新機體免疫功能檢測課件

機體免疫功能檢測免疫應答的類型及組成分兩種類型一.非特異性免疫應答二.特異性免疫應答一.非特異性免疫應答（固有性免疫應答，)（一）概念：人類在種系發(fā)展過程中形成的并可遺傳給后代的免疫力，它是天生具有的，不專門針對某種物質(zhì)。（二）特點：.先天獲得，人人皆有；比較穩(wěn)定，并可遺傳給下一代.不因同一抗原進入機體次數(shù)多少改變反應強弱.發(fā)揮作用迅速（三）組成.皮膚、黏膜的機械阻擋作用及局部分泌的抑菌、殺菌物質(zhì).吞噬細胞的吞噬作用()細胞對病毒感染靶細胞的殺傷作用.血液、體液中的抗菌分子：補體、溶菌酶二.特異性免疫應答（適應性免疫應答，)（一）概念：具有特異性，即針對某一特定物質(zhì)而發(fā)生反應，包括細胞免疫和體液免疫（二）特點：.后天獲得.有個體差異.免疫發(fā)生強弱與抗原進入次數(shù)有關(guān)（三）組成細胞免疫：由主導完成，其效應物質(zhì)是致敏()體液免疫：由主導完成，其效應物質(zhì)是第二節(jié)人體免疫功能檢測非特異免疫功能體液中殺菌物質(zhì)——補體、溶菌酶吞噬細胞——大、小吞噬細胞（數(shù)量、功能）

特異性免疫功能細胞免疫功能細胞數(shù)量功能體液免疫功能細胞數(shù)量功能人特異免疫功能的檢測一細胞數(shù)量的檢測二細胞功能的檢測三細胞數(shù)量的檢測四細胞功能的檢測一細胞的計數(shù)（細胞表面標志的檢測）（一）特異性抗原的檢測細胞表面有一些特異的抗原，根據(jù)這些不同的抗原可鑒定不同的細胞群體抗原：淋巴細胞群（簇）分化抗原不同群淋巴細胞在分化成熟過程中，細胞表面出現(xiàn)或消失的抗原分子細胞表面主要抗原及其特異性

抗原特異性受體、全部細胞和部分細胞成熟細胞（輔助）細胞、、受體（殺傷抑制）細胞、細胞的亞型活化細胞、受體檢測淋巴細胞表面抗原中:的數(shù)量表示成熟的總淋巴細胞的數(shù)量，的數(shù)量表示是細胞的數(shù)量，的數(shù)量表示是細胞的數(shù)量?！荨Ｃ庖吖δ懿罨蛘呙庖吖δ芪蓙y，該比值小于檢測方法：用已標記的抗抗原的單克隆抗體檢測.免疫熒光法：用熒光素標記的單抗作為試劑染色淋巴細胞，計算出染上熒光的淋巴細胞百分率如：熒光標記的抗單抗淋巴細胞計數(shù)個，染上熒光的為細胞染色.免疫細胞化學法：用酶標記的單抗檢測淋巴細胞

淋巴細胞印片淋巴細胞表面抗原與相應單抗結(jié)合加底物細胞上有顏色為陽性細胞用酶標記的單抗洗滌染色（二）細胞特異性受體（受體）的檢測花環(huán)形成試驗()原理：淋巴細胞表面含有綿羊紅細胞（)受體（)，當淋巴細胞與綿羊紅細胞相遇時，細胞通過該受體吸附綿羊紅細胞而形成花環(huán)。,紅細胞花環(huán)形成試驗據(jù)實驗條件不同又分兩種：花環(huán)形成試驗（,總花環(huán)）花環(huán)形成試驗（,活性花環(huán)）花環(huán)形成試驗分離出淋巴細胞(:)°、低速離心°、計數(shù)個中形成花環(huán)的意義：代表細胞總數(shù)（凡是細胞均能形成花環(huán)），數(shù)量低于正常，說明細胞免疫功能差。正常值：花環(huán)形成試驗分離出淋巴細胞(:)、低速離心°、，計數(shù)個中形成花環(huán)的意義：能形成花環(huán)的細胞是活性強的細胞，花環(huán)形成率更能反映細胞免疫功能的情況。正常值：二細胞功能的檢測檢測細胞功能的試驗有：（一）淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗（二）相關(guān)的細胞因子的檢測（在細胞因子章節(jié)介紹）（三）淋巴細胞的細胞毒性檢測（一）淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗.原理淋巴細胞在某些物質(zhì)刺激下，細胞增殖、分化（如細胞變大、胞漿增多、出現(xiàn)空泡）合成增加（核染色質(zhì)疏松，核仁出現(xiàn)），轉(zhuǎn)化成為淋巴母細胞。

