動物生理學實驗

動物生理學實驗第1頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗一

動物生理學實驗常用儀器

實驗基本操作技術

PCLAB-UE生物機能實驗系統(tǒng)簡介及使用第2頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月1動物生理學實驗的地位本共27學時，屬專業(yè)基礎課程。成績計算：報告及修改（紅筆）60%，筆試考試30%，考勤10%。2動物生理學實驗的目的掌握基本實驗方法；掌握主要儀器的操作方法；掌握生理實驗基本技能；分析實驗結(jié)果、寫出規(guī)范的實驗報告。第3頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3動物生理學實驗的要求實驗前：做好實驗準備工作。實驗中：學生領取器材，教師簡要講解實驗原理、關鍵步驟、實驗要求等。實驗后：歸還實驗用品，動物尸體按指定位置放置，輪流打掃清潔衛(wèi)生；轉(zhuǎn)錄、整理實驗結(jié)果，及時上交實驗報告。第4頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4常用生理儀器的使用

4.1刺激系統(tǒng)刺激器刺激電極：普通電極、保護電極、鋅銅弓4.2引導、換能系統(tǒng)血壓換能器：主要用于血壓和其他通過液體傳導信號的換能。張力換能器：主要用于肌肉收縮和其他位移信號的換能。第5頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4.3放大系統(tǒng)（信號調(diào)節(jié)）放大器：可將生物電信號放大1000倍以上。4.4顯示、記錄系統(tǒng)生理記錄儀：常用有二道、四道及八道生理記錄儀等，一個通道可記錄一個信號。計算機生物信號采集處理系統(tǒng)：PCLAB-UE計算機生物信號采集處理系統(tǒng)。第6頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5動物生理實驗基本操作技術5.1手術器械刀：姿勢有指壓式、執(zhí)筆式及反挑式等。剪：外科剪、眼科剪、毛剪、骨剪、普通剪。鑷：用于剝離、剪斷和縫合，眼科鑷、外科鑷。鉗：止血鉗、持針鉗。其他：探針、玻璃分針、蛙板、鋅銅弓、蛙心夾、動脈導管、氣管插管、蛙肌槽、刺激電極。5.2實驗動物選擇：選擇健康動物。第7頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5.3動物的麻醉麻醉前準備：P34。（1）藥物選擇：熟悉藥品特點，根據(jù)實驗內(nèi)容合理選用麻醉藥。33%乙醇生理溶液：5～7mL/kg，耳緣靜脈注射。（2）麻醉前核對藥名，檢查藥品有無變質(zhì)。（3）狗、貓等嘔吐中樞發(fā)達的動物在手術前應禁食12h，以減輕嘔吐反應。（4）需在全麻下進行手術的動物，可適當給予麻醉輔助藥，如皮下注射嗎啡鎮(zhèn)靜止痛，注射阿托品減少呼吸道分泌物產(chǎn)生等。第8頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月麻醉效果觀察呼吸：呼吸加快且不規(guī)則，麻醉過淺；呼吸規(guī)則且平穩(wěn)，已達麻醉深度；呼吸變慢，且以腹式呼吸為主，麻醉過深，動物有生命危險。反射：角膜反射靈敏，麻醉過淺；角膜反射遲鈍，麻醉程度適宜；角膜反射消失，伴瞳孔散大，則麻醉過深。肌張力：肌張力亢進，麻醉過淺；全身肌肉松弛，麻醉合適。皮膚夾捏反應：用止血鉗夾捏動物皮膚，觀察皮膚的反應。第9頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月麻醉注意事項（1）正確選用藥品、用藥劑量及給藥途徑。（2）靜脈麻醉時，先將總量的1/3快速注入，使動物迅速渡過興奮期，余下2/3緩慢注射，并觀察動物狀態(tài)及反應，以準確判斷麻醉深度。（3）需補充麻醉藥時，一次補量不超過總量的1/5。（4）麻醉中應隨時保持呼吸道通暢，注意保溫。（5）在手術操作復雜、創(chuàng)傷大、實驗時間較長或麻醉深度不理想等情況下，可配合局部浸潤麻醉或基礎麻醉。（6）實驗中注意體液平衡，防止酸中毒及肺水腫的發(fā)生。第10頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6器械打結(jié)7.1活結(jié)：用于家兔保定。7.2死結(jié)：用于血管、神經(jīng)結(jié)扎。要領：鉗壓線，線壓鉗。第11頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗二計算機生物信號采集處理系統(tǒng)

