中藥化學苷類課件

第5節(jié)苷的提取、分離及檢識苷的提?。喝軇┓ㄜ盏姆蛛x：大孔樹脂法色譜法苷的檢識：化學檢識色譜檢識

第5節(jié)苷的提取、分離及檢識苷的提取：溶劑法11.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有沸水、甲(乙)醇、正丁醇、乙酸乙酯等。！注意：苷的水解（酸、酶、堿的影響）。原生苷的提?。浩茐幕蛞种泼傅幕钚?。藥材迅速干燥拌料無機鹽如碳酸鈣用沸水、高濃度醇提取次生苷或苷元的提?。豪妹富钚?。發(fā)酵后或水解后，用親脂性有機溶劑提取。1.苷的提取溶劑法：用極性由小到大的溶劑依次提取。常用溶劑有2中藥化學苷類課件32.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后，用合適的溶劑處理，根據苷類與雜質的溶解度不同分離。如乙醚、丙酮沉淀皂苷等。鉛鹽沉淀法：利用醋酸鉛在水或稀醇中能沉淀某類成分的性質，進行除雜或提純。中性醋酸鉛能沉淀具鄰二酚OH、-COOH的酸性苷；堿式醋酸鉛能沉淀酚性成分。色譜法：利用混合物中各組分與固定相和流動相的相互之間的作用不同，使各組分以不同程度分布在固定相和流動相中，當流動相流過固定相時，各組分以不同的速度移動，達到分離。分離效果好，是一種實驗室常規(guī)分離方法。2.苷的分離純化溶劑處理法：利用溶解度差異分離。提取液濃縮后4

按流動相分：液相色譜（liquidchromatography）氣相色譜（gaschromatography）按操作方式分：薄層色譜紙色譜柱色譜按分離機理分：吸附色譜分配色譜離子交換色譜按極性分：正相色譜反相色譜色譜法（Chromatography）分類：按流動相分：液相色譜（liquidchromatogra52.苷的分離純化大孔樹脂吸附色譜原理：大孔樹脂是一類具有多孔結構、不溶于水的固體高分子物質，可以通過物理吸附（范德華力）從水溶液中有選擇的吸附成分，達到分離目的。特點：選擇性、機械強度高、再生處理方便、吸附速度快等。應用廣泛，如苷與糖類的分離等。分類：非極性、中極性、極性和強極性四類。選擇的樹脂極性與被分離物質極性既不能相似（吸附過強），也不能差太大（無法分離）。常用的有DA-101、DA-201、AB-8型等。操作：樣品用水溶解，上樣后依次用水、含水醇、濃醇洗脫。收集洗脫液，回收溶劑，濃縮干燥，即得。聚酰胺色譜凝膠色譜苷的分離（有效部位）：2.苷的分離純化大孔樹脂吸附色譜苷的分離（有效部位）：62.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類或苷元的分離。利用被分離組分與吸附劑之間的相互作用（可逆的范德華力）差異進行分離。在洗脫過程中，柱內不斷地發(fā)生解吸、吸附，再解吸、再吸附的過程。即被吸附的物質被溶劑解吸而隨溶劑向下移動，又遇到新的吸附劑顆粒被再吸附，后面流下的溶劑又再解吸而使其下移動。經過一段時間以后，該物質會向下移動一定距離。此距離的長短與吸附劑對該物質的吸附力以及溶劑對該物質的解吸(溶解)能力有關。不同的物質由于吸附力和解吸力不同，移動速度也不同。吸附力弱而解吸力強的物質，移動速度就較快。分配色譜：以硅膠、纖維素等為支持劑，水飽和的溶劑為流動相進行分離，適用于極性較大的苷類成分。常用反相色譜，即以鍵合硅膠為固定相，含水的溶劑系統(tǒng)為流動相分離。苷的純化（有效成分）：2.苷的分離純化硅膠、氧化鋁吸附色譜：適用于極性低的苷類或苷7中藥化學苷類課件8中藥化學苷類課件9中藥化學苷類課件103.苷的檢識化學檢識Molish反應（α-萘酚濃硫酸）：糖、苷（＋）紫色環(huán)。糖被氧化成糠醛，糖醛與酚胺縮合生成有色化合物。Fehling或Tollen反應：還原糖（＋）。苷、非還原糖(-)。比較水解前后結果，判斷是糖還是苷。

