新型人工神經(jīng)導管講解課件

新型人工神經(jīng)導管修復周圍神經(jīng)缺損的臨床應用王華松張偉才黃繼鋒蔡賢華付強黃一拯吳剛廣州軍區(qū)武漢總醫(yī)院骨科解放軍骨創(chuàng)傷救治中心廣州軍區(qū)骨科研究所湖北省骨創(chuàng)傷醫(yī)學研究中心新型人工神經(jīng)導管修復周圍神經(jīng)缺損的臨床應用王華松張偉才黃繼解剖特點骨折分型康復鍛煉手術(shù)入路內(nèi)固定方式選擇臨床應用解剖特點背景骨折分型動物實驗典型病例研究計劃Keywords解剖特點骨折分型康復鍛煉手術(shù)入路內(nèi)固定方式選擇臨床應用解剖特周圍神經(jīng)損傷和缺損的治療是顯微外科的難題之一，為解決自體神經(jīng)來源有限、異體神經(jīng)存在免疫源性等問題，眾多學者致力于可替代移植物的開發(fā)。熱點：組織工程化人工神經(jīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Background周圍神經(jīng)損傷和缺損的治療是顯微外科的難題之一，為解決自體神經(jīng)周圍神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)基底膜無髓神經(jīng)有髓神經(jīng)RGD（精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸）基底膜的主要成分：纖維粘連蛋白

基膜粘層蛋白內(nèi)皮粘連蛋白膠原含有RGD解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心軸突天然神經(jīng)組織的組成及結(jié)構(gòu)軸突髓鞘

納米復合材料仿生設計

制備RGD多肽接枝聚(乳酸-羥基乙酸-L-賴氨酸)/聚乳酸/β-磷酸三鈣/復合神經(jīng)導管（PRGD/PDLLA/β-TCP，PRGD）

周圍神經(jīng)組織結(jié)構(gòu)基底膜無髓神經(jīng)有髓神經(jīng)RGD（精氨酸-甘氨酸解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心修復大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損修復犬30mm腓總神經(jīng)缺損AnimalExperiment解放軍武漢總醫(yī)院骨科修復大鼠10mm坐骨神經(jīng)缺損修復犬30m解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心獲得了湖北省食品藥品監(jiān)督管理局“醫(yī)療器械臨床試驗”的審批。符合CFDA第5號令《醫(yī)療器械臨床試驗規(guī)定》的臨床試驗的要求；通過倫理委員會討論同意臨床試用病例選擇：上肢周圍神經(jīng)缺損長度≤2.5cm2011.12~2013.12在我院骨科開展了15例ClinicalApplication解放軍武漢總醫(yī)院骨科獲得了湖北省食品藥品監(jiān)督管理局“醫(yī)療器械解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心

監(jiān)測指標觀察損傷神經(jīng)支配區(qū)域觸覺、痛覺和移動兩點辨別覺（M-2PD）恢復情況檢查損傷神經(jīng)支配肌肉的萎縮、肌力恢復及完成運動情況。電生理檢查觀察神經(jīng)傳導功能情況采用高頻超聲觀察導管內(nèi)外神經(jīng)生長情況，觀察受損神經(jīng)功能恢復情況

療效分析英國醫(yī)學研究會1954年頒布的標準評定，中華醫(yī)學會手外科學會上肢周圍神經(jīng)功能評定試用標準采用描述性統(tǒng)計計算功能改善率（%）解放軍武漢總醫(yī)院骨科監(jiān)測指標觀察損傷神經(jīng)支配區(qū)域觸覺解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心神經(jīng)陳舊性損傷（12例）

