HPLC流動相的注意事項

HPLC流動相的注意事項>>流動相的作用流動相具有運載樣品分子的作用。流動相還具有選擇性分離的作用。當固定相一定時，流動相的種類、配比和流動速度都嚴重影響分離效果>>流動相的種類液相色譜所用流動相根據(jù)分析目的可分為單一或混合流動相?；旌狭鲃酉噙€可分為比例固定和比例可變流動相。梯度洗脫就是使用比例可變流動相。>>流動相使用的注意事項流動相的級別流動相的處理——過濾和脫氣流動相的置換>>流動相的級別-水水是最常見的極性溶劑因為不純物的存在，去離子水的吸光率較高。$波長（nm）去離子水純化水>>流動相的級別-因為不純物的存在，去離子水的吸光率較高。$波長（nm）去離子水純化水>>流動相的級別-有機試劑純化水中去除了無機和有機的污染物，因此吸光率降低。采用“HPLC”級溶劑溶劑級別-HPLC級-優(yōu)級純-分析純1溶劑級別-HPLC級-優(yōu)級純-分析純2、優(yōu)級純的純度比分析純大,但里面含有極微量的防腐劑和抗氧化劑，這些添加劑往往有紫外吸收3、HPLC級經(jīng)過0.2um濾膜的過濾,且除去有紫外吸收的雜質(zhì)。>>分析純級和HPLC級溶劑的吸光度比較圖>>流動相的處理——過濾?使用0.45um或更小孔徑濾膜過濾，注意濾膜的種類。?目的：除去溶劑中的微小顆粒，避免堵塞管路和色譜柱，尤其是使用無機鹽配制的緩沖液時。>>濾膜類型1、聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽。2、醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶劑。3、尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可以用于強酸，不適用于二甲基甲酰胺。4、再生纖維素濾膜：蛋白吸收低，同樣適用于水溶性樣品和有機溶劑。>>過濾的注意事項?不同的試劑分別過濾，過濾后再混合。?注意濾膜的選擇，不要混用。?要現(xiàn)用現(xiàn)處理，尤其是水和緩沖液。?要注意操作過程中的防塵。?試樣也必須過濾，可用一次性針頭式過濾器。>>流動相的處理——脫氣?目的：除去流動相中溶解或因混合而產(chǎn)生的氣泡。?使用梯度洗脫時要有在線脫氣裝置。?氣泡對測定的影響：1、造成壓力波動，影響保留時間。2、色譜柱中的氣泡會造成峰變形。3、檢測池中的氣泡會造成基線波動。>>脫氣的方法?1、超聲波振蕩脫氣?2、氦氣置換清除法?3、使用樹脂膜的減壓脫氣法?應根據(jù)實際的使用情況選擇合適的脫氣方法。單一流動相或配合好的混合流動相可以采用超聲振蕩脫氣，梯度洗脫最好使用在線減壓脫氣。>>氦氣置換清除法

0阻尼管調(diào)3閥壓力表\AArn0阻尼管調(diào)3閥壓力表\AArn往送液泵岀口調(diào)節(jié)閥流動相>>使用樹脂膜的減壓脫氣法氟樹脂膜—往送液泵真空泵流動相氟樹脂膜—往送液泵真空泵流動相b占控制醫(yī)二>>流動相的置換?極性相似的試劑可以直接置換。?極性不同的試劑，應用中間試劑作過渡。例如：甲醇置換為正己烷時，可以考慮選