1系統(tǒng)組成與工作原理

PCLAB-UE由硬件和軟件兩部分構(gòu)成，硬件主要完成對各種生物電信號（如心電、肌電、腦電）與非電生物信號（如血壓、張力、呼吸）進行調(diào)理、放大，并對信號進行模/數(shù)（A/D）轉(zhuǎn)換，使之進入計算機。軟件主要對已經(jīng)數(shù)字化了的生物信號進行顯示、記錄、存儲、處理及打印輸出，同時對系統(tǒng)各部分進行控制，與操作者進行人機對話。第12頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2主界面

從上到下依次分為：標題欄、菜單欄、工具欄、狀態(tài)提示欄及采樣窗、控制面板和數(shù)據(jù)窗等其他多個相應的子窗口組成。第13頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3使用方法3.1設置：標準配置，恢復出廠時的配置。3.2新建：選擇實驗項目，填寫實驗信息，進入實驗窗口，開始實驗。3.3采樣：記錄實驗數(shù)據(jù)。3.4控制面板參數(shù)調(diào)節(jié)：通道功能調(diào)節(jié)；刺激參數(shù)調(diào)節(jié)。3.5存儲：文件保存位置：F：/，文件名：07動醫(yī)3-呼吸（左2）。3.6編輯：打開原文件→選擇→復制→打開“工具”下的“畫圖”→處理文件→復制圖片→存盤到F：/。第14頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月家兔Hb、RBC脆性測定及影響血凝的因素觀察1實驗相關信息及目的2材料2.1動物2.2主要藥品：2.3主要儀器：3實驗方法：簡述或按《動物生理學實驗》方法進行[1]。4結(jié)果4.1家兔Hb、RBC脆性測定：見表1。4.2家兔血凝時間的測定：見表2。

表1家兔Hb含量及RBC脆性測定表2不同因素對家兔血凝時間的影響5討論5.1家兔Hb測定結(jié)果與對照比較，其值偏高，原因：5.2家兔RBC脆性測定結(jié)果與對照比較，其值，原因：5.3家兔血凝時間測定結(jié)果表明，時間長短，原因：參考文獻[1]陳杰，家畜生理學[M]，第四版，北京：中國家業(yè)出版社，23-34.分組實驗組對照組Hb（g/1000mL）RBC脆性（NaCL%）最小抵抗最大抵抗8-150.6～

0.550.4～0.35血凝時間（S）實驗管號處理因素檸+Ca++肝素+Ca++對照棉花肝素冰水石蠟檸肺組織第15頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗三影響血液凝固的因素紅細胞脆性的測定血紅蛋白的測定第16頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月影響血液凝固的因素1實驗目的以凝血時間為指標，了解影響凝血的因素，加深對生理止血過程的理解。2實驗原理血液凝固是一個酶解激活過程，有多種凝血因子參與。根據(jù)凝血過程起動時凝血因子來源不同，可將凝血分為內(nèi)源性激活途徑和外源性激活途徑。第17頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3實驗對象：家兔4方法與步驟4.1家兔的麻醉、保定與手術