病例匯總（2011.12~2013.12）神經(jīng)新鮮損傷（3例）其中橈神經(jīng)損傷5例；尺神經(jīng)損傷5例；正中神經(jīng)損傷5例其中11例（共15例）術(shù)后功能不同程度恢復，未見不良反應解放軍武漢總醫(yī)院骨科神經(jīng)陳舊性損傷（12例）病例匯總（2男性，49歲；致左肱骨中下段骨折合并左肘上橈神經(jīng)完全斷裂，左手垂腕畸形，左手諸指背伸活動受限診斷：左橈神經(jīng)損傷處理：急診行左肱骨中下段骨折切開復位接骨板內(nèi)固定+橈神經(jīng)探查修復術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Case1：橈神經(jīng)損傷CaseReport男性，49歲；致左肱骨中下段骨折合并左肘上橈神經(jīng)完全斷裂，左術(shù)后2周左手垂腕畸形，伸腕伸指受限傷口一期愈合，無不良反應解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后2周左手垂腕畸形，伸腕伸指受限傷口一期愈合，無不良反應解術(shù)后6個月伸腕伸指功能部分恢復，感覺神經(jīng)傳導速度接近正常(48m/s)神經(jīng)纖維由近端向遠端沿管壁爬行生長，遠端神經(jīng)可探測到神經(jīng)血流信號運動功能高頻B超術(shù)后7.5個月伸腕伸指功能明顯改善再生神經(jīng)纖維由管壁向管腔中心生長，神經(jīng)血流信號較豐富運動功能高頻B超術(shù)后6個月伸腕伸指功能部分恢復，感覺神經(jīng)傳導速度接近正常(4伸腕伸指功能基本恢復，肌力達到4級，能對抗較大阻力做主動伸腕伸指活動；感覺神經(jīng)傳導速度44.6m/s，運動神經(jīng)傳導速度達到正常（65.8m/s）術(shù)后13個月再生神經(jīng)束近、遠端已橋接，神經(jīng)血流信號豐富（縱截面）再生神經(jīng)已充滿整個管腔（橫截面）神經(jīng)再生良好，斷端及再生神經(jīng)未見膨大高頻B超DP解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心伸腕伸指功能基本恢復，肌力達到4級，能對抗較大阻力做主動伸腕解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后23個月伸腕伸指功能恢復，活動自如探查示神經(jīng)再生良好，無神經(jīng)瘤形成；PRGD神經(jīng)導管已完全降解、吸收；取周圍組織行病理切片未見明顯不良反應。評分：伸腕＞45°（4分）；肌力＞M3（4分）；伸拇TAM活動范圍正常（優(yōu)4分）；伸指TAM＞健側(cè)的75%

（良3分）?？偡?5分，優(yōu)解放軍武漢總醫(yī)院骨科術(shù)后23個月伸腕伸指功能恢復，活動自如探Case2：尺神經(jīng)損傷男性，12歲，剪刀扎傷致左前臂中段尺神經(jīng)損傷1個月（外院未行探查修復），查體示左尺神經(jīng)支配區(qū)域觸覺、痛覺完全消失，環(huán)小指內(nèi)收外展障礙，爪形手畸形，F(xiàn)roment征（+），夾紙試驗（+）診斷：左尺神經(jīng)陳舊性損傷處理：行左尺神經(jīng)探查修復術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)前外觀Case2：尺神經(jīng)損傷男性，12歲，剪刀扎傷致左前臂中段尺術(shù)中照片解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)中照片解放軍武漢總醫(yī)院骨科術(shù)后15個月拇對小指功能基本恢復左手無明顯爪形手畸形，運動神經(jīng)傳導速度有所恢復（29.0m/s），感覺神經(jīng)未引出激發(fā)電位

解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心評分：感覺S3

（3分）；無爪形手畸形（4分）；屈指活動范圍正常（TAM優(yōu)4分）?？偡?1分，優(yōu)

術(shù)后15個月拇對小指功能基本恢復左手無明顯爪形手畸形，運動神Case3：正中神經(jīng)損傷女性，54歲；外傷致左前臂中上段正中神經(jīng)損傷，于外院行神經(jīng)探查修復術(shù)后8個月，左手拇指對掌不能、外展受限，拇、示、中指感覺減退診斷：左正中神經(jīng)神經(jīng)鞘瘤處理：行左正中神經(jīng)探查修復術(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心Case3：正中神經(jīng)損傷女性，54歲；外傷致左前臂中上段正術(shù)后6個月左拇指對掌功能明顯改善，可用拇指分別與余4指捏持筆在未施加外力及施加較大阻力下，左手主動屈腕均可達正常側(cè)80%左右解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后6個月左拇指對掌功能明顯改善，可用拇指分別與余4指捏持筆術(shù)后19個月左手拇指可分別與其余手指捏持硬幣（較精細物體），動作執(zhí)行流暢、連貫屈腕功能；肌電圖顯示神經(jīng)傳導速度有所恢復（運動29.80m/s；感覺34.50m/s）評分：感覺S3

