單克隆抗體課件-002

專題2細(xì)胞工程動(dòng)物細(xì)胞融合與單克隆抗體

肺癌在全國(guó)的發(fā)病率居腫瘤之首，小細(xì)胞肺癌是惡性程度最高的一種，上海腫瘤研究所細(xì)胞與分子免疫研究室在國(guó)內(nèi)率先研制出一種名叫“2F7”的靶向生物導(dǎo)彈。這種生物導(dǎo)彈對(duì)小細(xì)胞肺癌具有特定靶向性。“生物導(dǎo)彈”這個(gè)“生物導(dǎo)彈”與你知道的哪個(gè)物質(zhì)有關(guān)？問(wèn)題：什么是抗體？抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？與抗原作用的特點(diǎn)？其化學(xué)本質(zhì)是什么？機(jī)體受抗原刺激后，漿細(xì)胞產(chǎn)生的，能與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的免疫球蛋白抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法從血清中分離抗體該法制備抗體的缺點(diǎn)：

產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差多種漿細(xì)胞動(dòng)物體內(nèi)多種抗體抗原注射抗原，血清分離抗原免疫抗血清讀下面一段文字資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的漿細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)漿細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)漿細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。1.單克隆抗體的概念單:單個(gè)細(xì)胞克隆:無(wú)性繁殖單克隆抗體:單個(gè)細(xì)胞克隆產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一特異性強(qiáng)的抗體提示1：對(duì)B細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學(xué)的哪種細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的？提示3：如何使一種細(xì)胞既能產(chǎn)生特異性抗體， 又能大量繁殖？問(wèn)題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？2.單克隆抗體的制備的設(shè)計(jì)方案

分泌一種特異性抗體的B淋巴細(xì)胞能無(wú)限增殖的骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞1975年科學(xué)家米爾斯坦和柯勒的制備單克隆抗體實(shí)驗(yàn)3.單克隆抗體的制備過(guò)程

閱讀并分組討論，單抗制備過(guò)程分哪幾步？請(qǐng)用箭頭把下列各圖解的字母按正確順序連接起來(lái)。順序是？

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞單克隆抗體1.注射抗原的目的是什么？注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞單克隆抗體2.誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪些？注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞單克隆抗體3.若細(xì)胞兩兩融合后，有幾種融合情況？注射抗原B淋巴細(xì)胞融合選擇性培養(yǎng)基篩選單克隆抗體4.怎樣篩選出雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞有何優(yōu)點(diǎn)？骨髓瘤細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中使用的骨髓瘤細(xì)胞是HGPRT酶缺陷細(xì)胞,在含有次黃嘌呤、氨基蝶呤和胸腺嘧啶的培養(yǎng)基（HAT）中，因?yàn)椴荒苷：铣蒁NA而無(wú)法生長(zhǎng);B細(xì)胞雖含有HGPRT酶，但不能在體外培養(yǎng)存活（只存活5~7d，且功能下降)；雜交瘤細(xì)胞融合了B細(xì)胞和瘤細(xì)胞，其中瘤細(xì)胞核利用B細(xì)胞的HGPRT酶合成DNA而存活。參考上述材料，簡(jiǎn)述篩選過(guò)程與結(jié)果選擇培養(yǎng)基中

細(xì)胞不能存活，

細(xì)胞存活下來(lái)注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基篩選專一抗體檢測(cè)克隆化單克隆抗體有限稀釋法培養(yǎng)篩選5.為何要進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和專一抗體檢測(cè)，多次篩選？有限稀釋法計(jì)數(shù)103/ml102/ml10/ml1個(gè)細(xì)胞/孔克隆化培養(yǎng)抗體檢測(cè)注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞融合多種雜交細(xì)胞選擇性培養(yǎng)基篩選專一抗體檢測(cè)克隆化單克隆抗體有限稀釋法培養(yǎng)篩選6.大量增殖雜交瘤細(xì)胞獲得單抗的方法特異性強(qiáng)、靈敏度高、產(chǎn)量大4.單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)5.單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速治療疾病——癌癥運(yùn)載藥物

(“生物導(dǎo)彈”—單抗做導(dǎo)向，藥物為彈頭)課堂練習(xí)下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_(kāi)_______過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