33%乙醇溶液，6mL/kg，耳緣靜脈注射。4.2頸動脈采血4.3試管準備4.4記錄凝血時間第18頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5實驗結(jié)果表1血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7肺組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴第19頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6注意事項6.1采血過程要盡量快，以減少計時誤差，對比實驗的采血時間要緊接著進行。6.2每支試管口徑大小及采血量要相對一致，不可相差太大。6.3判斷凝血的標準要一致，一般以傾斜試管達45°時試管內(nèi)血液不見流動為準。第20頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月紅細胞脆性的測定1實驗目的學習測定紅細胞滲透脆性的方法，理解細胞外液滲透張力對維持細胞正常形態(tài)與功能的重要性。2實驗原理正常紅細胞懸浮于等滲的血漿中，著置于高滲溶液內(nèi)，則紅細胞會因失水而皺縮；反之，置于低滲溶液內(nèi)，則水進入紅細胞，使紅細胞膨脹。如環(huán)境滲透壓繼續(xù)下降，紅細胞會因繼續(xù)膨脹而破裂，釋放血紅蛋白，稱之為溶血。紅細胞膜對低滲溶液有一定的抵抗力，這一特征稱為紅細胞的滲透脆性。第21頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3實驗對象：動物種類不限4方法與步驟4.1溶液配置表2不同濃度NaCl溶液配制管號123456789101%NaCl（mL）9.06.56.05.55.04.54.03.53.02.5蒸餾水(mL)1.03.54.04.55.05.56.06.57.07.5NaCl濃度（%）0.900.650.600.550.500.450.400.350.300.25第22頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4.2制備抗凝血：檸檬酸鈉作抗凝劑。4.3加抗凝血：每只試管加1滴。4.4觀察結(jié)果①未溶血試管：液體下層有大量紅細胞下沉，上層為無色透明，表明無紅細胞破裂。②不完全溶血試管：液體下層有紅細胞下沉，上層出現(xiàn)透明淡紅色，表明部分紅細胞已經(jīng)破裂，稱為不完全溶血。②完全溶血試管：液體完全變成透明紅色，管底無紅細胞下沉。第23頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5實驗結(jié)果表2家兔Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定（g/L）

RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗力最大抵抗力實驗組對照組1230.60～0.550.40～0.35第24頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月6注意事項6.1試管要干凈；6.2配液要準確；6.3加血量要一致；6.4輕輕混勻，減少溶血機會；6.5靜置時間不少于30min。第25頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月血紅蛋白的測定1實驗目的掌握比色法測定動物血紅蛋白含量的方法。2實驗原理

血紅蛋白的顏色與氧結(jié)合量有關，當用一定的氧化劑將其氧化時，可使其轉(zhuǎn)變?yōu)榉€(wěn)定、棕色的高鐵血紅蛋白，而且顏色與血紅蛋白的濃度成正比。因此，可與標準色板進行對比，求出血紅蛋白的濃度，即每升血液中含血紅蛋白的克數(shù)（g.L-1）。第26頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3實驗對象：動物種類不限4方法與步驟：使用沙里氏血紅蛋白計測定。

比色法是用HCl使血紅蛋白酸化形成粽色的高鐵血紅蛋白，然后和標準比色板進行比色。（1）血紅蛋白計由標準比色箱和測定管組成。測定管兩側(cè)有刻度，一側(cè)為血紅蛋白量的絕對值，以每100mL血液中所含血紅蛋白的克數(shù)表示；另一側(cè)為相對值，以％（即相當于正常平均值的百分數(shù)）來表示。第27頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）測定方法①血紅蛋白吸管清潔：自來水→蒸餾水→無水乙醇。②將0.1N鹽酸加入測定管中至刻度“2”處。③用血紅蛋白吸管吸取20μL血液，將血液吹入鹽酸中，并利用上層鹽酸將吸管反復洗滌多次（避免起泡）。④酸化10min后，逐滴加入蒸餾水，邊加邊混勻并與標準比色板比較，至二者顏色相同為止。⑤讀數(shù)即為每100mL血液中血紅蛋白的克數(shù)。第28頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月【注意事項】（1）血紅蛋白吸管和比色管要清潔；（2）吸取血液要準確，避免起泡；（3）滴加蒸餾水要準確；（4）酸化時間不能少于10min；（5）在自然光下比色。第29頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗報告的撰寫1實驗原理2材料與方法2.1主要器材2.2主要藥品2.3實驗動物2.4實驗方法2.4.1Hb測定：按動物生理學實驗85頁方法進行[1]。2.4.2RBC脆性測定：按動物生理學實驗90頁方法進行[1]。2.4.3影響血液凝固因素：按動物生理學實驗97頁方法進行[1]。第30頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3實驗結(jié)果3.1家兔Hb含量及RBC脆性測定：見表1。表1家兔Hb含量及RBC脆性測定分組Hb測定含量（g/L）RBC脆性測定（NaCl%）最小抵抗最大抵抗實驗組對照組1230.60～0.550.40～0.35第31頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月3.2不同因素對血液凝固時間的影響表2血液凝固及其影響因素試管號實驗處理凝血時間（秒）1空白2液體石蠟4滴3棉花少許4冰水環(huán)境5肝素4滴6草酸鉀4滴7腦組織浸液4滴5號管加CaCl24滴6號管加CaCl24滴第32頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月4分析與探討4.1本次實驗家兔Hb測定結(jié)果比對照高（或低、或基本一致），從操作過程方面說明原因：……。4.2本次實驗家兔RBC脆性測定結(jié)果，最小抵抗比對照組高（或低、或基本一致），最大抵抗……，從操作過程方面說明原因：……。4.3家兔凝血時間測定結(jié)果表明，××處理能加快（抑制或不凝）血液凝固，為什么？××管加CaCl2后凝固，為什么？（從凝血機制分析）5參考文獻[1]楊秀平.動物生理學實驗[M].北京：高等教育出版社，2004.85-99.[2]鄒永新，郭予強.我國鴨病毒性疾病的發(fā)生和流行概況[J].中國獸醫(yī)雜志，2002（6）：38-40.第33頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗四心肌收縮的特點【實驗目的】

