藥物的含量測定方法

第6章藥物的含量測定方法學(xué)習(xí)目標(biāo)掌握滴定分析法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法的應(yīng)用與計算；理解滴定分析法、紫外-可見分光光度法、高效液相色譜法的、氣相色譜法的原理；熟悉紫外-可見分光光度計、高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)；了解氣相色譜的原理與應(yīng)用。藥物的含量測定方法包括化學(xué)分析法和儀器分析法?；瘜W(xué)分析法又包括重量分析法和容量（滴定）分析法；儀器分析法包括紫外■可見分光光度法、紅外分光光度法、高效液相色譜法、氣相色譜法、電泳法等。第1節(jié)容量分析法容量分析法又稱滴定分析法，是化學(xué)分析中的重要方法之一，在藥物分析中具有重要的實(shí)用價值，占據(jù)重要的地位。圖6-1滴定操作的基本儀器、裝置一、 概述滴定分析法，是指使用滴定管將已知準(zhǔn)確濃度的試劑溶液，滴加到被測物質(zhì)的溶液中，直到所加的試劑與被測組分恰好定量反應(yīng)完全為止，根據(jù)滴定液的濃度和所消耗的體積，計算出待測組分的含量。滴定中滴加的標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測組分恰好反應(yīng)完全這一點(diǎn)，稱為“化學(xué)計量點(diǎn)”，而指示劑發(fā)生顏色變化的轉(zhuǎn)變點(diǎn)，稱為“滴定終點(diǎn)”，實(shí)際操作中滴定終點(diǎn)（實(shí)際終點(diǎn)）與化學(xué)計量點(diǎn)（理論終點(diǎn)）不可能恰好重合，它們之間往往存在很小的誤差，該誤差稱為“滴定誤差”，滴定誤差的大小，取決于滴定反應(yīng)和指示劑的性能及用量，所以選擇適當(dāng)?shù)闹甘緞┦堑味ǚ治龅闹匾h(huán)節(jié)。二、滴定液的配制和標(biāo)定有關(guān)概念：（1） 基準(zhǔn)物質(zhì)：指能用于直接配制或標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)?；鶞?zhǔn)物質(zhì)應(yīng)滿足條件如下：試劑的組成應(yīng)與它的化學(xué)式完全相符；試劑純度應(yīng)足夠高，一般大于99.9%以上，雜質(zhì)含量不影響分析的準(zhǔn)確度；試劑性質(zhì)穩(wěn)定；試劑按反應(yīng)式定量進(jìn)行，應(yīng)無副反應(yīng)。（2） 滴定度（T）：即每毫升滴定液相當(dāng)于被測物質(zhì)的質(zhì)量（克或毫克）。滴定液（標(biāo)準(zhǔn)溶液）的配制和標(biāo)定：（1） 直接法：準(zhǔn)確稱取一定量基準(zhǔn)物質(zhì)，溶解后配成一定體積的溶液，根據(jù)物質(zhì)的質(zhì)量和體積即可計算出該滴定液的準(zhǔn)確濃度。如精制EDTA、KCrO、優(yōu)級純AgNO的配制。2 27 3（2） 間接法：很多物質(zhì)不能直接用來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液，但可將其先配制成一種近似于所需濃度的溶液，然后用基準(zhǔn)物質(zhì)來標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度。如HCl、NaOH、KMnO、NaSO滴定液等。4 223（3） 滴定液的標(biāo)定：是指根據(jù)規(guī)定的方法，用基準(zhǔn)物質(zhì)或標(biāo)準(zhǔn)溶液準(zhǔn)確測定滴定液濃度的過程。（4） 校正因子（F）：表示滴定液準(zhǔn)確濃度與標(biāo)示濃度的比值。其范圍應(yīng)在1.05?0.95之間，超出該范圍應(yīng)加入適當(dāng)?shù)娜苜|(zhì)或溶劑予以調(diào)整，并重新標(biāo)定。案例:0.1mol/L案例:0.1mol/L鹽酸滴定液的配制與標(biāo)定1.配制方法：取鹽酸9.0ml,加水稀釋至1000ml，即得。標(biāo)定方法：基準(zhǔn)物為無水碳酸鈉，指示劑為甲基紅-溴甲酚綠混合指示液，每1ml的鹽酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于5.30mg的無水碳酸鈉。如經(jīng)標(biāo)定后其真實(shí)濃度為0.1012mol/L，則該滴定液的F值為:F二真實(shí)濃度=業(yè)12=1.012標(biāo)示濃度 0.1

標(biāo)定的注意事項：操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均應(yīng)校正合格；標(biāo)定工作應(yīng)在室溫(10°C?30°C)下進(jìn)行，并記錄標(biāo)定時的溫度；根據(jù)滴定液的消耗量選用適宜的滴定管，盛裝滴定液前，先用少量滴定液淋洗三次，盛裝滴定液后，應(yīng)用小燒杯蓋住管口；標(biāo)定中的空白試驗(yàn)，是指在不加供試品或以等量溶劑代替供試液的情況下，按同法滴定所得的結(jié)果；標(biāo)定工作應(yīng)由初標(biāo)者和復(fù)標(biāo)者在相同條件下各做3份平行試驗(yàn)，3份平行試驗(yàn)結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)不得大于0.1%；初標(biāo)者的平均值和復(fù)標(biāo)者的平均值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)也不得大于0.1%；最后結(jié)果按初、復(fù)標(biāo)二者的平均值計算，取4位有效數(shù)字；配制后的滴定液按藥典規(guī)定的貯藏條件儲存，并在瓶外貼上標(biāo)簽，注明滴定液名稱、標(biāo)示濃度、真實(shí)濃度或F值、配制和標(biāo)定日期、標(biāo)定時的溫度、配制者、標(biāo)定者、復(fù)標(biāo)者等;當(dāng)?shù)味ㄒ簶?biāo)定時間過長(一般不超過3個月)、或標(biāo)定與使用時的溫度超過10C時，應(yīng)加溫度補(bǔ)償值或重新進(jìn)行標(biāo)定；當(dāng)?shù)味ㄒ撼霈F(xiàn)渾濁或其他異常情況時，不得使用；倒出剩余的滴定液不得再倒回原瓶，避免污染。三、滴定的分類根據(jù)滴定反應(yīng)的方式可分為直接滴定法、間接滴定法；根據(jù)反應(yīng)的類型則分為酸堿滴定、氧化還原滴定、沉淀滴定、配位滴定、非水滴定等。(一)按反應(yīng)方式分類:直接滴定法用滴定液直接滴定被測物質(zhì)溶液的方式，是最基本、最常用的滴定方式。如以鹽酸滴定液滴定氫氧化鈉溶液等。阿司匹林原料藥的含量測定就是采用酸堿直接滴定法。其含量計算公式:含量%二V含量%二VxFxTWx1000x100%做空白試驗(yàn)時，應(yīng)扣除空白消耗的體積，即含量%二『2dW含量%二『2dWX1000x100%式中：V為供試品消耗滴定液的體積（ml）；匕為空白試驗(yàn)消耗滴定液的體積（ml）；F為滴定液濃度校正因子；T為滴定度（mg/ml）； W為供試品的重量（g）。間接滴定法包括剩余滴定法和置換滴定法。適用于反應(yīng)物為固體，或直接滴定反應(yīng)速度較慢、滴定缺乏合適指示劑等類型的反應(yīng)。剩余滴定法（也稱返滴定）是先使被測物質(zhì)A與一定過量的標(biāo)準(zhǔn)溶液B1作用，反應(yīng)完全后，再用另一種滴定液B，滴定剩余的標(biāo)準(zhǔn)溶液B1，由實(shí)際消耗的滴定液B1的量，計算被測物質(zhì)A的含量。例如：阿司匹林片的含量測定。剩余滴定法的含量計算公式：含量%二（匕含量%二（匕一V）XFXT