（3分）；屈腕肌力M4（4分）；屈指TAM活動范圍正常（優(yōu)4分）；拇對掌基本正常（4分）?？偡?5分，優(yōu)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心術(shù)后19個月左手拇指可分別與其余手指捏持硬幣（較精細物體），小結(jié)改善率達73.3%等同于同類產(chǎn)品有效促進神經(jīng)再生未見明顯不良反應理想的神經(jīng)修復材料PRGD/PDLLA/β-TCP神經(jīng)導管Keypoint小結(jié)改善率達73.3%PRGD/PDLLA/β-TCP解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心PRGD/PDLLA/β-TCP單通道神經(jīng)導管改進方法引入神經(jīng)生長因子復合種子細胞，以期提高受損神經(jīng)的修復效果FurtherStudy解放軍武漢總醫(yī)院骨科PRGD/PDLLA/β-TCP單通道神解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心技術(shù)路線BMSCs體外分離培養(yǎng)、純化

動物體內(nèi)植入實驗

大體觀察、運動功能（SFI）神經(jīng)電生理評價（肌電圖）

BMSCs體外定向誘導分化及鑒定

組織學評價（光鏡、電鏡）

神經(jīng)導管體內(nèi)降解情況

實驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析

解放軍武漢總醫(yī)院骨科技術(shù)路線BMSCs體外分離培養(yǎng)、純化動ThankYou!

ThankYou!

新型人工神經(jīng)導管講解課件新型人工神經(jīng)導管講解課件解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心1.細胞培養(yǎng)及純化：無菌條件下分離8周齡雄性Wiatar大鼠雙側(cè)股骨和脛骨，完全培養(yǎng)基沖洗骨髓腔，沖洗液過濾、離心后接種到培養(yǎng)瓶；差速貼壁法進行體外擴增、純化。P0接種7dP3五、BMSCs體外分離培養(yǎng)及定向誘導分化接種24hP0接種3d解放軍武漢總醫(yī)院骨科1.細胞培養(yǎng)及純化：無菌條件下分離8周2.誘導方法：選取生長狀態(tài)良好的P3細胞，24孔板中每孔接種1000個細胞；待細胞貼壁后（接種1d）進行體外誘導，并設立平行對照組3.誘導條件：終濃度20ng/ml表皮生長因子（EGF）和20ng/ml堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），每天加入兩種生長因子，誘導8d后進行鑒定4.鑒定方法：常規(guī)固定、透膜、封閉后行免疫細胞化學鑒定。一抗（兔來源神經(jīng)元特異性烯醇化酶NSE）+CY3標記羊抗兔二抗；一抗（鼠來源神經(jīng)絲蛋白NF-M）+FITC標記羊抗小鼠IgG二抗；一抗（小鼠來源抗大鼠突觸素蛋白SYP）+FITC標記羊抗小鼠IgG二抗。解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心2.誘導方法：選取生長狀態(tài)良好的P3細胞，24孔板中每孔接誘導前誘導1d（胞質(zhì)回縮）誘導5d（神經(jīng)樣細胞改變，伸出2個或多個突起）解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心誘導8d（細胞連接成網(wǎng)狀）結(jié)果誘導前誘導1d（胞質(zhì)回縮）誘導5d（神經(jīng)樣細胞改變，伸出2個解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心平行對照NSE+CY3SYP+FITCNF-M+FITC誘導8d后，NSE、NF-M、SYP陽性率表達分別為70.3±4.2、25.7±1.6、3.6±0.5解放軍武漢總醫(yī)院骨科平行對照NSE+CY3SYP+FITCN

1.細胞準備：選取生長狀態(tài)良好的P3BMSCs，EGF與bFGF聯(lián)合誘導8d，收集細胞，調(diào)整密度為107/ml，備用。同時準備同樣密度的未誘導BMSCs移植的導管長16mm，內(nèi)徑3.0mm，壁厚0.2mm，低溫環(huán)氧乙烷消毒備用。

解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心六、動物體內(nèi)植入實驗1.細胞準備：選取生長狀態(tài)良好的P3BMSCs，EGF

2.