學習蟾蜍心臟活動描記的方法，觀察心肌收縮的特點?！緦嶒炘怼?/p>

心肌的有效不應期特別長，幾乎占據(jù)了整個收縮期和舒張早期。在此期內(nèi)任何刺激均不能引起心肌收縮。因此心肌不會產(chǎn)生強直收縮，心臟總是有節(jié)律的舒縮。在心臟舒張早期之后，給心肌一次有效刺激，會引起心臟一次期前收縮，緊接著出現(xiàn)一次較長的間歇——代償間隙。第34頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月【實驗對象】蛙或蟾蜍【實驗藥品】任氏液【實驗方法與步驟】

1.實驗準備（1）在體蛙心制備：取蛙一只，破壞腦、脊髓，仰臥固定于蛙板上。左手持鑷子提起胸骨后端的皮膚剪一小口，然后向左、右兩側(cè)鎖骨外側(cè)剪開皮膚、肌肉，剪斷左右鎖骨，使創(chuàng)口呈一倒三角形，充分暴露心臟部位，并用眼科剪剪開心包膜，徹底暴露心臟。第35頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）觀察心臟的結(jié)構(gòu)識別蛙心臟。自心臟腹面可觀察到心室、心房、動脈球和主動脈。用玻璃分針向前翻轉(zhuǎn)蛙心，暴露心臟背面可觀察到靜脈竇和心房。（3）連接實驗裝置將蛙心夾上的細線與張力換能器相連，讓心臟搏動信號傳入計算機生物信號采集處理系統(tǒng)。將銅絲與心室接觸良好并固定穩(wěn)妥后，與刺激器的輸出連接。第36頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月2.實驗項目（1）描記正常曲線，觀察曲線的收縮相和舒張相。（2）用中等強度的單個閾上刺激在收縮期刺激心室，有何變化？為什么？（3）用中等強度的單個閾上刺激在舒張中后期刺激心室，有何變化？為什么？（4）心肌“全或無”反應：用絲線在靜脈竇與心房之間作一結(jié)扎，心臟停止跳動。然后給予閾下及不同強度的閾上刺激，觀察蛙心收縮強度的變化。第37頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月【結(jié)果及分析】1.心縮期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？2.心舒期單個閾上刺激，心臟有何變化，為什么？3.第一結(jié)扎后，心房、心室活動有何變化，為什么？4.閾下刺激心臟的收縮曲線幅度有何變化，為什么？5.不同強度閾上刺激，心臟收縮曲線幅度有何變化，為什么？第38頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月【注意事項】1.破壞蛙的大腦和脊髓要徹底。2.經(jīng)常給心臟滴加任氏液，以保持心臟適宜的環(huán)境。3.張力傳感器與蛙心夾之間的絲線應保持適宜的緊張度。4.銅絲與心室接觸良好的同時，還應盡量不讓其阻礙心臟的自發(fā)收縮。第39頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗四蟾蜍心肌收縮的特點1實驗相關信息及目的2實驗原理3材料3.1動物3.2主要藥品：任氏液3.3主要儀器：計算機生物信號采集系統(tǒng)、張力換能器4方法：簡述或按生理實驗指導書a～b頁介紹方法進行[]