Wx1000x100%式中：V為供試品消耗滴定液的體積（ml）；匕為空白試驗(yàn)消耗滴定液的體積（ml）；F為滴定液濃度校正因子；T為滴定度（mg/ml）；W為供試品的重量（g）。置換滴定法是對于不按確定的反應(yīng)式進(jìn)行（伴隨有副反應(yīng)）的反應(yīng)，可以不直接滴定被測物質(zhì)，而是先用適當(dāng)試劑與被測物質(zhì)反應(yīng)，使其置換出另一生成物，再用滴定液滴定此生成物，這種方法稱為置換滴定法。（二）按反應(yīng)的類型分類：酸堿滴定法（中和法）是在水溶液中以酸堿中和反應(yīng)來測定物質(zhì)含量的方法，可用來測定酸、堿、弱酸鹽、弱堿鹽等。配位（絡(luò)合）滴定法是以形成穩(wěn)定配合物的配位反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法。主要用于金屬離子的測定，目前應(yīng)用最廣泛的配位滴定劑是EDTA（乙二胺四醋酸二鈉），因此通常所謂的配位滴定法，主要是指使用EDTA滴定液的滴定法，一般選用金屬指示劑指示滴定終點(diǎn)。如葡萄糖酸鈣、硫酸鋅的含量測定均采用此法，用銘黑T作指示劑。氧化還原滴定法是以氧化還原反應(yīng)為基礎(chǔ)的一類滴定法。該法在藥物分析中應(yīng)用非常廣泛，即可直接測定具有氧化性或還原性的物質(zhì)，又可間接測定不具有氧化性或還原性的物質(zhì)。在藥品檢驗(yàn)中應(yīng)用最多的有碘量法、鈰量法和亞硝酸鈉滴定法、漠量法。（1）碘量法：是以碘為氧化劑，或以碘化物為還原劑進(jìn)行滴定的方法。按照滴定的方式分為直接碘量法、剩余碘量法和置換碘量法。直接碘量法：是用碘滴定液直接滴定還原性物質(zhì)的方法。在滴定過程中I2被還原為I-,該法只能在酸性、中性或弱堿性溶液中進(jìn)行，一般用淀粉指示劑指示終點(diǎn)，淀粉遇碘變藍(lán)色，反應(yīng)極其靈敏。也可用碘自身的顏色指示終點(diǎn)，化學(xué)計量點(diǎn)后，溶液中稍過量的碘即顯黃色而指示終點(diǎn)。如維生素C的含量測定。剩余碘量法：是在供試品（還原性物質(zhì)）溶液中，先加入定量過量的碘滴定液，待I2與待測組分反應(yīng)完全后，再用硫代硫酸鈉滴定液滴定剩余的碘，來求出待測組分含量的方法。滴定時用淀粉作指示劑，在近終點(diǎn)時加入，因?yàn)楫?dāng)溶液中有大量碘存在時，碘易吸附在淀粉表面，影響終點(diǎn)的判斷。如復(fù)方對乙酰氨基酚片中咖啡因的含量測定。置換碘量法：如硫代硫酸鈉滴定液的標(biāo)定即采用該法，以重銘酸鉀為基準(zhǔn)物，加入碘化鉀置換出定量的碘，碘再用硫代硫酸鈉滴定液滴定。案例： 復(fù)方對乙酰氨基酚片中咖啡因的含量測定精密稱取本品的細(xì)粉適量（約相當(dāng)于咖啡因50mg），加稀硫酸5ml，振搖數(shù)分鐘使咖啡因溶解，濾過，濾液置50ml量瓶中，濾器與濾渣用水洗滌3次，每次5ml，洗液并入量瓶中，精密加入碘液（0.05mol/L）25ml,用水稀釋至刻度，搖勻，在約25°C避光放置15分鐘，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25ml，用硫代硫酸鈉滴定液（0.05mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液2ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，即得。每1ml的碘滴定液（0.05mol/L）相當(dāng)于5.305mg的咖啡因（CHNO?HO）。81042 2含量測定結(jié)果的計算公式為：-…一50—標(biāo)示百分含量%=%"WX*聲xWX100%0.1XWX標(biāo)示量式中：V。為空白試驗(yàn)時消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積（ml）;V°為樣品測定時消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積（ml）;C為硫代硫酸鈉滴定液的濃度（mol/L）;W為樣品的稱量（g）;而為平均片重（克/片）。案例： 硫代硫酸鈉滴定液的標(biāo)定取在120C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0.15g，精密稱定，置碘瓶中，加水50ml使溶解，加碘化鉀2.0g，輕輕振搖使溶解，加稀硫酸40ml，搖勻，密塞；在暗處放置10分鐘后，加水250ml稀釋，用本液滴定至近終點(diǎn)時，加淀粉指示液3ml,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正：每 1ml硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于4.903mg的重鉻酸鉀。根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液的消耗量與重鉻酸鉀的取用量，即可算出本液的濃度，其計算公式為：（2）鈰量法：也稱硫酸鈰法，是以硫酸鈰［Ce（S0「2］作為滴定液，在酸性條件下測定還原性物質(zhì)的滴定方法。采用鄰二氮菲作指示劑，化學(xué)計量點(diǎn)后，F(xiàn)e2+被氧化成Fe3+，生成鄰二氮菲鐵，由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)榈{(lán)色而指示終點(diǎn)。鈰量法由于不受制劑中淀粉、糖類的干擾，因此特別適合片劑、糖漿劑等制劑的測定。《中國藥典》2005年版采用鈰量法測定的藥物有：硫酸亞鐵片及硫酸亞鐵緩釋片、葡萄糖酸亞鐵及其制劑、富馬酸亞鐵及其制劑等。案例： 硫酸亞鐵片的含量測定取本品10片，置200ml量瓶中，加稀硫酸60ml與新沸過的冷水適量，振搖使硫酸亞鐵溶解，用新沸過的冷水稀釋至刻度，搖勻，用干燥濾紙迅速濾過，精密量取續(xù)濾液30ml，加鄰二氮菲指示液數(shù)滴，立即用硫酸鈰滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml的硫酸鈰湔定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.80mg的FeS0?7H0。