實驗分組：成年雄性Wistar大鼠40只，體重180-200g，隨機分為4組，每組10只左側(cè)為實驗側(cè)，右側(cè)為正常自身對照側(cè)解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心A、PNGF導管組B、PNGF復合BMSCs組C、PNGF復合BMSC-NCs組D、自體神經(jīng)移植組BCDA2.實驗分組：成年雄性Wistar大鼠40只，體重1解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心3.手術(shù)方法

A組：0.8%戊巴比妥鈉40mg/Kg腹腔注射麻醉后，固定四肢，備皮，術(shù)野消毒、鋪巾，沿左大腿后外側(cè)做縱行切口，充分暴露坐骨神經(jīng)，距梨狀肌下緣下造12mm坐骨神經(jīng)缺損。顯微鏡下將兩斷端各植入導管內(nèi)2mm，10-0無創(chuàng)線將神經(jīng)外膜與管壁縫合3針固定

B、C組在導管固定后，分別于兩側(cè)向?qū)Ч軆?nèi)注入上述兩種細胞各10ul（即每根導管內(nèi)注入細胞5×105個細胞）

D組（自體神經(jīng)移植組）切除12mm坐骨神經(jīng)作為移植段，將移植段神經(jīng)逆行放置，縫合神經(jīng)外膜

逐層縫合切口，分籠喂養(yǎng)。解放軍武漢總醫(yī)院骨科3.手術(shù)方法小腿三頭肌濕重恢復率電生理小腿三頭肌細胞截面積恢復率（HE染色）組織學評價坐骨神經(jīng)功能指數(shù)大體與形態(tài)學觀察實驗動物HE染色亞甲藍髓鞘染色圖像分析4.監(jiān)測指標解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心小腿三頭肌濕重恢復率電生理小腿三頭肌細胞截面積恢復率（HE染術(shù)后切口愈合良好，無異物反應術(shù)后2w出現(xiàn)不同程度紅腫、潰瘍解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.結(jié)果術(shù)后切口愈合良好，無異物反應術(shù)后2w出現(xiàn)不同程度紅腫、潰瘍解解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心SFI=-38.3[(EPL-NPL)/NPL]+109.5[(ETS-NTS)/NTS]+13.3[(EIT-NIT)/NIT]-8.8*B、C、D組與A組比較，p＜0.0015.1.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)解放軍武漢總醫(yī)院骨科SFI=-38.3[(EPL-NPL)/解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.2.電生理#*B組與A組比較，p＜0.05；△D組與B組比較，p＜0.05；#C、D組與A組比較，p＜0.001MCV測定方法解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.2.電生理#*B組與A組比較，p＜0解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.3.小腿三頭肌濕重恢復率*B、C、D組與A組比較，p＜0.001；#D組與B組比較，p＜0.05解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.3.小腿三頭肌濕重恢復率*B、C、D5.4.肌細胞截面積恢復率A組B組C組D組正常*B、C、D組與A組比較，p＜0.0015.4.肌細胞截面積恢復率A組B組C組D組正常*B、C、D組解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心5.5.再生神經(jīng)再生神經(jīng)切片圖示各組再生神經(jīng)解放軍武漢總醫(yī)院骨科5.5.再生神經(jīng)再生神經(jīng)切片圖示各組再生解放軍武漢總醫(yī)院骨科廣州軍區(qū)骨科研究所解放軍骨創(chuàng)傷救治中心再生神經(jīng)組織學觀察HE染色亞甲藍染色A組B組C組D組解放軍武漢總醫(yī)院骨科再生神經(jīng)組織學觀察HE染色亞甲藍染色A組