脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備規(guī)范（征求意見稿）

Specificationforisolationandpreparationofadipose-derivedstemcellsI II 1 1 1 2 3 4 5 5 6 7 9 10 111脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離制備規(guī)范GB/T37864生物樣本庫質(zhì)量和能力通用GB50346生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)3.1術(shù)語和定義脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（ADSCs）adipose-derivedst在特定時間從受試者或捐獻(xiàn)者中采集的器官、組織等標(biāo)），干細(xì)胞質(zhì)量控制stemcellqual2一種DNA結(jié)合性染料，無膜通透性，不能透過活細(xì)胞3.2縮略語HAV：甲型肝炎病毒（HepatitisAViruHBV：乙型肝炎病毒（HepatitisBViruHCV：丙型肝炎病毒（HepatitisCViruHIV：人類免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiencyViruHTLV：人類嗜T細(xì)胞病毒(HumanThymicLeukemiaVirEBV：人類皰疹病毒（Epstein-barrViCMV：巨細(xì)胞病毒（cytomegalovPCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerasechainreac4基本要求4.1場地與設(shè)施4.1.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)選址應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求，空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合4.1.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室或廠房應(yīng)由具有潔凈實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計(jì)與4.1.3干細(xì)胞制備功能區(qū)應(yīng)按脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制備工藝進(jìn)行各區(qū)域設(shè)計(jì)，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理4.2設(shè)備和耗材4.2.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)優(yōu)先選用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量4.2.2脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)應(yīng)對設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應(yīng)商進(jìn)行資質(zhì)審核認(rèn)證，要求供4.2.3脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的制備機(jī)構(gòu)設(shè)備和儀器正式使用前應(yīng)做安裝確認(rèn)(IQ)、運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和性能確認(rèn)(PQ)，并定期進(jìn)行第三方校準(zhǔn)，不得使用有安全隱患的儀器4.3人員管理35.1.4應(yīng)通過倫理審查批準(zhǔn)并履行知情同意程序。5.2供者健康5.2.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞采集制備方應(yīng)對干細(xì)胞供者的基本信息與健康信息進(jìn)行詳細(xì)采集與記錄，同5.2.2干細(xì)胞供者應(yīng)無血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸a)一般傳染性疾病或其他遺傳疾?。篐IV、HBV、HCVb)傳染性皮膚病(未治愈的)；5.3采集場所5.4采集人員5.5采集流程5.5.1.1采集人員應(yīng)按照要求填寫個人信息，個人信息表應(yīng)包括但不限于：姓名、性別、有效身份證5.5.2.15.5.2.25.5.2.35.5.2.45.5.2.55.5.2.64——手術(shù)包：無破損、無滲漏、無污染，處于有效期內(nèi)；——消毒劑：?一般選用含碘消毒液，對碘過敏者可選用其他消毒劑；?應(yīng)處于有效期內(nèi)；?應(yīng)標(biāo)明啟用日期；——采集容器上均已粘貼供者識別碼。5.5.5.15.5.5.25.5.5.35.5.5.45.5.5.55.5.5.66.1一般要求6.2運(yùn)輸箱6.3質(zhì)量監(jiān)控——運(yùn)輸承接人、時間和日期；56.3.2運(yùn)輸前應(yīng)檢查冷藏運(yùn)輸箱及控存在2℃~8℃條件下，最長時間不超過12小時。7.6樣本量應(yīng)能夠滿足制備和檢測的最低要求。8.1.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及臨8.1.3分離與培養(yǎng)過程中應(yīng)標(biāo)識干細(xì)胞的名稱、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員8.2分離前準(zhǔn)備工作待用。核查確認(rèn)所用試劑及耗材的批號及是否在8.3分離與培養(yǎng)方法68.4細(xì)胞換液8.4.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞換液操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及8.4.3換液操作時吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下8.4.4培養(yǎng)基成分應(yīng)符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國家批準(zhǔn)的臨床級產(chǎn)8.5細(xì)胞傳代8.5.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞傳代操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及8.6細(xì)胞凍存8.6.1脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞凍存操作應(yīng)嚴(yán)格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細(xì)胞制劑質(zhì)量控制及8.6.2經(jīng)制備數(shù)量達(dá)到凍存要求的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞系可進(jìn)行凍存操作，凍存細(xì)胞應(yīng)加入適當(dāng)?shù)膬龃?.6.3凍存液成分應(yīng)符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國家已批準(zhǔn)的臨床級產(chǎn)8.6.4凍存細(xì)胞應(yīng)標(biāo)明干細(xì)胞名稱、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯8.7穩(wěn)定性考察8.7.1細(xì)胞庫應(yīng)依據(jù)儲存的干細(xì)胞產(chǎn)品的特性，制定年度的儲存細(xì)胞質(zhì)量穩(wěn)定性考察方案和計(jì)劃，并a)凍存容器完整性和密閉性；8.7.4常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計(jì)劃，如遇特殊情況（例如液相液氮罐故障）可臨時性增加8.7.5應(yīng)對年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進(jìn)行趨勢分析，便于監(jiān)測細(xì)胞儲存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進(jìn)細(xì)胞儲存7b)產(chǎn)品描述碼、采集類型和分類碼；k)使用試劑的數(shù)量；9.2記錄的審核：應(yīng)對記錄的準(zhǔn)確性和完整性以及標(biāo)準(zhǔn)、法律法規(guī)的符合性10.1質(zhì)控內(nèi)容采用血清ELISA檢測法或核酸檢測法，對脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、毒核酸檢測應(yīng)為陰性。樣本采集、運(yùn)輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇等凍存液等）檢測。各類樣本中的內(nèi)毒素檢測值應(yīng)≤0.58采用流式細(xì)胞術(shù)以及ELISA技術(shù)測定脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞對于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對不同色，讀取細(xì)胞數(shù)并計(jì)算活率。各代數(shù)及批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞活細(xì)各代數(shù)及批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物表達(dá)應(yīng)符合流式檢測比例要求，單一細(xì)胞系的脂肪間充質(zhì)CD31、CD34、CD45、HLA-DR陽性率采用ELISA技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)測定經(jīng)炎癥因子(IFN-γ與TNF-α)誘導(dǎo)后脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞中吲哚胺2，3-雙加氧酶(IDO)的表達(dá)和功能，以及對于活化的人總淋巴細(xì)胞的增殖和對不同淋巴細(xì)胞亞群增9每一批次脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞制劑在臨床使用前應(yīng)在完成例行質(zhì)量檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上，由干細(xì)胞臨床研11.1質(zhì)量評價內(nèi)容格。試