癌癥的基因診斷和反義核酸基因治療治療-課件

“癌癥的基因診斷和反義核酸基因治療治療”

專題匯報(bào)1ppt課件

一、一般情況介紹時(shí)間：9月11日——9月17日地點(diǎn)：福建省血液病研究所福建醫(yī)科大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院血液內(nèi)科學(xué)員來(lái)源：黑龍江云南江西湖南廣東南寧福建講授方式

CAI博導(dǎo)+博士+技術(shù)員內(nèi)容：理論和實(shí)驗(yàn)部分理論部分：13個(gè)專題（講座）實(shí)驗(yàn)部分：8項(xiàng)內(nèi)容（示范）2ppt課件福建醫(yī)科大學(xué)內(nèi)科博士點(diǎn)福建省“211工程”重點(diǎn)學(xué)科福建省科委的優(yōu)先發(fā)展研究所福建省教委和福建省衛(wèi)生廳的重點(diǎn)學(xué)科國(guó)家藥品監(jiān)督管理局的臨床藥理基地專業(yè)技術(shù)人員67人，教授6人，副高10人國(guó)家級(jí)專家博導(dǎo)3人碩導(dǎo)9人62項(xiàng)科研成果（國(guó)際、國(guó)家、省部及省廳級(jí)）培養(yǎng)博士22人碩士45人研究方向癌癥的基因診斷和基因治療細(xì)胞因子與造血調(diào)控造血細(xì)胞培養(yǎng)與造血干細(xì)胞移植福建省血液病研究所簡(jiǎn)介3ppt課件1、反義核酸基因治療癌癥研究現(xiàn)狀與展望2、基因轉(zhuǎn)移在腫瘤治療中的應(yīng)用3、反義技術(shù)在體外凈化中的應(yīng)用4、癌癥Bcl-2基因5、癌癥的c-myc基因診斷及反義核酸基因治療6、癌癥MDR1基因7、慢粒白血病bcr-abl融合基因的檢測(cè)及基因治療8、寡脫氧核苷酸的合成及純化9、癌癥基因缺損的測(cè)序診斷10、核酶在癌癥基因治療中的應(yīng)用11、肽核酸在癌癥治療應(yīng)用中進(jìn)展12、白血病細(xì)胞因子自分泌及其意義13、裸鼠、Scid鼠腫瘤模型的建立及其應(yīng)用內(nèi)容理論4ppt課件1、免疫組化2、癌基因熒光定量PCR3、癌細(xì)胞系的培養(yǎng)與保存技術(shù)4、FCM5、癌癥基因缺損的測(cè)序診斷技術(shù)6、基因藥物反義核酸的純化7、動(dòng)物模型的建立及反義核酸治療癌癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)考試1.5小時(shí)實(shí)驗(yàn)部分5ppt課件現(xiàn)代科學(xué)證明人類所有的疾病都與基因變異或受損有關(guān)人類現(xiàn)有的18000種疾病第一類單基因病如血友病、多指病第二類多基因病如癌癥、糖尿病、高血壓、冠心病、哮喘病等第三類獲得性基因病如病毒性肝炎二、反義核酸基因治療癌癥研究現(xiàn)狀與展望6ppt課件基因:具有遺傳效應(yīng)的DNA片斷人類總基因15.3萬(wàn)個(gè)3.8萬(wàn)已肯定

11.5萬(wàn)個(gè)可能長(zhǎng)度為地球太陽(yáng)來(lái)回6次基因組或稱詞典

20bp/second需11年讀完7ppt課件DNA由堿基互補(bǔ)的兩條單鏈組成，模板鏈稱正義鏈互補(bǔ)單鏈稱反義鏈反義核酸人工合成一段與靶基因mRNA以堿基互補(bǔ)結(jié)合，從而阻斷其表達(dá)的寡核苷酸序列包括：反義DNA