（使用新沸過的冷水溶解樣品是為了避免水中的02氧化Fe2+而干擾測定。） 4 2含量測定結(jié)果的計算公式為：八人八/Vx27.80xFx200x10-3標(biāo)示百分含量％= — x100%30x10x標(biāo)示量其中：V為消耗硫酸鈰滴定液的體積（ml）;CF為濃度換算因數(shù)，F(xiàn)二—,其中C為硫酸鈰滴定液的實(shí)際濃度（mol/L）。0.1（3）亞硝酸鈉滴定法：是利用亞硝酸鈉滴定液在鹽酸溶液中與具有芳伯氨基的化合物發(fā)生重氮化反應(yīng)，定量生成重氮鹽，根據(jù)消耗亞硝酸鈉的量來計算藥物含量的方法。如鹽酸普魯卡因的含量測定。滴定條件:過量鹽酸：加快反應(yīng)速度，重氮鹽在酸性條件下穩(wěn)定，防止偶氮化合物形成；室溫(10°C?30°C)條件：溫度過高使亞硝酸逸失，過低反應(yīng)速度太慢；滴定時一般需加入KBr作為催化劑，加快重氮化反應(yīng)速度；滴定方式：開始時滴定管尖端插入液面下，在攪拌下迅速加入，避免亞硝酸損失；近終點(diǎn)時滴定管提出液面，淋洗、緩慢滴定；終點(diǎn)指示法：永停滴定法或外指示劑法；漠量法：以漠的氧化作用和漠代作用為基礎(chǔ)，配制漠酸鉀和漠化鉀混和溶液進(jìn)行分析測定。在酸性溶液中生成的漠與被測物反應(yīng)完成后，加入叮與剩余Br2作用，用硫代硫酸鈉滴定生成的碘。主要用來測定能和Br2發(fā)生漠代反應(yīng)或能被漠氧化的藥物含量。如司可巴比妥鈉的含量測定、鹽酸去甲腎上腺素的含量測定等。常用的滴定液有Na2S2O3滴定液和Br2滴定液。沉淀滴定法是以沉淀反應(yīng)為基礎(chǔ)的滴定分析法。多以硝酸銀為滴定液，測定能與Ag+反應(yīng)生成難溶性銀鹽沉淀的分析法，稱為銀量法。可以測定Cl-、Br-、I-、CN-、SCN-等離子。銀量法按所用指示劑的不同分為銘酸鉀指示劑法、鐵銨磯指示劑法和吸附指示劑法。銘酸鉀指示劑法：是在中性溶液中，用硝酸銀滴定液滴定氯化物或漠化物，以K2CrO4作指示劑，Ag+和CrO：-形成磚紅色沉淀指示終點(diǎn)。多用于Cl-、Br-的測定。鐵銨磯指示劑法：用NHSCN為滴定劑，以硫酸鐵銨為指示劑，在硝酸酸性(防止4出現(xiàn)Fe(OH)3紅棕色沉淀)溶液中測定Ag+的滴定方法，F(xiàn)e3+和SCN-形成紅色配合物指示終點(diǎn)。吸附指示劑法：用硝酸銀滴定液滴定，以吸附指示劑(熒光黃)確定終點(diǎn)的滴定方法，一般用以測定鹵化物，滴定時避免陽光直射，因鹵化銀遇光易分解，使沉淀變?yōu)榛液谏?。非水滴定法是在非水溶?有機(jī)溶劑與不含水的無機(jī)溶劑)中進(jìn)行滴定分析的方法。在非水溶劑中滴定，可使原來在水中不能進(jìn)行完全的反應(yīng)順利進(jìn)行，還能使在水中不能溶解的藥物溶解在非水溶液中，增大藥物的溶解度，擴(kuò)大滴定分析的應(yīng)用范圍。非水滴定法包括非水堿量法和非水酸量法。(見表6-1)非水堿量法和非水酸量法的比較(表6-1)**溶劑滴定液指示劑應(yīng)用非水堿量法冰醋酸高氯酸結(jié)晶紫弱堿性藥物及其鹽類非水酸量法二甲基甲酰胺等甲醇鈉麝香草酚藍(lán)弱酸性藥物(1)非水堿量法通常是以冰醋酸為溶劑，高氯酸為滴定液，測定弱堿性藥物及其鹽類的分析方法，在藥物含量測定中應(yīng)用非常廣泛。溶劑：堿的滴定宜選擇酸性溶劑，冰醋酸是滴定弱堿性物質(zhì)最常用的溶劑。市售的冰醋酸中含有水分，水分的存在可影響滴定突躍，故一般按計算量加入醋酐，以除去水分。滴定液：非水堿量法通常使用高氯酸的冰醋酸溶液作滴定液，因?yàn)楦呗人嵩诒姿嶂杏休^強(qiáng)的酸性，且絕大多數(shù)有機(jī)堿的高氯酸鹽易溶于有機(jī)溶劑，有利于滴定的進(jìn)行。市售高氯酸為含HCl0470.0%?72.0%的水溶液，故需加入計算量的醋酐除去水分。高氯酸滴定液受溫度影響較大，因此樣品的測定與標(biāo)定應(yīng)在同一溫度進(jìn)行，若溫度差超過2°C以上，應(yīng)重新標(biāo)定或帶溫度補(bǔ)償值加以校正。校正公式：C1-1+0.0011V-T)I0指示劑：非水堿量法可用指示劑或電位法指示終點(diǎn)，常用的指示劑為結(jié)晶紫。非水酸量法通常是在堿性溶液中，以甲醇鈉為滴定液，麝香草酚藍(lán)或偶氮紫為指示劑，二甲基甲酰胺、乙二胺等為溶劑，滴定弱酸性藥物的分析方法。主要用于滴定極弱的酸類如酚類、酰亞胺類藥物的含量測定，如乙虎胺。非水滴定法的注意事項所有儀器、樣品均不得有水分存在，水分影響終點(diǎn)的靈敏度；冰醋酸具有揮發(fā)性，因此標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)密閉，防止揮發(fā)及水分進(jìn)入，盛裝標(biāo)準(zhǔn)溶液的滴定管應(yīng)以一干燥小燒杯蓋上；標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)貯藏于棕色瓶中，或用黑布包裹，避光密閉保存，顏色變黃說明高氯酸部分分解，不得使用；結(jié)晶紫指示劑不能放置過久；以無水冰醋酸配制的高氯酸滴定液，含水量不得超過0.2%，不能加入過多的醋酐，以免在滴定過程中發(fā)生乙?；磻?yīng)，使測定結(jié)果偏低。高氯酸(70%?72%)不得與醋酐直接混合，以免發(fā)生劇烈反應(yīng)，使溶液顯黃色，應(yīng)先用無水冰醋酸將高氯酸稀釋后，再緩緩滴加醋酐，滴速不易過快；高氯酸滴定液標(biāo)定時，其消耗量一般約為8ml左右，應(yīng)使用10ml的滴定管。第二節(jié)分光光度法分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。光是電磁波，不同波長的光具有不同的能量。常用的波長范圍為：（1）200?400nm的紫外光區(qū)；（2）400?760nm的可見光區(qū)；（3）760?2500nm（12800cm-i?4000cm-i）的近紅外光區(qū)（4） 2.5?25um（按波數(shù)計為4000cm-i?400cm-i）的紅外光區(qū)。所用儀器為紫外分光光度計、可見分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度，所有儀器應(yīng)按國家計量檢定規(guī)程定期進(jìn)行檢定。在可見光區(qū)，除某些物質(zhì)對光有吸收外，很多物質(zhì)本身沒有吸收，但可在一定條件下加入顯色劑或經(jīng)過處理使其顯色后再測定，故又稱比色分析。本節(jié)主要介紹紫外-可見分光光度法。一、紫外-可見分光光度法物質(zhì)吸收紫外和可見光區(qū)的電磁波產(chǎn)生的吸收光譜稱為紫外-可見吸收光譜，利用紫外-可見吸收光譜進(jìn)行定性和定量分析的方法稱為紫外-可見分光光度法。