hplc法同時檢測苯磺酸氨氯地平中7個雜質(zhì)

hplc法同時檢測苯磺酸氨氯地平中7個雜質(zhì)

苯磺酸氨基丙烯酸酯是美國輝瑞制藥公司在20世紀80年代中期開發(fā)的一種新型抗高血壓藥物二羥吡啶。它主要用于治療高血壓和心絞痛。這是治療高血壓的首選藥物之一。該藥在合成時以及制劑的生產(chǎn)、貯存過程中,可能會產(chǎn)生工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)(共有7個),分別為氨氯地平雜質(zhì)A、B、D、E、F、G、H。因此控制這些雜質(zhì)在本品中的含量對保證用藥安全具有重要意義。其有關物質(zhì)檢測方法EP9.01雜質(zhì)對照品、苯磺酸氨氯地平片安捷倫1260高效液相色譜儀;十萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)。氨氯地平雜質(zhì)A、B、D、E、F、G、H對照品(深圳博泰爾公司);苯磺酸氨氯地平對照品(中國食品藥品檢定研究院);苯磺酸氨氯地平片(規(guī)格5mg,批號1601201,亞寶藥業(yè));甲醇、乙腈為色譜純;磷酸、氨水為分析純;水為純凈水。2方法和結果2.1條件1色譜柱:C2.2溶液的制備2.2.1稀釋劑取流動相A和B,以75∶25比例混合,作為稀釋液。2.2.2空白輔料溶液稱取按照處方比例混合的空白輔料細粉適量,置50mL量瓶中,加稀釋液約40mL,超聲處理30min,取出,放冷,用稀釋液稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為空白輔料溶液。2.2.3標準物質(zhì)：氨基氯二平取苯磺酸氨氯地平對照品適量,精密稱定,用稀釋液配成濃度為10μg·mL2.2.4標準物質(zhì)的雜質(zhì)對照溶液分別取氨氯地平雜質(zhì)A、B、D、E、F、G、H對照品適量,精密稱定,分別用稀釋液配成濃度為2μg·mL2.2.5雜質(zhì)濃度的配制稱取苯磺酸氨氯地平對照品約14mg(相當含氨氯地平10mg),精密稱定,置10mL量瓶中,加稀釋劑適量使其溶解,再加入各雜質(zhì)貯備液適量,用稀釋液配成各雜質(zhì)濃度分別為2μg·mL2.3方法學的檢驗2.3.1系統(tǒng)適用性試驗和色譜峰干擾試驗在“2.1”色譜條件下依次進樣稀釋液、空白輔料溶液、系統(tǒng)適用性溶液、氨氯地平對照品溶液、各雜質(zhì)對照品溶液和供試品溶液,結果表明,稀釋液和空白輔料溶液在氨氯地平及其7個雜質(zhì)出峰位置處均無顯著色譜峰干擾。見圖1。2.3.2系統(tǒng)適用性考察在“2.1”色譜條件下,對氨氯地平對照品溶液連續(xù)進樣6針,峰面積RSD為0.1%,小于5.0%,在系統(tǒng)適用性溶液中,氨氯地平和各雜質(zhì)間的最小分離度為2.47,大于1.5,該系統(tǒng)適用性良好。2.3.3檢測限和定量限取氨氯地平對照品溶液和各雜質(zhì)對照品溶液,經(jīng)逐級稀釋制成檢測限(LOD,S/N≥3)和定量限(LOQ,S/N≥10)溶液,在“2.1”色譜條件下進行檢測,各組分的檢測限濃度均小于供試品濃度的0.01%,各組分的定量限濃度均小于供試品濃度的0.03%,能夠滿足所有雜質(zhì)的質(zhì)量控制要求,方法靈敏度良好。見表1。2.3.4定量限取氨氯地平對照品溶液和各雜質(zhì)對照品溶液適量,分別從各雜質(zhì)定量限到限度濃度150%范圍內(nèi),取不少于5個濃度的對照品溶液,按“2.1”色譜條件測定,以各對照品的峰面積為縱坐標(Y),以各對照品濃度為橫坐標(X,μg·mL2.3.5雜質(zhì)校正因子根據(jù)“2.3.4”項下方法分別對各組分做兩條線性回歸方程,用氨氯地平與各雜質(zhì)線性回歸方程斜率比值計算雜質(zhì)校正因子,取兩次校正因子的平均值來確定各雜質(zhì)的校正因子,經(jīng)計算可知,雜質(zhì)A、D、G、H的校正因子分別為0.7、2.2、0.8、1.3;雜質(zhì)B、E、F的校正因子均為1.0。二次的校正因子的測定誤差極小,說明該方法的耐用性好,使用自身對照準確度高。2.3.6色譜條件下雜質(zhì)的測定由于樣品中常不含有所有雜質(zhì),為證明該法對所有符合質(zhì)量標準的產(chǎn)品適用,在測定樣品時同時測定加入雜質(zhì)(加入100%限度)的樣品,在“2.1”色譜條件下由兩位實驗員分別于不同時間使用不同儀器和色譜柱、平行制備6份供試品溶液和6份限度雜質(zhì)100%供試品溶液,結果顯示,在實驗員A和B的6份供試品溶液中,雜質(zhì)D%和總雜%的RSD(n=6)和RSD(n=12)均小于18.0%;在6份雜質(zhì)限度100%供試品溶液中,各雜質(zhì)回收率均在80.0%～120.0%,且RSD(n=6)和RSD(n=12)均小于10.0%,精密度良好,能夠滿足質(zhì)量的控制要求。2.3.7加樣回收率各組分的檢測結果在處方比例混合的空白輔料中,分別加入從LOQ到限度濃度150%范圍的各組分,計算各加樣回收率,各組分在LOQ水平對應回收率在86.5%～124.9%,在限度50.0%～150.0%對應得回收率在93.2%～115.7%,12份回收率的RSD%均小于7.3%,結果表明方法準確度較高。見表3。2.3.8溶液穩(wěn)定性考察取“2.2.3”配制的氨氯地平對照品溶液和“2.2.6”配制的供試品溶液,在“2.1”色譜條件下考察溶液穩(wěn)定性,結果表明,氨氯地平對照品溶液在室溫下放置69h穩(wěn)定性良好(與0h相比回收率為101.3%),供試品溶液在57h內(nèi)穩(wěn)定性良好(與0h相比各雜質(zhì)變化率均小于10.0%),溶液穩(wěn)定性良好。2.3.9耐試驗通過調(diào)整色譜柱、柱溫(±5℃)、波長(±2nm)、流速(±0.1mL·min3濾膜材質(zhì)的選擇3.3三乙胺是HPLC法常見的添加劑,但其噪音很大,而且對柱有一定的損害,現(xiàn)在使用封尾處理的色譜柱可以達到相同的效果,鑒于此沒有采用《中國藥典》3.1實驗分別采用PTFE材質(zhì)和尼龍6材質(zhì)為濾膜進行吸附考察,發(fā)現(xiàn)后者過濾時出現(xiàn)保留時間為42min的未知峰,且該峰與雜質(zhì)A相鄰,分離度大于2.2,經(jīng)過查證為濾膜引入的峰,且與棄去初濾液的體積有關。濾膜材質(zhì)選擇不當