反義RNA核酶

AntisenseOligodeoxynucleotidesAS-ODN8ppt課件反義核酸作為基因治療藥物必須具備的條件1、能進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)，并有一定濃度2、細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)半衰期3、對(duì)抗細(xì)胞內(nèi)、血漿和體液的核酶的降解4、特異性識(shí)別靶細(xì)胞并穩(wěn)定結(jié)合5、能人工合成6、使用安全有效9ppt課件注意1、AS-OND長(zhǎng)度的優(yōu)化選擇

16-20bp最佳2、AS-ODN進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)的機(jī)制蛋白受體介導(dǎo)的胞吞作用

AS-ODN帶負(fù)電荷3、AS-ODN的修飾和細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性甲基磷酸酯硫代磷酸酯肽核酸10ppt課件HOPOOHH堿基HCH2HOOHH堿基HCH2HHOPOX-=O11ppt課件1、新的化學(xué)物質(zhì)——寡核苷酸2、新的藥物受體——mRNA3、新的受體結(jié)合方式——堿基互補(bǔ)雜交4、新的藥物受體結(jié)合反應(yīng)——

RnaseH介導(dǎo)的靶mRNA的降解反義藥物與傳統(tǒng)藥物的不同特異性強(qiáng)準(zhǔn)確性高應(yīng)用前景廣闊組織分布除腦以外的所有組織主要為腎肝脾及骨髓12ppt課件AS-PS-ODNBcl-2mRNA抑制細(xì)胞凋亡c-mycmRNA細(xì)胞增殖和分化c-mybmRNA(p75)造血細(xì)胞增殖和分化MDR1mRNA(p170)多藥耐藥Bcr-ablmRNA(p210)抗凋亡13ppt課件反義核酸對(duì)腫瘤細(xì)胞株的作用細(xì)胞株:HL-60K562U937原代白血病細(xì)胞株:

AMLALLAPLCML等反義核酸作用的靶基因:

Bcl-2c-mycc-fosc-sycMDRbcr-ablp5314ppt課件反義藥物對(duì)實(shí)體瘤動(dòng)物模型的藥效學(xué)研究動(dòng)物模型MMP-2PKC-ac-mycPKAI端粒酶RNAC-raf-1PKAbcl-2人結(jié)腸癌人膀胱癌人黑色素瘤人腎癌人惡膠質(zhì)瘤人肺癌人結(jié)腸癌肝細(xì)胞癌效果預(yù)防肝轉(zhuǎn)移抗癌效果呈序列特異性和濃度依賴性顯著抑制腫瘤生長(zhǎng),

延長(zhǎng)生存期腫瘤生長(zhǎng)抑制率為50%腫瘤縮小50%腫瘤生長(zhǎng)呈劑量依賴性降低腫瘤生長(zhǎng)呈劑量依賴性抑制抑制肝細(xì)胞癌生長(zhǎng)癌細(xì)胞類型靶基因15ppt課件反義藥物治療實(shí)體瘤的臨床研究ISIS5132C-raf

各種實(shí)體瘤、淋巴瘤臨床II期部分病例延長(zhǎng)疾病穩(wěn)定期7-10個(gè)月ISIS3521PKC-a各種實(shí)體瘤,包括卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、腦瘤臨床II期部分有效ISIS2503Ha-ras間皮瘤、結(jié)腸癌、胰腺癌等臨床I期部分病例延長(zhǎng)疾病穩(wěn)定期16ppt課件Bcl-2c-mycc-mybMDR1Bcr-abl的表達(dá)、檢測(cè)和反義核酸治療的應(yīng)用范圍略17ppt課件核酶在癌癥基因治療中的應(yīng)用核酶是指一類具有催化活性的RNA分子可特異性地與靶RNA分子配對(duì)，對(duì)底物進(jìn)行切割，促進(jìn)RNA的降解從而使其失去生物學(xué)功能分六類：第一型內(nèi)含子第二型內(nèi)含子

