黃酮類化合物-鑒定與結構測定（天然藥物化學課件）

黃酮類化合物檢識技術1、化學檢識現(xiàn)象：黃酮（醇）、二氫黃酮（醇）：顯橙紅～紫紅色；查耳酮、橙酮、兒茶素：（—）陰性操作：樣品/甲醇+Mg粉+3d濃HCl1—2分鐘顯色（1）還原反應

①鹽酸鎂粉反應注意查耳酮、橙酮、兒茶素類則不顯反應；異黃酮除少數(shù)例外，均不顯色；花色素在濃鹽酸中也會發(fā)生色變，須先作空白對照實驗。（1）還原反應②四氫硼鈉反應操作：樣品/甲醇+NaBH4的甲醇液1分鐘+數(shù)滴濃HCl顯色現(xiàn)象：二氫黃酮、二氫黃酮醇紅~紫紅其它黃酮類（-）鑒別意義：此反應可用于二氫黃酮類、二氫黃酮醇類與其他黃酮類化合物的鑒別。其他黃酮類均無此現(xiàn)象。（2）金屬鹽類的絡合反應可以發(fā)生金屬鹽類絡合反應的基團：常見的金屬鹽類：鋁鹽、鎂鹽、鋯鹽等。OOOHOHOHOOH

①三氯化鋁反應：操作方法：在濾紙上滴加樣品液，再滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，通過紙斑點反應觀察現(xiàn)象?，F(xiàn)象：大多數(shù)黃酮顯黃色并有熒光。例外4'-OH或7，4'-二OH黃酮醇顯天藍色熒光。鑒別意義：黃酮類化合物的定性定量分析。（2）金屬鹽類的絡合反應②鋯鹽—枸櫞酸反應鑒別意義：區(qū)別3-OH

和/或

5-OH的存在。H2O注意：3-羥基黃酮產生的絡合物穩(wěn)定性大于5-羥基黃酮。

（2）金屬鹽類的絡合反應操作要點：樣品/MeOH2%ZrOCl2/MeOH溶液變黃有3-OH和/或5-OH2%枸櫞酸/MeOH仍顯黃色顯著褪色有3-OH無3-OH，有5-OH③醋酸鎂反應操作：在濾紙上滴加樣品液，噴以醋酸鎂的甲醇液，加熱干燥后觀察紙班點現(xiàn)象?，F(xiàn)象：二氫黃酮(醇)：天藍色熒光異黃酮、黃酮(醇)：黃-橙黃-褐色熒光鑒別意義：用于二氫黃酮、二氫黃酮醇類與其他黃酮類化合物的區(qū)別檢識。（2）金屬鹽類的絡合反應④氨性氯化鍶反應操作：將樣品的甲醇液置小試管中，加入3滴0.01mol/L氯化鍶甲醇液，再加3滴已用氨蒸氣飽和的甲醇溶液，現(xiàn)象：具有鄰二酚羥基結構的黃酮類化合物:綠～棕色及至黑色沉淀。鑒別意義：具有鄰二酚羥基結構的黃酮類化合物（2）金屬鹽類的絡合反應（3）堿性試劑反應①二氫黃酮類遇堿變成相應異構體查耳酮顯橙或黃色②氨熏后能使黃酮、黃酮醇類轉為亮黃色，紫外光下歡察更為明顯。氨熏放置后，顏色因氨揮發(fā)而褪色，故變色是可逆的；碳酸鈉顯色的顏色較穩(wěn)定。

③具有鄰二酚羥基結構的黃酮在堿液中由黃-棕色絮狀沉淀。（4）硼酸顯色反應黃酮類化合物分子中有羥基結構的存在時，在酸性條件下與硼酸反應生成亮黃色。例如：2、色譜檢識

常采用硅膠或聚酰胺薄層色譜。

①硅膠薄層色譜：

【用途】用于分析與鑒定弱極性黃酮類化合物。

【展開劑】甲苯-甲酸甲酯-甲酸(5:4:1)，苯-甲醇，氯仿-甲醇等。②聚酰胺薄層色譜：

【用途】分離大多數(shù)黃酮及苷類，適用范圍廣，分離效果好。

【展開劑】聚酰胺對黃酮類化合物吸附能力強，大多數(shù)展開劑中含有醇、酸或水。（1）薄層色譜鑒定

【用途】適用于各種黃酮類化合物及其苷類的分析；

【展開劑】

黃酮類化合物一般宜用極性相對較小的“醇性”溶劑展開；黃酮苷類宜用極性相對較大的“水性”展開劑；黃酮苷和苷元混合物的分離和檢識常用雙向紙色譜法，第一向通常用“醇性”展開劑展開，第二向用極性大的“水性”展開劑展開。

（2）紙色譜苷元：分配色譜。流動相：正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5上層，BAW)系統(tǒng)。苷：雙向紙色譜。第一向：醇性溶劑展開，例如正丁醇-冰醋酸-水(4：1：5上層，BAW)系統(tǒng)，化合物極性大，吸附強。第二向：水性溶劑展開，例如