高效液相色譜法測定食品中的巴特妥

高效液相色譜法測定食品中的巴特妥

隨著社會的發(fā)展，工作和生活節(jié)奏加快，壓力增大，失眠、夢想和焦慮已成為人們的共同問題。國家食品藥品監(jiān)督管理局出臺的補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目的批準(zhǔn)件1材料和方法1.1標(biāo)準(zhǔn)品與色譜柱氯氮卓（CAS58-25-3）、馬來酸咪達(dá)唑侖（CAS59467-94-6）、硝西泮（CAS:146-22-5）、艾司唑侖（CAS29975-16-4）、奧沙西泮（CAS604-75-1）、阿普唑侖（CAS28981-97-7）、勞拉西泮（CAS846-49-1）、氯硝西泮（CAS1622-61-3）、三唑侖（CAS28911-01-5）、地西泮（CAS439-14-5）、苯巴比妥（CAS50-06-6）、司可巴比妥（CAS76-73-3）、異戊巴比妥（CAS57-43-2）標(biāo)準(zhǔn)品：SIGMA-ALDRICH公司，標(biāo)準(zhǔn)品均為液體，質(zhì)量濃度1.0mg/mL，純度大于98.0%；巴比妥（CAS57-44-3):InternationalLaboratoryUSA，固體，純度大于98.0%。色譜柱，AgilentPoroshell120EC-C模擬陽性樣品（取褪黑素維生素B甲醇、乙腈色譜純（德國Merck公司）；乙酸、甲醇分析純（國藥集團(tuán)）；試驗(yàn)用水為經(jīng)超純水儀（英國ELGA）處理的一級水。1.2冷凍離心（電子天平）公司Aglient1260II高效液相色譜儀（配DAD檢測器，美國安捷倫公司）；冷凍離心機(jī)（美國貝克曼庫爾特公司）；電子天平（梅特勒，感量0.0001g）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（東京理化器械株式會社）；混勻振蕩器（Heidolph公司）；移液器（德國普蘭德公司）。1.3測試方法1.3.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液的制備準(zhǔn)確稱取0.0100g巴比妥固體標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，加入色譜甲醇溶解后，定容至刻度，制得1.0mg/mL巴比妥標(biāo)準(zhǔn)儲備液；準(zhǔn)確移取0.25mL14種標(biāo)準(zhǔn)品溶液（質(zhì)量濃度1.0mg/mL）于5mL容量瓶中，用色譜甲醇定容至刻度，搖勻，配制成50μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-20℃貯藏。臨用前，用色譜甲醇配制成相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于4℃貯藏。1.3.2檢測波長的確定流動相條件：參考國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件及相關(guān)文獻(xiàn)檢測波長選擇：采用紫外檢測器，全波長掃描，光譜波長范圍190～400nm。1.3.3方法研究1.3.3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取50μg/mL的14種非法添加物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液貯備液，用甲醇稀釋成濃度梯度2,5,10,20和50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，以各組分的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，峰面積（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行回歸分析，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；以3倍基線噪聲（3）所對應(yīng)的濃度作為測定方法的檢出限（S1.3.3.加標(biāo)回收和相對偏差測定取6個(gè)平行空白樣品（未檢出上述非法化學(xué)添加物），加入14種混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，使每個(gè)空白樣品最終加標(biāo)濃度為10mg/kg，按照1.3.4的方法進(jìn)行前處理，上機(jī)，測定峰面積和保留時(shí)間，并在0,2,4,8和24h各進(jìn)樣1次，記錄不同時(shí)間點(diǎn)14種非法添加物的峰面積，計(jì)算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（S1.3.3.加標(biāo)回收率的測定取某鎮(zhèn)靜安神類膠囊（陰性樣品），并向其中添加低、中、高3個(gè)水平濃度的14種非法化學(xué)添加物的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每組3個(gè)平行，計(jì)算各成分的回收率。1.3.3.4專業(yè)試驗(yàn)取模擬陽性樣品及褪黑素維生素B1.3.4樣品處理和濃縮片劑、丸劑等大顆粒固體樣品粉碎后混勻，膠囊取內(nèi)容物，準(zhǔn)確稱取5.00g供試樣品于150mL雞心瓶中，加約30mL三氯甲烷，超聲處理20min，放至室溫，減壓濃縮至近干，準(zhǔn)確加入5mL色譜甲醇，渦旋溶解后，過0.22μm有機(jī)膜，待上機(jī)。2結(jié)果與分析2.1液相方法的確定流動相采用等度洗脫方法，分析時(shí)間過長，不利于常規(guī)分析，國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件（編號2009024）中的液相方法采用的就是等度洗脫法，14種化合物的分析時(shí)間大于60min；采用乙腈（B）-體積分?jǐn)?shù)0.2%乙酸（A）的流動相體系，進(jìn)行梯度洗脫（見表1），在此梯度程序下，各組分的峰形較好，分離度符合分析要求，分析時(shí)間短（15min），這也可能是與使用粒徑更小的色譜柱有關(guān)，使得各組分得到更好的分離效果，并且乙酸溶液可促進(jìn)電離，提高離子化效率，有利于后期進(jìn)行質(zhì)譜分析方法的開發(fā)，因此確定采用該流動相體系。2.2檢測波長的選擇通過全波長掃描，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在210nm處為巴比妥、苯巴比妥、異戊巴比妥、司可巴比妥、氯硝西泮的最大吸收波長，220nm處為馬來酸咪達(dá)唑侖、硝西泮、艾司唑侖、阿普唑侖、三唑侖的最大吸收波長，230nm處為奧沙西泮、勞拉西泮、地西泮的最大吸收波長，246nm處為氯氮卓的最大吸收波長，比較14種化合物在上述幾個(gè)波長的檢測靈敏度后，綜合考慮檢測靈敏度及效率值（無需切換波長），方便定量，選用210nm波長作為14種化合物的檢測波長。2.3方法的線性范圍、標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量限采用1.3.3.1的方法對該方法的檢出限、定量限及線性關(guān)系進(jìn)行考察，結(jié)果如表2所示。由表2可以看出，在2～50μg/mL范圍內(nèi)，14種非法添加物的線性關(guān)系良好，線性相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.9990，方法的檢出限為0.06～0.6mg/kg，定量限為0.2～1.8mg/kg，說明該試驗(yàn)方法靈敏度好，準(zhǔn)確度高。2.4準(zhǔn)確度和穩(wěn)定性試驗(yàn)精密度和穩(wěn)定性：按照1.3.3.2方法進(jìn)行處理和計(jì)算，結(jié)果見表3。由表3可知，6個(gè)平行樣品中14種非法添加物的峰面積S2.5方法回收率和精密度為考察試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性和可行性，試驗(yàn)選取某鎮(zhèn)靜安神類膠囊（陰性樣品），并向其中添加低、中、高（2.0,4.0和8.0mg/k