jié)核病的常規(guī)診斷方法（）細(xì)菌學(xué)檢查是結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但涂片陽(yáng)性率低，培養(yǎng)又耗費(fèi)時(shí)日（）分子生物學(xué)檢查雖然快速、靈敏，但操作煩瑣、技術(shù)要求高（）結(jié)核抗體診斷診斷價(jià)值有限，但其簡(jiǎn)便、快速，可以作為結(jié)核病的輔助診斷方法之一（）（）實(shí)驗(yàn)傳統(tǒng)的結(jié)核感染檢測(cè)方法，對(duì)于接種過(guò)卡介苗()或環(huán)境分枝桿菌感染的受試者會(huì)出現(xiàn)一定的假陽(yáng)性結(jié)果，對(duì)于使用激素或免疫抑制劑的受試者會(huì)出現(xiàn)一定的假陰性結(jié)果、方法學(xué)比較——細(xì)菌學(xué)細(xì)菌學(xué)檢測(cè)——涂片、培養(yǎng)結(jié)核病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”涂片：快速，簡(jiǎn)便，特異性較好，靈敏度差培養(yǎng)：耗時(shí)長(zhǎng)，特異性高，靈敏度稍高于涂片——美國(guó)臨床數(shù)據(jù)——國(guó)內(nèi)臨床數(shù)據(jù)——國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)、結(jié)核菌素皮試——的臨床意義——陰性結(jié)果：、表示未受結(jié)核菌感染、某些情況下不排除已受結(jié)核菌感染,使用免疫抑制劑等;免疫功能低下如重癥結(jié)核病,慢性消耗性疾病,腫瘤,艾滋病,高齡等。、陰性也不表示沒(méi)有結(jié)核感染.值得注意的是假陰性情況,在臨床上有感染結(jié)核的確切依據(jù)而患者試驗(yàn)卻陰性,這種情況常見(jiàn)于以下疾病：初次感染結(jié)核菌～周以內(nèi),重度營(yíng)養(yǎng)不良,惡性腫瘤,機(jī)體免疫缺陷性疾?。ㄏ忍煨悦庖呷毕莅Y,艾滋病）,免疫抑制劑使用者等,個(gè)別老年人因機(jī)體變態(tài)反應(yīng)功能低下也常呈陰性反應(yīng)。結(jié)核菌素皮試——的臨床意義——陽(yáng)性結(jié)果：.一般陽(yáng)性和中度陽(yáng)性：結(jié)核病現(xiàn)癥患者；已受結(jié)核菌感染但并不意味著發(fā)病或患?。豢ń槊缃臃N所致變態(tài)反應(yīng)；.強(qiáng)陽(yáng)性：結(jié)核病患者；感染結(jié)核菌未發(fā)病者.強(qiáng)陽(yáng)性人群結(jié)核病的發(fā)病率高,在未找到病變時(shí)可作預(yù)防性治療。

與皮試的比較皮試()的影響因素、免疫力狀況——年齡、藥物、交叉反應(yīng)——卡介苗、環(huán)境分枝桿菌、檢測(cè)操作、結(jié)果判斷方法學(xué)比較——假陽(yáng)性—卡介苗接種—環(huán)境分枝桿菌假陰性—免疫力狀況—年齡（新生兒、老年人）—藥物特異性—不受卡介苗接種影響—不受環(huán)境分枝桿菌影響靈敏度—基本不受免疫力狀況影響—肺外結(jié)核檢出率高—藥物、年齡例：研究數(shù)據(jù)例懷疑結(jié)核病的非洲兒童平均年齡歲，約抗體陽(yáng)性，多數(shù)合并營(yíng)養(yǎng)不良例確診結(jié)核病的兒童中，陽(yáng)性率；陽(yáng)性率年齡、感染狀態(tài)和營(yíng)養(yǎng)不良的嚴(yán)重程度對(duì)結(jié)果無(wú)影響，但均能導(dǎo)致結(jié)果的顯著差異.方法學(xué)比較——

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(.)五、臨床及評(píng)價(jià)、將該產(chǎn)品（方法學(xué)）

寫入診療指南的國(guó)家（）英國(guó)、愛(ài)爾蘭、德國(guó)、法國(guó)、意大利、瑞士、荷蘭、葡萄牙、丹麥、挪威美國(guó)、加拿大日本、韓國(guó)、澳大利亞等指南解讀（一）建議用替代用于結(jié)核篩查德國(guó)、英國(guó)、瑞士、丹麥、波蘭等適用于抗α治療人群指南解讀（二）和兩者均可美國(guó)、法國(guó)、澳大利亞、日本等卡介苗()接種人群首選（美國(guó)）指南解讀（三）兩步法：先用，再用以提高靈敏度與特異性加拿大、西班牙、荷蘭、韓國(guó)、澳大利亞等主要適用于接觸追蹤、應(yīng)用方向）結(jié)核病輔助診斷療效評(píng)價(jià)“菌陰”結(jié)核病患者的輔助診斷肺外結(jié)核的鑒別診斷抗癆治療的療效評(píng)價(jià)）免疫力低下受抑制患者的結(jié)核診斷感染篩查使用生物制劑免疫抑制劑患者的結(jié)核感染篩查感染者腎透析患者器官移植患者）兒童結(jié)核病的輔助診斷）結(jié)核密切接觸者高危人群的結(jié)核感染篩查結(jié)核病患者的家屬醫(yī)務(wù)工作者監(jiān)獄囚犯）接觸追蹤對(duì)于“涂陰”結(jié)核病患者有很高的檢出率（）對(duì)于肺外結(jié)核病患者有很高的檢出率（）對(duì)于結(jié)核潛伏感染的檢測(cè)，不受卡介苗（）接種影響，比檢測(cè)更準(zhǔn)確不能夠提示臨床患者的病變部位不能夠根據(jù)斑點(diǎn)數(shù)量的多少來(lái)判斷受試者是活動(dòng)性結(jié)核病患者或是潛伏感染者對(duì)于結(jié)核癌癥患者的鑒別診斷，須結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行判斷科室特點(diǎn)消化科——腹水待查——腸結(jié)核的鑒別診斷——發(fā)熱待查——生物制劑治療前結(jié)核篩查科室特點(diǎn)呼吸傳染感染科——呼吸系統(tǒng)疾病與結(jié)核鑒別診斷——胸水心包積液鑒別診斷——肺外結(jié)核輔助診斷——發(fā)熱待查科室特點(diǎn)風(fēng)濕免疫科——生物制劑免疫抑制激素等藥物的使用——結(jié)核篩查——肺結(jié)核與肺間質(zhì)病的鑒別診斷——發(fā)熱待查科室特點(diǎn)兒科——兒童肺結(jié)核的輔助診斷——兒童肺外結(jié)核的鑒別診斷評(píng)價(jià)特異性好，不受卡介苗（）接種與環(huán)境分枝桿菌影響靈敏度高，受個(gè)體免疫功能低下