醫(yī)學(xué)免疫學(xué)- 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)Immunodiagnosis第一節(jié)抗原或抗體檢測(cè)I.Detectionofantigensorantibodies一、抗原-抗體反應(yīng)的特點(diǎn)Specificity（一）高度特異性

Cross-reaction:commonantigen

交叉反應(yīng)：共同抗原

Antiserumabsorption

抗血清吸收

1stantibody&2ndantibody

一抗；二抗Reversibility/invertibility:（二）可逆性non-covalent,surface-binding,dissociable

非共價(jià)、表面結(jié)合，可解離complementarycapacity:affinity;avidity互補(bǔ)程度：親和力；親合力Visibility（三）可見(jiàn)性的條件Compatibleconcentrationsofantigenandantibodycombinedinproportionatornearequivalence[Antigen:multivalent;Antibody(IgG):divalent]

比例適合：抗原多價(jià)，抗體2價(jià)。交織成網(wǎng)。Phvalue;Temperature;Ionicconcentration

條件適宜：酸堿度、溫度、離子濃度Adequateconcentration,bindingstrength;reactiontime

足夠濃度、結(jié)合強(qiáng)度和反應(yīng)時(shí)間Prozonephenomenon

前帶現(xiàn)象二、抗原-抗體反應(yīng)的應(yīng)用Terms術(shù)語(yǔ)Serologicalreaction血清學(xué)反應(yīng)Qualitativeanalysis定性Quantitation定量Orientation定位Titration滴定Titer效價(jià)/滴度三、常用的抗原-抗體反應(yīng)技術(shù)經(jīng)典技術(shù)中和反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)I)Agglutination（一）凝集反應(yīng)：顆粒性抗原或包被有可溶性抗原的顆粒

+相應(yīng)抗體

肉眼可見(jiàn)的凝集塊1.直接凝集顆粒性抗原+相應(yīng)抗體玻片凝集：抗原定性（ABO血型）試管凝集：抗體定量（肥達(dá)反應(yīng)）2.間接凝集包被有可溶性抗原的顆粒

+相應(yīng)抗體

紅細(xì)胞（間接血凝）；乳膠（間接乳凝）

Coombs’Test:紅細(xì)胞（Rh抗原）+不完全抗體+抗人球蛋白3.派生的試驗(yàn)

反向間接凝集反應(yīng)：包被抗體的顆粒+抗原間接凝集抑制反應(yīng)：（乳膠妊娠試驗(yàn)）

抗體+未知抗原+包被有相應(yīng)可溶性抗原的顆粒凝集？HaemagglutinationII)Precipitation（二）沉淀反應(yīng)可溶性抗原+相應(yīng)抗體

肉眼可見(jiàn)的沉淀物

使用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)——瓊脂擴(kuò)散/免疫擴(kuò)散1.單向免疫擴(kuò)散：抗原的定量（Ig、C3）2.雙向免疫擴(kuò)散：抗原/抗體的定性、組成及Ag相關(guān)性分析3.免疫電泳：電泳+雙向免疫擴(kuò)散（抗原分析）4.對(duì)流電泳：雙向免疫擴(kuò)散+電泳（抗原/抗體定性）5.火箭電泳：?jiǎn)蜗蛎庖邤U(kuò)散+電泳（抗原定量）免疫比濁：抗體+遞增量抗原比濁（抗原定量）III)ImmunolabellingTechniques

（三）免疫標(biāo)記技術(shù)標(biāo)記物：熒光素、酶、放射性核素、電子致密物質(zhì)、化學(xué)發(fā)光物質(zhì)標(biāo)記對(duì)象：抗原或抗體用途：定性、定量、定位免疫熒光法（IFA）

熒光素可雙色；使免疫復(fù)合物呈熒光；可定性、定位（1）直接熒光法（2）間接熒光法：熒光素一抗熒光素二抗對(duì)每種抗體作標(biāo)記不必標(biāo)記每種抗體特異敏感測(cè)Ag測(cè)Ag/Ab免疫熒光法2.酶免疫測(cè)定（EIA）:ELISA與酶免疫組化（1）雙抗體夾心法ELISA：查抗原（2）間接法ELISA：查抗體（3）BAS-ELISA：Biotin-Avidin-酶放大系統(tǒng)（4）ELISPOT測(cè)定法：__包被物待測(cè)物測(cè)定結(jié)果___

抗CK抗體CK分泌細(xì)胞單一CK已知抗原B細(xì)胞特異B細(xì)胞（5）酶免疫組化*酶標(biāo)抗體+組織/細(xì)胞（未知抗原）+形態(tài)學(xué)檢查*免疫組化技術(shù)：可對(duì)抗原定性、定量、定位酶免疫組化：HRP免疫金銀組化：膠體金顆粒免疫電鏡技術(shù)：HRP、膠體金、鐵蛋白雙抗體夾心法、間接法ELISA間接法ELISAELISA操作圖可調(diào)移液器8孔道可調(diào)移液器3.放射免疫測(cè)定（RIA）常用125I，測(cè)定微量物質(zhì)4.化學(xué)發(fā)光免疫分析常用魯米諾，測(cè)定超微量物質(zhì)5.免疫印跡法（WesternBlotting）先做凝膠電泳將蛋白質(zhì)分區(qū)再將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體后用酶免疫、放射免疫等技術(shù)加以測(cè)定第二節(jié)免疫細(xì)胞的測(cè)定一、淋巴細(xì)胞的分離與類型鑒定（一）血細(xì)胞分離

外周血密度梯度離心法外周血單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞+單