.刺激物一般分有絲分裂原（非抗原）和抗原兩類：（）非抗原刺激物（有絲分裂原）可刺激相關(guān)的一類淋巴細胞發(fā)生增殖轉(zhuǎn)化，與機體是否曾受過某一抗原致敏無關(guān)。

非抗原刺激物刺激物能刺激發(fā)生轉(zhuǎn)化細胞植物血凝素（)刀豆素()脂多糖()、美洲商陸()、（）抗原刺激物只能使曾經(jīng)被相應抗原刺激（致敏）過的淋巴細胞發(fā)生增殖轉(zhuǎn)化。.試驗方法（）形態(tài)學檢測法將待測者血取出，加入一定量刺激物（一般用)培養(yǎng)，天后涂片染色，計數(shù)個中轉(zhuǎn)化淋巴細胞即淋巴母細胞（根據(jù)形態(tài)）的百分率。正常值～操作過程：試驗管:抗凝血－培養(yǎng)液對照管：抗凝血培養(yǎng)液°培養(yǎng)天涂片染色計數(shù)個中轉(zhuǎn)化淋巴細胞的百分率轉(zhuǎn)化與未轉(zhuǎn)化淋巴細胞的區(qū)別轉(zhuǎn)化細胞未轉(zhuǎn)化細胞特點母細胞過渡型小淋巴細胞細胞大?。ㄖ睆剑│苔苔贪巳旧|(zhì)疏松疏松致密核仁個有或無無分裂相有或無無無量豐富稍寬窄嗜堿性強、深蘭色蘭色天青蘭空泡有或無有或無無偽足有或無有或無無胞漿形態(tài)學方法的優(yōu)缺點優(yōu)點：簡便、不需要特殊儀器，無有害物（放射性物質(zhì)）污染。缺點：判斷結(jié)果不客觀，受主觀因素影響，結(jié)果判斷難以規(guī)范化。（）同位素摻入法（摻入法）原理：細胞受刺激后，細胞進入增殖周期,發(fā)生有絲分裂合成。試驗中當細胞進入期時，在培養(yǎng)液中加入胸腺嘧啶核苷（)，細胞攝入，合成,根據(jù)摻入細胞內(nèi)的同位素量，推測細胞增殖程度，從而判斷淋巴細胞轉(zhuǎn)化程度。步驟：外周血分離淋巴細胞洗滌次計數(shù)并配成×細胞°加μ孔°收集細胞于濾膜上°分鐘置有閃爍液的閃爍瓶中用閃爍計數(shù)儀測（每分鐘脈沖數(shù)）計算刺激指數(shù)：刺激指數(shù)()實驗組對照組正常值：同位素摻入法的優(yōu)缺點優(yōu)點：結(jié)果客觀準確，有取代形態(tài)學法的趨勢缺點：技術(shù)要求高，操作中每一個因素的改變都可影響結(jié)果；需要特殊儀器檢測；有同位素污染問題（）比色法—四甲基偶氮唑鹽淋巴細胞受刺激物刺激培養(yǎng)過程中，細胞增殖活化，在細胞培養(yǎng)終止前小時，加入，繼續(xù)培養(yǎng)。