RnaseP發(fā)夾式核酶斧頭式核酶錘頭式核酶18ppt課件NNNNNNNNNUXNNNNNNNNNNNNNNNNNACNNNNNNNACAUGAGCGGANNNNNNN催化部分

NNNN前臂后臂N:A/C/G/UX:C/U/A切割點(diǎn)19ppt課件1、Kobayashi等MDR1基因轉(zhuǎn)錄物核酶導(dǎo)入MOLT3/TMQ800細(xì)胞系,

對(duì)長(zhǎng)春新堿的敏感性提了35倍3、將bcr/abl接合區(qū)序列的錘頭型核酶的cDNA插入逆轉(zhuǎn)錄病毒載體,導(dǎo)入

K562細(xì)胞,抑制生長(zhǎng),誘導(dǎo)凋亡2、Kashani等對(duì)H-ras的核酶導(dǎo)入人膀胱癌細(xì)胞株EJ細(xì)胞體外生長(zhǎng)受抑制,

體內(nèi)致癌性及侵襲力明顯下降20ppt課件肽核酸在癌癥治療中的應(yīng)用反義治療反基因策略：通過(guò)寡核苷酸與雙鏈DNA結(jié)合形成局部的三鏈結(jié)構(gòu)來(lái)抑制基因的轉(zhuǎn)錄肽核酸基因原位修復(fù)21ppt課件OBOOP=OOOBOOP=OODNABNHNBO=O=ONH=N=PNA22ppt課件三、基因轉(zhuǎn)移在腫瘤治療中的應(yīng)用精確定位：兩方面(AFPCEA)有效性：安全性：基因表達(dá)量和持續(xù)時(shí)間的控制：1、轉(zhuǎn)移基因的要求23ppt課件2、基因轉(zhuǎn)移的載體⑴逆轉(zhuǎn)錄病毒載體⑵腺病毒載體⑶腺病毒相關(guān)載體⑷物理轉(zhuǎn)移（脂質(zhì)體、裸DNA、生物槍）24ppt課件逆轉(zhuǎn)錄病毒載體只能感染分裂細(xì)胞腺病毒載體不能將基因整合到細(xì)胞染色體上腺相關(guān)病毒載體則避免了上述缺點(diǎn)25ppt課件⑴腫瘤基因的修飾A

腫瘤基因的修正修復(fù)一個(gè)或多個(gè)缺陷基因B

前體藥物代謝酶

TK/GCV系統(tǒng)毒性作用和旁觀效應(yīng)C

腫瘤疫苗

3、腫瘤基因治療的策略26ppt課件未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞提呈成熟樹(shù)突狀細(xì)胞第二信號(hào)腫瘤細(xì)胞消化處理抗原+MHC1,肽復(fù)合物共刺激分子基因轉(zhuǎn)移特異抗原或佐劑基因腫瘤細(xì)胞分泌細(xì)胞因子殺傷T淋巴細(xì)胞毒細(xì)胞27ppt課件⑵宿主免疫系統(tǒng)基因的修飾T細(xì)胞修飾白血病患者移植物抗宿主反應(yīng)（+）異基因移植物白血病復(fù)發(fā)低白血病患者（同

卵雙生或去除T細(xì)胞的病人）白血病復(fù)發(fā)率高移植物抗白血病作用（GVL）28ppt課件B-細(xì)胞+EBVCTL被殺滅免疫缺陷前B細(xì)胞逃脫CTL攻擊淋巴瘤EBV免疫供者取外周血CTLGVL29ppt課件⑶改變宿主對(duì)細(xì)胞毒藥物的耐藥性

用逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)移MDR1基因到小鼠祖細(xì)胞已證實(shí)能減少化療引起的骨髓移植30ppt課件1、反義藥物因有6個(gè)條件，具有廣闊的應(yīng)用前景2、腫瘤細(xì)胞的死亡應(yīng)包括壞死和凋亡兩個(gè)方面3、