微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室軍團(tuán)菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室軍團(tuán)菌屬檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.概述軍團(tuán)菌屬細(xì)菌是一群病死率較高的急性呼吸道傳染病的病原菌，該菌屬包括45個(gè)種（60多個(gè)血清型），已從人體分離出的有嗜肺軍團(tuán)菌、米克戴德軍團(tuán)菌、波茲曼軍團(tuán)菌等20種。嗜肺軍團(tuán)菌是軍團(tuán)菌屬的代表種。2.標(biāo)本類型痰等標(biāo)本。3.鑒定3.1形態(tài)與染色革蘭陰性纖細(xì)小桿菌。熒光顯微鏡下可見(jiàn)被熒光抗體包被的發(fā)亮菌體。3.2培養(yǎng)特性在緩沖活性炭酵母提取物瓊脂（BCYE）培養(yǎng)基上，本菌生長(zhǎng)緩慢，應(yīng)每日觀察生長(zhǎng)情況，在BCYE上需要3~5日方可見(jiàn)菌落，數(shù)日后增大到4~5mm，菌落呈灰白色，有光澤。3.3生化反應(yīng)大部分菌株氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性，不分解糖類，動(dòng)力、明膠、馬尿酸鈉試驗(yàn)陽(yáng)性，觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性，多數(shù)菌株產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶。3.4鑒別要點(diǎn)3.4.1本菌屬特征革蘭陰性細(xì)小桿菌，有多形性，蘇丹黑染色可顯藍(lán)黑色或藍(lán)灰色脂肪滴。在BCYEα平板上3~5日形成藍(lán)灰色、有光澤的菌落。普通瓊脂平板上不生長(zhǎng)。3.4.2根據(jù)在BCYEα瓊脂上生長(zhǎng)的菌落，在紫外線365nm燈光照射下產(chǎn)生紅色熒光可推斷為紅色軍團(tuán)菌；產(chǎn)生藍(lán)白色熒光，如氧化酶陽(yáng)性，則為博氏和其他軍團(tuán)菌，如氧化酶陰性，則為杜氏、戈氏、徹氏、圖森山軍團(tuán)菌；產(chǎn)生無(wú)色熒光，則根據(jù)馬尿酸水解、氧化酶及其他生化反應(yīng)進(jìn)一步鑒定。3.5操作步驟3.5.1涂片、染色革蘭陰性桿菌。3.5.2鑒定直接熒光抗體染色，生化反應(yīng)。4.藥敏參見(jiàn)《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》及CLSIM100-S20最新版本文件。5.質(zhì)量控制見(jiàn)《質(zhì)量管理程序》。6.檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析本菌雖然營(yíng)養(yǎng)要求和培養(yǎng)環(huán)境要求嚴(yán)格，但在外環(huán)境分布較廣，并可長(zhǎng)期存活，致使通過(guò)污染水源空氣而傳播致病。從臨床或環(huán)境標(biāo)本中分離軍團(tuán)菌時(shí)，需先對(duì)標(biāo)本作酸處理（軍團(tuán)菌耐酸而其他雜菌則易被酸殺滅），并使用選擇性瓊脂平板（在BCYEα瓊脂平板上加入抗生素等抑制雜菌），以提高軍團(tuán)菌的檢出率。軍團(tuán)菌對(duì)多種抗菌藥物敏感，包括紅霉素、利福平、氨基糖苷類抗生素、β-內(nèi)酰胺抗生素、復(fù)方磺胺甲惡唑、多西環(huán)素和福喹諾酮類等。7.臨床意義軍團(tuán)菌是一種以肺部感染為主的全身性疾病，嗜肺軍團(tuán)菌是軍團(tuán)菌病的病原菌，可通過(guò)空氣傳播進(jìn)入肺臟，臨床表現(xiàn)多種多樣。易于侵犯患有慢性器質(zhì)性疾病、免疫功能低下的病人。也可從河水、空調(diào)的冷卻水、浴室和霧化器等處分離到，為醫(yī)院感染的主要致病菌之一。8.鑒定流程痰痰BCYEα瓊脂平板3~5日有灰白色有光澤菌落熒光抗體染色，生化鑒定軍團(tuán)菌屬涂片染色G-桿菌參考文獻(xiàn)[1]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解，第二版，上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2007[2]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編，全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程，第三版，南京：東南大學(xué)出版社，2006[3]中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)，CNAS-GL23:2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南，