5結(jié)果：見圖。正常心肌舒縮曲線心縮期單刺激心舒期單刺激代償間歇期前收縮第一結(jié)扎竇房溝閾刺激閾上刺激閾上刺激圖：不同時期刺激心肌其收縮活動的變化

6討論

6.1心縮期單個閾上刺激，心活動變化？其原因？

6.2心舒中后期單個閾上刺激，心活動變化？其原因？

6.3竇房溝結(jié)扎后，心活動變化？其原因？

6.4結(jié)扎后單個不同強度閾上刺激，心肌收縮強度的變化趨勢？其原因？參考文獻第40頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗五心血管活動的神經(jīng)體液調(diào)節(jié)1原理：心血管功能活動的穩(wěn)定受神經(jīng)及體液調(diào)節(jié)。2材料：家兔、采集系統(tǒng)、壓力換能器、Ａd、Ach、“846”等。3方法：參照《動物生理學實驗》和實驗錄像進行。４結(jié)果：見圖。第41頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5注意事項5.1麻醉應適量，注射要慢，注意呼吸變化，以免過量引起動物死亡；5.2分離血管、神經(jīng)原則：先認準再分離；先神經(jīng)再血管；先細后粗；5.3動脈套管的固定要可靠，防止漏液和血管堵塞；5.4要待前一項目恢復正常后才能進行下一項目；5.5實驗結(jié)束后，先結(jié)扎頸總動脈近心端，再拔除動脈套管。第42頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗六呼吸運動的調(diào)節(jié)1原理：呼吸運動受內(nèi)、外環(huán)境刺激的影響。2材料：家兔、采集系統(tǒng)、壓力換能器、Ａd、Ach、2%乳酸、

CO2、33%乙醇溶液。3方法：參照《動物生理學實驗》方法進行。4項目：吸入CO2、增大無效腔、夾閉氣管、靜注乳酸、切斷迷走神經(jīng)。第43頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5注意事項5.1氣管插管內(nèi)壁要干凈；5.2氣流適宜，以免直接影響呼吸運動，干擾實驗結(jié)果；5.3注射乳酸時要避免外漏以引起動物躁動；5.4每項實驗前均應有正常呼吸曲線作比較；5.5吸入CO2時，出現(xiàn)現(xiàn)象應立即移開CO2，防止動物死亡。第44頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗五魚類呼吸運動的影響因素1目的：觀察魚類呼吸運動的影響因素。2原理：魚類在數(shù)次呼吸運動后，會出現(xiàn)一次洗滌運動，以清除進入口腔和鰓的異物，保證氣體交換的順利進行。3材料：鯉魚（或鯽魚）、1g/L硫酸酮液。4項目：4.1正常呼吸曲線的描記；4.2向水中（5L）通入CO2氣體，記錄呼吸運動的變化；4.3分別向水中加入1g/L的硫酸酮液5mL和50mL，使其濃度分別為1mg/L和10mg/L，記錄呼吸運動的變化；4.4加入溫水，使水溫緩慢升到35℃，記錄呼吸運動的變化。第45頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗七離體小腸平滑肌的生理特性1原理：平滑肌具有特定的生理特性，對化學、溫度和牽拉刺激非常敏感。2材料：家兔、采集系統(tǒng)、張力換能器、Ach、Ａd。3方法：參照《動物生理學實驗》和實驗錄像進行。4項目：Ach、Ａd、降溫、升溫。第46頁，課件共54頁，創(chuàng)作于2023年2月5注意事項5.1實驗動物要禁食24h；5.2實驗前標本要放在38℃臺氏液中浸泡數(shù)分鐘，使標本興奮性穩(wěn)定再進行實驗；5.3實驗中注意控制溫度；5.4實驗中隨時更換新鮮臺氏液；5.5實驗中添加