在細胞線粒體琥珀酸脫氫酶的作用下，被還原成藍黑色的甲瓚，形成的甲瓚量與細胞增殖呈正相關(guān)。終止培養(yǎng)后加入二甲亞砜，使甲瓚溶解。在酶標儀上測，可反映細胞增殖水平。以刺激指數(shù)（）判斷淋巴細胞增殖程度。試驗孔對照孔本法敏感性不及摻入法，但操作簡單，無放射性污染。（二）細胞因子檢測細胞因子的檢測應注意的問題.欲了解免疫功能情況，應檢測多項細胞因子，如細胞免疫應測、、等.局部取標本：細胞因子由局部細胞產(chǎn)生，在血液中濃度極低，最好取局部體液或細胞.動態(tài)檢測比較，如疾病的復發(fā)期、緩解期、恢復期.同一細胞因子選用多種方法檢測，生物活性檢測與其他方法檢測結(jié)果不一定平衡（一個是功能，一個是量）細胞因子檢測方法生物學方法免疫學方法分子生物學方法（一）生物學方法原理：根據(jù)不同細胞因子生物學活性（功能)不同而設計的方法如可促進淋巴細胞生長；可殺腫瘤細胞；可刺激造血細胞形成集落；可保護細胞免受病毒攻擊。具體方法：細胞增殖法靶細胞殺傷法誘導的產(chǎn)物分析法細胞病變抑制法.細胞增殖法原理：一些細胞因子可專一刺激某些細胞增殖，而且細胞增殖的程度與這些細胞因子活性呈正相關(guān)。如：——細胞，——肥大細胞，——漿細胞。這些只依賴某種細胞因子才能生長的細胞系又稱為依賴細胞株。如人對鼠細胞有支持生長作用一定數(shù)量鼠細胞每孔分別加不同劑量的培養(yǎng)根據(jù)鼠細胞生長情況，可制作的標準曲線（數(shù)孔）.靶細胞殺傷法有的細胞因子能殺傷靶細胞（腫瘤細胞），利用同位素釋放法或染色法等可判定其殺傷率.細胞因子誘導的產(chǎn)物分析法某些細胞因子可刺激特定的細胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，通過測定其誘生產(chǎn)物來反映細胞因子活性如、可誘導骨髓產(chǎn)生組胺；誘導肝細胞產(chǎn)生抗糜蛋白酶；.細胞病變抑制法干擾素可阻止病毒侵害細胞，可用相關(guān)試驗來檢測驗干擾素含量。如血凝素生成抑制試驗：小鼠腦脊髓心肌炎病毒可感染人肺癌細胞，該病毒在生長過程中可產(chǎn)生血凝素，使人型凝集試驗管：細胞（已長好）加一定量干擾素培養(yǎng)一定時間加病毒培養(yǎng)反復凍融稀釋不同倍數(shù)加型血球觀察凝集情況陽性對照加標準；陰性對照不加。在標準劑量曲線上查出量（二）免疫學檢測法細胞因子為蛋白質(zhì)或多肽，具有較強的免疫原性，可用其特異抗體來檢測。最常用的檢測方法是和放免法、化學發(fā)光法。定量測定（三）分子生物學方法利用細胞因子基因探針檢測特定的細胞因子表達的技術(shù)常用的方法：斑點雜交、逆轉(zhuǎn)錄、、細胞或組織原位雜交等試劑：核酸探針——一段用放射性同位素或其他標記物（生物素、地高辛等）標記的一段片段，或單鏈、，它可與目的基因（細胞因子)互補此法靈敏、快速三種方法優(yōu)缺點比較優(yōu)點缺點生物學敏感、測功能長期培養(yǎng)依賴細胞株、費時步驟煩瑣、影響因素多免疫學簡單、迅速只檢測量，不代表活性，敏感重復性好度低（較生物學法低倍）分子生敏感、快速測基因表達情況，不能直接提物學供濃度和活性（三）細胞介導的細胞毒試驗細胞毒性細胞（)具有殺傷靶細胞的功能，它是評價機體細胞免疫水平的指標。檢測這種殺傷作用的試驗稱為細胞毒試驗。與靶細胞表面相應抗原結(jié)合通過脫顆粒，釋放穿孔素、顆粒酶，使靶細胞溶解、凋亡。靶細胞穿孔素、顆粒酶靶細胞溶解、凋亡致敏淋巴細胞殺傷靶細胞的顆粒外排途徑和途徑聯(lián)合殺傷靶細胞的過程殺傷具有高度的抗原特異性及嚴格的限制性連續(xù)殺傷靶細胞的殺傷特點：抗原特異性、限制性、高效性與連續(xù)性方法.形態(tài)學方法淋巴細胞與靶細胞按一定比例加在一起培養(yǎng)一段時間，染色后計數(shù)殘留靶細胞（腫瘤細胞）數(shù)，計算淋巴細胞抑制腫瘤細胞生長的抑制率。對照組（不加，只有腫瘤細胞）：對照組平均殘留腫瘤細胞數(shù)實驗組（腫瘤細胞）：實驗組平均殘留腫瘤細胞數(shù)抑制率對照組實驗組對照組.同位素法：常用釋放試驗原理：用標記靶細胞（一般為腫瘤細胞），將它與待測淋巴細胞（效應細胞）一起培養(yǎng)，效應細胞（）破壞靶細胞，釋放出來，測定其數(shù)量，即可推知效應細胞的殺傷能力。方法：效應細胞：受檢者外周血單個核細胞靶細胞：用鉻酸鈉（)標記傳代腫瘤細胞分三組：.最大釋放組：μ靶μ(靶細胞全溶).自發(fā)釋放組：μ靶μ培養(yǎng)液.實驗組：μ靶μ培養(yǎng)液μ效應效：靶分別為：；：；：培養(yǎng)后取上清測計算特異溶解百分率：實驗組自發(fā)釋放組最大釋放組自發(fā)釋放組特異溶解百分率大于為陽性細胞免疫功能體內(nèi)檢測法—Ⅳ型超敏反應皮試原理：Ⅳ型超敏反應的本質(zhì)是細胞免疫，Ⅳ型超敏反應如為陽性，可反映細胞免疫功能好。所用抗原：或以為例：