RCHO+2Ag(NH3)2+OH－→RCOONH4+2Ag↓+3NH3+H2ORCHO+2Cu(OH)2+NaOH→RCOONa+Cu2O↓+3H2O3.苷的檢識化學檢識11第6節(jié)苷的結構研究純度鑒定分子式的測定苷的水解苷元的結構鑒定糖的結構鑒定第6節(jié)苷的結構研究純度鑒定12糖的結構鑒定糖的種類糖的數目糖鏈的結構位置：苷元-糖、糖-糖順序：糖-糖構型：苷鍵糖的結構鑒定糖的種類131.糖的種類的確定色譜法—測定水解液中的單糖，與對照品比較。PC：最常用。TLC：點樣量較少≤5μg。可用無機鹽（強堿弱酸）的水溶液制板，增加樣品承載量，改善分離效果。如0.3mol/LNa2HPO4、0.03mol/LH3BO3等。HPLC：直接進樣，但靈敏度不及GC。GC：靈敏度高，但需水解、制備衍生物。NMR法—直接測定苷，與標準品的糖數據比較。1HNMR、13CNMR二維NMR1.糖的種類的確定色譜法—測定水解液中的單糖，與對照品比較。14常見單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,上層）BEW：正丁醇－乙醇－水（4:1:2）BBPW：正丁醇－苯－吡啶－水（5:1:3:3）PhOH：水飽和苯酚

常見單糖紙色譜hRfBAW：正丁醇－醋酸－水（4:1:5,152.糖的數目的確定MS法測定苷和苷元分子量，根據差值或碎片質荷比差值計算。色譜法—測定水解液中的單糖TLC-Scan、HPLC-定量，以單糖對照品為標準。NMR法1HNMR：根據糖端基質子信號數目確定；或全乙?；?、全甲基化數目推測。13CNMR：根據糖端基碳信號數目（90-112ppm）確定；或苷和苷元碳信號差值推斷。二維NMR

2.糖的數目的確定MS法163.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR苷化位移（glycosylationshift,GS）：苷元與糖結合成苷后，苷元的成苷碳原子（α-C）與相鄰的碳原子（β-C）信號會發(fā)生位移，其他碳信號不變；糖端基碳原子與游離單糖信號相比也發(fā)生了位移。苷元：醇苷，α-C低場位移4-10ppm

β-C高場位移1-4.6ppm酚苷，α-C高場位移β-C低場位移糖：端基C低場位移4-7ppm相鄰C高場位移1-4ppm

二維NMR

3.糖的連接位置—苷元與糖13CNMR1713CNMR

法：苷的碳譜數據與單糖的碳譜數據比較，根據苷化位移規(guī)律可確定單糖的連接位置。若內側糖的某碳原子向低場移動（4-7ppm），而相鄰兩個碳原子又略向高場移動（1-4ppm），確定內側糖的碳原子是連接糖的位置。4.糖的連接位置—糖與糖13CNMR法：苷的碳譜數據與單糖的碳譜數據比較，根據苷化186.苷鍵構型的確定酶水解法麥芽糖酶水解α-苷鍵苦杏仁苷酶水解β-苷鍵NMR6.苷鍵構型的確定酶水解法191HNMR：糖成苷后，端基質子常位于較低場。H-2’為a鍵的糖，如葡萄糖，形成α-苷或β-苷時，偶合常數J不同，由此可判斷苷鍵構型。H-2’為e鍵的糖，如鼠李糖，形成不同構型苷的J值相近，無法判斷。ａ-L-鼠李糖苷J1’2=Jae=2-3Hzβ-L-鼠李糖苷J1’2=Jae=2-3Hz1HNMR：糖成苷后，端基質子常位于較低場。ａ-L-鼠李糖苷2013CNMR：糖成苷后端基碳原子δ向低場位移，而其他碳變化不大。2D-NMR（NOE）α-D-葡萄糖苷，H1~H2

β-D-葡萄糖苷，H1~H3、H1~H513CNMR：糖成苷后端基碳原子δ向低場位移，而其他碳變化不21復習思考題：1.名詞解釋苷原生苷次生苷乙酰解反應酶解反應Smith降解Molish反應α與β構型全甲基化甲醇解苷化位移端基碳氧苷

2.比較以下各化合物水解難易，并說明理由。A>