比色法原理課件

1吸光光度法

原理1吸光光度法

2一吸光光度法的基本原理特點靈敏度高：測定下限可達10－5～10－6mol/L,10-4%～10-5%準確度能夠滿足微量組分的測定要求：相對誤差2～5％（1～2％）操作簡便快速應用廣泛

吸光光度法是基于被測物質(zhì)的分子對光具有選擇性吸收的特性而建立起來的分析方法。2一吸光光度法的基本原理特點吸光光度法是基31.光的基本性質(zhì)

電磁波的波粒二象性磁場向量電場向量傳播方向YZX與物質(zhì)作用31.光的基本性質(zhì)電磁波的波粒二象性磁場向量電場向量傳播方4波粒二象性結論:一定波長的光具有一定的能量，波長越長(頻率越低)，光量子的能量越低。單色光：具有相同能量(相同波長)的光?；旌瞎猓壕哂胁煌芰?不同波長)的光復合在一起。真空中:4波粒二象性結論:一定波長的光具有一定的能量，波長越真空中:5光學光譜區(qū)遠紫外近紫外可見近紅外中紅外

遠紅外（真空紫外）10nm~200nm200nm

~380nm380nm

~780nm780nm~2.5m2.5m

~50m50m

~300m5光學光譜區(qū)遠紫外近紫外可見近紅外中紅外遠紅外（真空62.溶液中溶質(zhì)分子對光的吸收與吸收光譜/nm顏色互補光400-450紫黃綠450-480藍黃480-490綠藍橙490-500藍綠紅500-560綠紅紫560-580黃綠紫580-610黃藍610-650橙綠藍650-760紅藍綠不同顏色的可見光波長及其互補光62.溶液中溶質(zhì)分子對光的吸收與吸收光譜/nm顏色互補光7300400500600700/nm350525545Cr2O72-MnO4-1.00.80.60.40.2AbsorbanceCr2O72-、MnO4-的吸收光譜3507300400500600700/nm3505255483.光吸收基本定律:Lambert-Beer定律A=lg(I0/It)=kbcItI0bdxII-dIs朗伯定律(1760)A=lg(I0/It)=k1b比爾定律(1852)A=lg(I0/It)=k2c吸光度介質(zhì)厚度(cm)在自動分析儀中體現(xiàn)為比色杯厚度83.光吸收基本定律:Lambert-Beer定律A=l9吸光度A、透射比T與濃度c的關系ATcA=kbc9吸光度A、透射比T與濃度c的關系ATcA=kbc10吸光度與光程的關系A=bc

光源檢測器0.00吸光度檢測器b樣品光源0.22吸光度光源檢測器0.44吸光度b樣品b樣品10吸光度與光程的關系A=bc光源檢測器0.00吸11吸光度與濃度的關系

A=bc

吸光度0.00光源檢測器

吸光度0.22光源檢測器b

吸光度0.42光源檢測器b11吸光度與濃度的關系A=bc吸光度0.00光源1201234mg/mlA。。。。*0.80.60.40.20溶液濃度的測定A＝bc工作曲線法(校準曲線)朗伯-比爾定律的分析應用120123413二光度分析的方法和儀器

(一)光度分析的幾種方法方便、靈敏，準確度差。常用于限界分析。觀察方向1.目視比色法c4c3c2c1c1c2c3c413二光度分析的方法和儀器

(一)光度分析的幾種方法142.光電比色法通過濾光片得一窄范圍的光(幾十nm)光電比色計結構示意圖靈敏度和準確度較差142.光電比色法通過濾光片得一窄范圍的光(幾十nm)光電153.吸光光度法和分光光度計光源單色器吸收池檢測系統(tǒng)穩(wěn)壓電源分光光度法的基本部件通過棱鏡或光柵得到一束近似的單色光.波長可調(diào),故選擇性好,準確度高.153.吸光光度法和分光光度計光源單色器吸收池檢測系統(tǒng)穩(wěn)壓16分光光度計的主要部件光源：發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠 的光強度,穩(wěn)定。 可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm)

紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)單色器：將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的 裝置。

棱鏡:玻璃350～3200nm,石英185～4000nm

光柵:波長范圍寬,色散均勻,分辨性能好,使用方便16分光光度計的主要部件光源：發(fā)出所需波長范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，17吸收池：(比色皿)用于盛待測及參比溶液。 可見光區(qū)：光學玻璃池 紫外區(qū)：石英池檢測器：利用光電效應，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號。 光電池，光電管，光電倍增管指示器： 低檔儀器：刻度顯示（p307，圖8.12)

中高檔儀器：數(shù)字顯示，自動掃描記錄17吸收池：(比色皿)用于盛待測及參比溶液。18(二)分光光度計的類型18(二)分光光度計的類型19多通道儀器（MultichannelInstruments）

光電二極管陣列(通常具有316個硅二極管)photodiodearrays(PDAs)

同時測量200～820nm范圍內(nèi)的整個光譜,比單個檢測器快316倍,信噪比增加