該法可用于藥物的鑒別、檢查和含量測定，是藥品檢驗(yàn)中應(yīng)用非常廣泛的一類儀器分析方法?；驹懋?dāng)一束平行的單色光通過一均勻的有色溶液時，一部分被溶液吸收，一部分則透過溶液，溶液的濃度高對光的吸收大，則透過小。光線透過溶液的強(qiáng)度用透光率（T）表示，代表透過光的強(qiáng)度占入射光強(qiáng)度的百分比；透光率的倒數(shù)，反映了物質(zhì)對光的吸收強(qiáng)度，用其對數(shù)值作為吸光度（A）。當(dāng)單色光強(qiáng)度、溶液的溫度不變時，溶液對光的吸光度與溶液的濃度及液層的厚度的乘積成正比。這就是分光光度法定量的基礎(chǔ)，即朗伯一比耳定律。其關(guān)系式如下：A=Ig1=ECLT式中A為吸收度； T為透光率； L為液層厚度，單位為cm；E為吸收系數(shù)，常用的是百分吸收系數(shù)（E1%），其物理意義為當(dāng)溶液濃度為1%1cm（g/ml），液層厚度為1cm時的吸收度值；C為100ml溶液中所含被測物質(zhì)的量g（按干燥品或無水物計算）。物質(zhì)對光的選擇性吸收波長，以及相應(yīng)的吸收系數(shù)是該物質(zhì)的物理常數(shù)。當(dāng)已知某純物質(zhì)在一定條件下的吸收系數(shù)后，可在同樣條件將該供試品配成溶液，測定其吸收度，即可由上式計算出供試品中被測物質(zhì)的含量儀器的基本結(jié)構(gòu)可見-紫外分光光度計的應(yīng)用波長范圍一般為200?400nm的紫外光區(qū)、400?850nm的可見光區(qū)。主要由輻射源(光源)、色散系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理器、自動記錄器及顯示器等部件組成。光源—單色器|―?吸收池|一檢測器|—數(shù)據(jù)記錄處理圖6-2紫外-可見分光光度計結(jié)構(gòu)示意圖光源：光源的作用是提供一定強(qiáng)度、穩(wěn)定且具有連續(xù)光譜的光，紫外光區(qū)通常采用氫燈或氘燈，可見光區(qū)采用鎢燈。單色器：單色器的作用是將來自光源的復(fù)合光色散成按一定波長順序排列的連續(xù)光譜，并從中分離出一定寬度的譜帶。由狹縫、準(zhǔn)直鏡、色散元件(棱鏡和光柵)、聚焦透鏡組成。吸收池：一般用石英吸收池，即可用于紫外光區(qū)，也可用于可見光區(qū)。檢測器：常用的有光電池、光電管等，可將接受的光信號轉(zhuǎn)變?yōu)槌杀壤碾娦盘枺俳?jīng)過處理和記錄就可得到紫外吸收光譜或吸收度值。數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)：訊號處理和顯示系統(tǒng)給出透光率T%或者吸收度A的數(shù)值。儀器的校正和檢定波長的準(zhǔn)確度由于溫度變化對機(jī)械部分的影響，儀器的波長會經(jīng)常略有變動，因此除應(yīng)定期對儀器進(jìn)行全面檢定外，還應(yīng)于每次測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強(qiáng)譜線或氘燈的特定譜線為參照進(jìn)行校正，以儀器顯示的波長數(shù)值與單色光的實(shí)際波長值之間誤差表示，應(yīng)在±1.0nm范圍內(nèi)。吸收度的準(zhǔn)確度可用重銘酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120°C干燥至恒重的基準(zhǔn)重格酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，在規(guī)定的波長處測定并計算其吸收系數(shù)，并與規(guī)定的吸收系數(shù)比較，應(yīng)符合表6-2中的規(guī)定。表6-2儀器檢定用重銘酸鉀硫酸溶液的吸收系數(shù)波長/nm 235(最小) 257(最大) 313(最小) 350(最大)吸收系數(shù)E1%的規(guī)定值124.5 144.0 48.62 106.61cm吸收系數(shù)E1%的 123.0?126.0 142.8?146.2 47.0?50.3105.5?108.51cm許可范圍雜散光的檢查雜散光是一些不在譜帶范圍內(nèi)且與所需波長相隔較遠(yuǎn)的光，一般來源于光學(xué)儀器表面的瑕疵。雜散光的檢查方法是配制一定濃度的碘化鈉和亞硝酸鈉溶液，在1cm的吸收池中，在雜散光影響比較顯著的波長處測定透光率，應(yīng)符合表6-3的規(guī)定。表6-3雜散光檢查用試劑、濃度、波長及要求試劑濃度（g/100ml）測定用波長(nm)透光率％碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.8吸光度的測定為保證吸光度測定的準(zhǔn)確，《中國藥典》2005版對吸光度的測定做了以下要求：溶劑：測定供試品所用溶劑應(yīng)能充分溶解樣品、與樣品不發(fā)生作用、揮發(fā)性小，檢查所用的溶劑在供試品測定波長處是否符合要求。即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質(zhì))測定其吸光度。溶劑和吸收池的吸光度，在220?240nm范圍內(nèi)不得超過0.40，在241?250nm范圍內(nèi)不得超過0.20，在251?300nm范圍內(nèi)不得超過0.10，在300nm以上時不得超過0.05.空白試驗(yàn)校正：吸光度的測定實(shí)際上是透光率的測定，透光率的大小不僅與供試品的吸收有關(guān)，還與溶劑、容器的吸收、光的散射和界面反射等有關(guān)。因此測定吸光度時應(yīng)采用空白校正的方法，以扣除其他因素的影響。測定波長的檢查：吸光度的測定一般是在最大吸收波長處，除另有規(guī)定外，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長±2nm以內(nèi)測試幾個點(diǎn)的吸光度，或由儀器在規(guī)定波長附近自動掃描測定，以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確，除另有規(guī)定外，吸收峰波長應(yīng)在該品種項下規(guī)定的波長±2nm以內(nèi)，并以吸光度最大的波長作為測定波長。供試品溶液的濃度：溶液濃度的選擇應(yīng)考慮使吸光度在0.3?0.7范圍內(nèi)，此范圍內(nèi)測定吸光度的誤差小。狹縫寬度的選擇：若儀器狹縫寬度過大，單色光的純度變差，可使測得的吸光度降低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減小狹縫寬度時供試品的吸光度不再增加為準(zhǔn)，由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量。