皮內(nèi)注射，—觀察結(jié)果。紅腫硬結(jié)直徑大于，為陽性該試驗設計是基于人群中的人均感染過結(jié)核菌（被結(jié)核抗原致敏），致敏淋巴細胞再次接觸抗原（如)后，釋放出細胞因子，使局部產(chǎn)生以巨噬細胞、淋巴細胞浸潤為主的炎癥反應（表面為紅腫硬結(jié)）。陽性（直徑>)：曾感染過結(jié)核菌，細胞免疫功能好陰性(直徑<)：細胞免疫功能差或從未感染過結(jié)核菌強陽性（直徑>)：表明現(xiàn)處于結(jié)核的活動期

三細胞數(shù)量的檢測（一）細胞表面識別抗原受體（）（,)的檢測是細胞表面膜免疫球蛋白，存在于成熟淋巴細胞膜上，為細胞結(jié)構(gòu)蛋白。類型為：、型。作用及意義：.是細胞的表面標志.是細胞識別抗原的受體.檢測外周血淋巴細胞時，表面有者為細胞，故可作為檢測細胞數(shù)量的方法。.方法（常用免疫熒光法）（）試劑：熒光標記的抗人、抗體（）外周血淋巴細胞涂片，熒光抗體染色（）觀察：陽性細胞呈均染上熒光.正常值：（二）細胞表面抗原的檢測細胞表面特有的抗原有：、，用抗的單抗（免疫熒光法、酶免疫組化法）檢測外周血淋巴細胞，陽性細胞為淋巴細胞，約占總淋巴細胞的。以上兩種方法中，檢測細胞膜表面的方法用得多些。四細胞功能的檢測（一）血清中的測定人的體液免疫功能正常（細胞功能正常），應反映在血清中有正常量的免疫球蛋白檢測人免疫球蛋白常用方法：單向瓊脂擴散試驗、免疫比濁法正常值：()