應(yīng)用凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的化合物，測定其最大吸收波長或在規(guī)定波長處的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測定。（1） 鑒別和檢查：可以采用比較吸收光譜的特征參數(shù)、吸光度比值、吸收光譜的一致性進(jìn)行鑒別和檢查。（2） 含量測定:對照品比較法：按各品種項下的方法，分別配制供試品溶液和對照品溶液，在規(guī)定的波長處分別測定其吸收度后，按下式計算含量，即得。含量％=含量％=氣XC對X稀釋倍數(shù)X100%式中：氣為樣品溶液的吸光度;氣為對照品溶液的吸光度;C對C對為對照品溶液的濃度;V為供試品溶液的體積。M樣為供試品的稱樣量;對照品比較法可以在一定程度上克服測定條件對結(jié)果的影響，測定時，供試品溶液和對照品溶液的濃度及測定條件應(yīng)一致。吸收系數(shù)法按各品種項下的方法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。用本法測定時，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。TOC\o"1-5"\h\zA _A=E1%CLnC= ①1cm E1%L1cm ②含量%二"被測物質(zhì)= _— ②M M樣品 樣品將①代入②得C一……C一……一xVx稀釋倍數(shù)含量％=100 M樣品 xVx稀釋倍數(shù)E1%xLx100 1cmM樣品x100%式中：A式中：A為供試品溶液的吸光度;V為供試品溶液的體積;M出方供試品的稱重量。樣口口標(biāo)準(zhǔn)曲線法：將一系列濃度不同的標(biāo)準(zhǔn)溶液按照一定操作過程分別進(jìn)行測定，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在相同條件下處理待測物質(zhì)并測定其吸光度，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相應(yīng)的濃度，求出其含量。由于影響因素較多，每次實(shí)驗(yàn)都要重新制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。該法借助電腦的Excel電子表格計算。注意事項空白溶液與供試品溶液必須澄清，不得有渾濁。如有渾濁，應(yīng)預(yù)先過濾，并棄去初濾液。測定時，除另有規(guī)定外，應(yīng)以配制供試品溶液的同瓶溶劑為空白對照，采用1cm的石英吸收池。在測定時或改測其它檢品時，應(yīng)用待測溶液沖洗吸收池3?4次，用干凈綢布或擦鏡紙擦凈吸收池的透光面至不留斑痕(切忌把透光面磨損)，放入樣品室每次方向應(yīng)一致。取吸收池時，應(yīng)拿毛玻璃兩面，切忌用手拿捏透光面，以免粘上油污。使用完后及時用測定溶劑沖凈，再用純化水沖凈，用干凈綢布或擦鏡紙擦干，晾干后，放入吸收池盒中，防塵保存。若吸收池內(nèi)外壁沾污，用脫脂棉纏在細(xì)玻璃棒上蘸上乙醇，輕輕擦試，再用純化水沖凈。務(wù)必注意經(jīng)常保持硅膠的干燥，目的是保護(hù)光學(xué)元件和光電放大器系統(tǒng)不致受潮損壞而影響儀器的正常工作。儀器經(jīng)過搬動請及時檢查并糾正波長精度，并應(yīng)經(jīng)常校準(zhǔn)波長精度。第3節(jié)色譜分析法色譜法是將混合物中各組分分離后在線或離線分析的方法。具有靈敏度高、選擇性高、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，是分析混合物最有效的手段。廣泛應(yīng)用于藥品的鑒別、純度檢查和含量測定中。色譜法的分離過程是被分離組分在互不相溶的兩相間分配平衡的過程，由于混合物中各組分的分配系數(shù)不同，或被吸附劑吸附能力的不同，則被流動相攜帶移動的速度也不同，達(dá)到分離的目的。以液體為流動相的色譜法稱為液相色譜法；以氣體為流動相的色譜法稱氣相色譜法。本章主要探討高效液相色譜法和氣相色譜法。一、高效液相色譜法高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入的供試品，由流動相帶人柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)人檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。目前，應(yīng)用最為廣泛的是化學(xué)鍵合相色譜，即將固定相的官能團(tuán)鍵合在載體上，形成的固定相稱為化學(xué)鍵合相，不易流失是其特點(diǎn)，一般屬于分配色譜法。（一） 基本原理待分離物質(zhì)在兩相間進(jìn)行分配時，在固定相中溶解度較小的組分，在色譜柱中向前遷移速度較快；在固定相中溶解度較大的組分，在色譜柱中向前遷移速度較慢，從而達(dá)到分離的目的。根據(jù)固定相與流動相極性的不同，高效液相色譜法又可分為正相色譜法和反相色譜法。正相色譜法系指流動相的極性小于固定相的極性，一般用極性物質(zhì)作固定相，非極性溶劑（如苯、正己烷等）作流動相，主要用于分離極性化合物，極性小的組分先流出，極性大的組分后流出。反相色譜法系指流動相的極性大于固定相的極性，一般用非極性物質(zhì)作固定相，極性溶劑（如水、甲醇、己臘等）作流動相，主要用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出，極性小的組分后流出。（二） 固定相和流動相常用的固定相最常用的固定相為化學(xué)鍵合相，按其極性可分為極性鍵合相和非極性鍵合相，十八烷基硅烷鍵合硅膠（七或ODS）和辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的非極性鍵合相，適用于反相色譜法；氨基和氤基硅烷鍵合相為常用的極性鍵合相，一般用于正相色譜法。流動相液相色譜法的流動相一般按一定的比例混合而成，由于C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故對于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統(tǒng)，流動相中有機(jī)溶劑的比例通常應(yīng)不低于5%，否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。流動相應(yīng)滿足如下要求：（1） 應(yīng)具有足夠的純度，一般選用色譜純試劑。（2） 流動相與固定液應(yīng)互不相溶。（3） 流動相對試樣各組分應(yīng)有適當(dāng)?shù)娜芙舛?。?）粘度小。（5） 檢測器對流動相不產(chǎn)生響應(yīng)。（6） 流動相應(yīng)經(jīng)0.45um的微孔濾膜過濾，并需脫氣處理。（三）儀器的基本結(jié)構(gòu)高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，由流動相儲液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成。如圖6-3和6-4。儀器應(yīng)定期檢定并符合有關(guān)規(guī)定。1.色譜柱由柱管和填充劑組成，柱管多用不銹鋼制成，柱內(nèi)填充劑有硅膠和化學(xué)鍵合固定相。圖6-3Agilent1200液相色譜儀圖6-4高效液相色譜儀示意圖2.檢測器最常用的檢側(cè)器為紫外檢測器，其他常見的檢測器有二極管陣列檢測器（DAD）、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢側(cè)器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器等?！吨袊幍洹分懈髌贩N項下規(guī)定的條件除固定相種類、流動相組成、檢測器類型不得改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速、混合流動相各組成的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體的色譜系統(tǒng)并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。（四）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)是指用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，應(yīng)符合要求，如達(dá)不到要求，可對色譜分離條件作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等四個指標(biāo)。其中，分離度和重復(fù)性更具實(shí)用意義。色譜柱的理論板數(shù)（n）塔板理論是把色譜柱看作由多塊塔板疊加而成，在每塊塔板內(nèi)，樣品在固定相和流動相中達(dá)到分配平衡。當(dāng)混合組分流過色譜柱時，由于色譜柱的塔板相當(dāng)多，因此分配系數(shù)有微小的差別，經(jīng)多次分配平衡后，即可達(dá)到分離。塔板理論的假設(shè)實(shí)際上是把組分在兩相間的連續(xù)轉(zhuǎn)移過程，分解為間歇地在每個塔板中的分配平衡過程，也就是用分離過程的分解動作來說明色譜過程。色譜柱的塔板數(shù)越多，柱效越高。在規(guī)定的色譜條件下，注人供試品溶液或各品種項下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時間t日和半峰寬(Wh/2),按n=5.54(tR/Wh/2)2計算色譜柱的理論板數(shù)。分離度(R)無論是定性鑒別還是定量分析，均要求待測峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特定的雜質(zhì)對照蜂之間有較好的分離度。分離度的計算公式為：R-2(tR2-tR1)w1+w2式中tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時間.tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時間，W及W為此相鄰兩峰的峰寬(如圖6-5)。12一新-■松.圖6-5分離度除另有規(guī)定外，定量分析時分離度應(yīng)大于1.5。重復(fù)性取各品種項下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測定項下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別至少進(jìn)樣2次，計算平均校正因子。其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。拖尾因子(T)為保證分離效果和測量精度，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子是否符合各品種項下的規(guī)定。在雜質(zhì)檢查和含量測定中的應(yīng)用內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量精密稱(量)取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算校正因子：校正因子(均-A空Ar/Cr式中As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高； Ar^對照品的峰面積或峰高；cs為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度； Cr為對照品的濃度。再取各品種項下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品中待測成分（或其雜質(zhì)）和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計算含量：含量（cj=f?^A^XA's/c's式中Ax為供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高； Cx為供試品（或其雜質(zhì)）的濃度;As為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高； c，s為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；f為校正因子。當(dāng)配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，使用等量同一濃度的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時，cs=c’s，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（最）取。外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品溶液和供試品溶液中待測成分的峰面積（或峰高），按下式計算含量：含量&）*r-AxAr式中各符號意義同上。由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時，以定量環(huán)或自動進(jìn)樣器進(jìn)樣為好。加校正因子的主成分自身對照法測定雜質(zhì)含量時，可采用加校正因子的主成分自身對照法。在建立方法時，按各品種項下的規(guī)定，精密稱（量）取雜質(zhì)對照品和待測成分對照品各適量，配制測定雜質(zhì)校正因子的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按上述1法計算雜質(zhì)的校正因子。此校正因子可直接載人各品種項下，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測峰面積。這些需作校正計算的雜質(zhì)，通常以主成分為參照采用相對保留時間定位，其數(shù)值一并載人各品種項下。測定雜質(zhì)含量時，按各品種項下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品溶液稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷φ杖芤?，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測器靈敏度（以噪音水平可接受為限）或進(jìn)樣量（以柱子不過載為限），使對照溶液的主成分色譜峰的峰高約達(dá)滿全程的10%?25%或其峰面積能準(zhǔn)確積分〔通常含量低于0.5%的雜質(zhì)，峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）應(yīng)小于10%；含量在0.5%?2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于5%；含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于2%〕。然后，取供試品溶液和對照品溶液適量，分別進(jìn)樣，供試品溶液的記錄時間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分色譜峰保留時間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計算各雜質(zhì)含量。不加校正因子的主成分自身對照法當(dāng)沒有雜質(zhì)對照品時，也可采用不加校正因子的主成分自身對照法。問上述3法配制對照溶液并調(diào)節(jié)檢測靈敏度后，取供試品溶液和對照溶液適量，分別進(jìn)樣，前者的記錄時間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分色譜峰保留時間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較，計算雜質(zhì)含量。若供試品所含的部分雜質(zhì)未與溶劑蜂完全分離，則按規(guī)定先記錄供試品溶液的色譜圖I，再記錄等體積純?nèi)軇┑纳V圖II。色譜圖I上雜質(zhì)蜂的總面積（包括溶劑峰），減去色譜圖II上的溶劑峰面積，即為總雜質(zhì)峰的校正面積。然后依法計算。面積歸一化法由于峰面積歸一化法測定誤差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測量各雜質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計算各峰面積及其之和占總峰面積的百分率。二、氣相色譜法（一） 氣相色譜的分離原理氣相色譜法系采用氣體為流動相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入進(jìn)樣口的樣品經(jīng)加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測器，信號記錄儀、積分儀和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號。分配系數(shù)小的組分先流出，分配系數(shù)大的組分后流出。（二） 色譜儀的基本結(jié)構(gòu)所用的儀器為氣相色譜儀，由載氣源、進(jìn)樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。載氣（流動相）氣相色譜法的流動相為氣體，稱為載氣，如氦、氮和氫等，可由高壓鋼瓶或高純度氣體發(fā)生器提供，經(jīng)過適當(dāng)?shù)臏p壓裝置，以一定的流速經(jīng)過進(jìn)樣器和色譜柱，根據(jù)供試品的性質(zhì)和檢測器種類選擇載氣，除另有規(guī)定外，常用載氣為氮?dú)?。進(jìn)樣器進(jìn)樣方式一般可采用溶液直接進(jìn)樣或頂空進(jìn)樣。溶液直接進(jìn)樣采用微量注射器、微量進(jìn)樣閥或有分流裝置的氣化室進(jìn)樣。進(jìn)樣時，進(jìn)樣口溫度應(yīng)高于柱溫30?50°C。進(jìn)樣量一般不超過數(shù)微升；柱徑越細(xì)，進(jìn)樣量應(yīng)越少，采用毛細(xì)管柱時，一般應(yīng)分流以免過載。頂空進(jìn)樣適用于固體和液體供試品中揮發(fā)性組分的分離和測定。將固態(tài)或液態(tài)的供試品制成供試液后，置于密閉小瓶中，在恒溫控制的加熱室中加熱至供試品中揮發(fā)性組分在非氣態(tài)和氣態(tài)達(dá)到平衡后，由進(jìn)樣器自動吸取一定體積的頂空氣注入色譜柱中。固定相和載體色譜柱為填充柱或毛細(xì)管柱。填充柱的材質(zhì)為不銹鋼或玻璃，內(nèi)徑為2?4mm，柱長為2?4m，內(nèi)裝吸附劑、高分子多孔小球或涂漬固定液的載體，粒徑為0.25?0.18mm、0.18?0.15mm或0.15?0.125mm。常用載體為經(jīng)酸洗并硅烷化處理的硅藻土或高分子多孔小球，常用固定液有甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。毛細(xì)管柱的材質(zhì)為玻璃或石英，內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或交聯(lián)固定液，內(nèi)徑一般為0.25mm、0.32mm或0.53mm，柱長5?60m，固定液膜厚0.1?5.0^m，常用的固定液有甲基聚硅氧烷、不同比例組成的苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等。新填充柱和毛細(xì)管柱在使用前需老化以除去殘留溶劑及低分子量的聚合物，色譜柱如長期未用，使用前應(yīng)老化處理，使基線穩(wěn)定。檢測器適合氣相色譜法的檢測器有火焰離子化檢測器(FID)、熱導(dǎo)檢測器(TCD)、氮磷檢測器(NPD)、火焰光度檢測器(FPD)、電子捕獲檢測器(ECD)、質(zhì)譜檢測器(MS)等?；鹧骐x子化檢測器對碳?xì)浠衔镯憫?yīng)良好，適合檢測大多數(shù)的藥物；氮磷檢測器對含氮、磷元素的化合物靈敏度高；火焰光度檢測器對含磷、硫元素的化合物靈敏度高；電子捕獲檢測器適于含鹵素的化合物；質(zhì)譜檢測器還能給出供試品某個成分相應(yīng)的結(jié)構(gòu)信息，可用于結(jié)構(gòu)確證。除另有規(guī)定外，一般用火焰離子化檢測器，氫氣為燃?xì)?，空氣作為助燃?xì)?。在使用火焰離子化檢測器時，檢測器溫度一般應(yīng)高于柱溫，并不得低于150°C，以免水汽凝結(jié)，通常為250?350°C。色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 同高效液相色譜法。在雜質(zhì)檢查和含量測定中的應(yīng)用內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量外標(biāo)法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量面積歸一化法上述1?3法的具體內(nèi)容均同高效液相色譜法。標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法測定供試品中某個雜質(zhì)或主成分含量精密稱（量）取某個雜質(zhì)或待測成分對照品適量，配制成適當(dāng)濃度的對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法測定雜質(zhì)或主成分含量，再扣除加入的對照品溶液含量，即得供試液溶液中某個雜質(zhì)和主成分含量。也可按下述公式進(jìn)行計算，加入對照品溶液前后校正因子應(yīng)相同，即：Ais_cx+AcxAx cx則待測組分的濃度cx可通過如下公式進(jìn)行計算：Acxcx= （Ais/Ax）-1式中cx為供試品中組分X的濃度Ax為供試品中組分X的色譜峰面積Acx為所加入的己知濃度的待測組分對照品的濃度Ais為加入對照品后組分X的色譜峰面積。氣相色譜法定量分析，當(dāng)采用手工進(jìn)樣時，由于留針時間和室溫等對進(jìn)樣量的影響，使進(jìn)樣量不易精確控制，故最好采用內(nèi)標(biāo)法定量；而采用自動進(jìn)樣器時，由于進(jìn)樣重復(fù)性的提高，在保證進(jìn)樣誤差的前提下，也可采用外標(biāo)法定量。當(dāng)采用頂空進(jìn)樣技術(shù)時，由于供試品和對照品處于不完全相同的基質(zhì)中，故可采用標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響；當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法與其他定量方法結(jié)果不一致時，應(yīng)以標(biāo)準(zhǔn)加入法結(jié)果為準(zhǔn)。小結(jié):藥物的含量測定化學(xué)分析法滴定分析法滴定液的配制和標(biāo)定基準(zhǔn)物質(zhì)、滴定度、校正因子、標(biāo)定的概念滴定液標(biāo)定的注意事項按反應(yīng)方式分直接滴定法間接滴定法（剩余滴定法、置換滴定法）按反應(yīng)類型分酸堿滴定法、配位滴定法（EDTA法）氧化還原滴定法（碘量法、漠量法、亞硝酸內(nèi)法、鈰量法）沉淀滴定法（鉻酸鉀指示劑法、鐵銨磯指示劑法、吸附指示、劑法）非水滴定法（非水堿量法、非水酸量法）儀器分析法紫外-可見分光光度法原理朗伯一比耳定律儀器的基本結(jié)構(gòu)光源、單色器、吸收池、檢測器、數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)儀器的校正和檢定波長的校正、吸收度的校正、雜散光的檢查含量測定方法對照品比較法、吸收系數(shù)法、標(biāo)準(zhǔn)曲線法高原理（分配色譜）被分離組分在固定相和流動相間分配系數(shù)的不同而分離效液相色譜法儀器的基本結(jié)構(gòu)儲液瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器和記錄器固定相和流動相常用的固定相為化學(xué)鍵合相（如C1"8為反相色譜柱）流動相為按一定比例混合而成系統(tǒng)適用性試驗(yàn)理論塔板數(shù)、分離度、重復(fù)性、拖尾因子應(yīng)用（檢查與含量測定）內(nèi)標(biāo)法加校正因子、外標(biāo)法、主成分自身對照法、面積歸一化法氣相色譜法原理樣品經(jīng)加熱氣化后，被載氣帶入色譜柱，由于其分配系數(shù)的不同進(jìn)行分離儀器的基本結(jié)構(gòu)載氣源、進(jìn)樣器、色譜柱、柱溫箱、檢測器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)固定相和流動相一般為填充柱或毛細(xì)管柱流動相一般為氮?dú)饣驓錃庀到y(tǒng)適用性試驗(yàn)同高效液相色譜法應(yīng)用（檢查與含量測定）內(nèi)標(biāo)法加校正因子、外標(biāo)法、面積歸一化法、標(biāo)準(zhǔn)溶液加入法目標(biāo)檢測一、選擇題【A型題】（最佳選擇題）。說明：每題的備選答案中只有一個最佳答案。置換碘量法中所用的滴定液為（）碘滴定液 B.硫代硫酸鈉滴定液 C.亞硝酸鈉滴定液D.鹽酸滴定液 E.硝酸銀滴定液非水酸量法中所用的滴定液為（）高氯酸滴定液 B.硫代硫酸鈉滴定液 C.亞硝酸鈉滴定液D.鹽酸滴定液 E.甲醇鈉滴定液可用偶氮紫作指示劑的是（）沉淀滴定法 B.亞硝酸鈉滴定法 C.非水堿量法D.非水酸量法 E.碘量法可用亞硝酸鈉滴定法測定的藥物是（）Ar-NH2 B.Ar-NO2 C.Ar-COORD.Ar-NHR亞硝酸鈉滴定法測定藥物含量時，一般需加入漠化鉀，其目的是（）使終點(diǎn)變色明顯 B.抑制生成的重氮鹽分解避免亞硝酸逸失 D.作為催化劑，加快重氮化反應(yīng)速度E.防止偶氮化合物形成關(guān)于亞硝酸鈉滴定法的敘述，錯誤的是（）對有酚羥基的藥物，均可用此方法測定含量水解后呈芳伯氨基的藥物，可用此方法測定含量芳伯氨基在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量反應(yīng)，生成重氮鹽在強(qiáng)酸性介質(zhì)中，可加速反應(yīng)的進(jìn)行反應(yīng)終點(diǎn)多用永停法或外指示劑法以冰醋酸為溶劑的是（）A.酸堿滴定法 B.亞硝酸鈉滴定法 ^非水堿量法非水酸量法 E.配位滴定法法屬于紫外光區(qū)的波長范圍是（）A.200?400nm B.400?760nm C.760?2500nm2.5?25um E.0?200nmAECL中C的含義是（）A.100ml溶液中所含被測物質(zhì)的量mgB.100ml溶液中所含被測物質(zhì)的量glml溶液中所含被測物質(zhì)的量g D.lml溶液中所含被測物質(zhì)的量mg100ml溶液中所含被測物質(zhì)的量g（按干燥品或無水物計算）可用紫外分光光度法進(jìn)行鑒別或含量測定的化合物是（）A.具有芳香環(huán)或共軛體系 B.具有羥基 C.具有羧基具有酯鍵 E.以上均可以在紫外分光光度法中，供試品溶液的濃度應(yīng)使吸收度的范圍在（）A.0.1?0.3 B.0.3?0.5C.0.3?0.7D.0.5?0.9 E.0.1?0.9關(guān)于高效液相色譜法的敘述錯誤的是（）十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18）為最常用的非極性鍵合相，用于反相色譜辛基硅烷鍵合硅膠（C8）為最常用的極性鍵合相，用于正相色譜氨基和氤